המחברים בתודה להכיר מימון מניטור יער ארה&quot;ב ההערכה להגנת בריאות שירות יערות והתוכניות מיוחדות לפיתוח טכנולוגיה שתמך בהתפתחות, שינוי והיישום של הפרוטוקול המתואר כאן לזהות עצים, כי הם עמידים ורגישים לחרקים בקנה מידה אשור. כמו כן אנו מודים להולדן גנים בוטניים, Kirtland, אוהיו, לשותפות שלהם מתמשכת ותמיכה של התכנית שלנו אמריקאי אשור התנגדות ההקרנה.

1 צמח חומר:. למבוגרים שדה עצים, שתילי עציצים, או עציצים שתלי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתחום בדיקות, בחר עצים בוגרים בריאים אמריקאים אשור שלא מראים סימנים של התפשטות בקנה מידה או מחלה לבדיקת התנגדות אפשרית. בעליל עצים רגישים גם צריכים להיות מזוהים כדי לשמש כביקורת (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבדיקת שתילים או שתלים בעציץ, לאסוף ולנבוט beechnuts כפי שמתואר בקוך וקארי, 2004 או נצר שתל כמתואר בקארי ואח&#39;, 2013. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גדל שתילים או שתלים בשתילת תערובת אדמה מתוקנת עם 47 micronutrients גרם, 477 גרם דשן שחרור 15N-3.9P-9.9K האיטי, פרלייט גס 700 גרם ו75 סולפט האלומיניום גרם לכל 2.8 מ&quot;ק. תיק מטר. אם יש צורך בהמשך עונת הגידול, לדשן צמחים שבועיים עם 17N-1.3P-14.1K מסיס ב200 חנקן עמודים לדקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך עונת הגידול, לשמור על צמחים בבית צל. מאפשר לצמחים ללכת רדומים מחוץ בסתיו לפני מעברםלמתקן אחסון בטמפרטורה מבוקר (~ 4 ° C) מנובמבר עד אפריל. </li></ol> 2. אוסף של אשור סולם ביצים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוכן שורץ-BBD, לבדוק עצים נגועים בכבדות (המזוהים בקלות על ידי המראה, 1A &quot;המסויד&quot; איור) עם זכוכית מגדלת יד כדי לאשר את קיומו של ביצים, בדרך כלל בשפע מאמצע יולי עד אמצע אוגוסט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במכחול להבריש בעדינות את גושי שעווה הלבנים של כנימות בוגרות, ביצים ופסולת אחרים, לתוך שקית איסוף ליטר אחד סגר פלסטיק (איור 1). לאסוף ממינימום של שלושה עצים שונים זה מזה לפחות 12 מ &#39;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במידת צורך, לאחסן ביצים בשקית האיסוף האטומה עד שבועיים ב 4 ° C. קלטת חתיכה קטנה (2.5 סנטימטר מרובע) של פוליאתילן מוקצף לח לחלק הפנימי של השקית כדי למנוע את הביצים מהתייבשות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להפריד את הביצים בקנה מידה (0.15 x 0.25 מ&quot;מ) מהמבוגרים (0.60 מ&quot;מ) וdebriים, לבנות מסננת באמצעות קטע קצר של 2 צינור PVC &#39;וצימוד לתמוך פיסה רבועה של 250 רשת ניילון מיקרון (איור 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רוקן את התערובת של מבוגרים, שעווה, ביצים, ופסולת משקית האיסוף על גבי המסננת ולהשתמש במברשת צבע קטנה כדי לעודד בעדינות את הביצים לעבור דרך הרשת לתוך צלחת פטרי זכוכית בהמשך. יש להימנע ממאכלי פלסטיק פטרי כי הם מחזיקים את חשמל הסטטי יותר, מה שהופך את זה קשה להעביר את הביצים. ביצים לפני ואחרי הסנון מוצגות באיור 3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתן לאחסן ביצים מטוהרים בצלחת פטרי על 4 מעלות צלזיוס במשך שבוע לפחות. כדי למנוע את הביצים מהתייבשות, קלטת פיסה לחה של קצף למכסה ולאטום עם Parafilm. </li></ol> 3. ביצת מבחני הכדאיות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להעריך את כדאיות ביצה, להשתמש במזרק 10 סמ&quot;ק ליישם טבעת דקה של וזלין סביב ההיקף של החלק התחתון של צלחת פטרי זכוכית 60 מ&quot;מ (איור 4 א </strong&gt;). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר על 100 ביצים למרכז הזירה, הנח את המכסה על צלחת פטרי ולאטום עם Parafilm. לאפשר את צלחת פטרי האטום להישאר באין מפריע בטמפרטורת חדר למשך 2 שבועות, או 3 שבועות אם ביצים היו מאוחסנות על 4 מעלות צלזיוס לפני תחילת assay. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נימפות בקעו יהפכו תקועות בוזלין וניתן לספור בקלות, וביצים ריקות בקלות להבחין בין ביצים שעדיין לא בקעו לפי צבעם וברק (איור 4). חישוב כדאיות על ידי חלוקת מספר נימפות בסכום של הביצים הריקות בתוספת ביצים מלאה שנותרו. כדאיות טובה צריכה להיות ב75% עד 90% טווח הביצים בקע. </li></ol> 4. הקרנה בקנה מידה התנגדות של גדולים למבוגרים אשור עצים בשדה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למבחן כמוני, לספור את 500 ביצים באמצעות מיקרוסקופ לנתח ובעזרת מרית קטנה בעדינות ומפזרים אותם על פני המרכז לפתוח תאי 10 x 15 x 1.3 מלבן של פוליאתילן מוקצף predampened, סנטימטר. אללצנן את הקצף, הרטבת אותו ואז לסחוט את מים רבים ככל האפשר. למבחן איכותי, ניתן לספור 500 ביצים והניחו בבקבוקון זכוכית קטן וקו &quot;מילוי&quot; נמשך, שניתן להשתמש כדי למדוד קבוצות נוספות של כ 500 ביצים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את כרית הקצף על גבי עץ הבדיקה עם צד הביצה פונה נגד לנבוח. להחזיק את הכרית במקום עם חבל, מחרוזת, חוט, חוט או חומרת פלסטיק מצופה. פלסטיק או חומר מבוסס מתכת אמור לשמש במקום חומרי סיבים טבעיים אשר בזז יותר בקלות על ידי חיות הבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קו העליון ואת הצדדים של פיסת סנטימטר חתוך מראש 23 x 30 של לעטוף אדים חדירים למים בית עם דבק סיליקון אצטט מבוססת ומניחים אותו על משטח בדיקת קצף. לחץ על הקצוות של לעטוף את בית העץ כדי ליצור חותם אטום למים. הנח חוט ניילון או חוט חומרה מצופה פלסטיק מסביב לעץ והבית לעטוף, כדי להחזיקו במקום בזמן שקבוצות הדבק (איור 5). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים מינימום של שנירפידות מבחן על כל עץ בדיקה, רצוי בצדדים מנוגדים של גזעו. בכל אתר, הנח כריות מבחן על לפחות 2 עצים רגישים (עם נגיעות בקנה מידה טבעית ברורות) כביקורת. לפני הצבת רפידות מבחן על עצי שליטה, להסיר כל חרקים באופן טבעי בקנה מידה או ביצים באמצעות משרד זיפי מברשת. הערה: רפידות קצף עם ביצים גם ניתן להציב על עצים לצורך ביצי היקף גידול, אשר יכול להיות מועילות במיוחד באזורים בהם רמת הנגיעות נמוכה. </li></ol> 5. הקרנה בקנה מידה התנגדות של שתילי עציצים או שתלי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבדיקה, בחר עצים בעציצים בקוטר מינימאלי של 1 סנטימטר (קליפר 5 ס&quot;מ מעל קו אדמה) שהם גבוהים מספיק כדי לקבל לפחות 2 רפידות מבחן נפרדות מוטלות עליהם. לגזום צד סניפים קטנים בעת צורך כדי לפנות מקום לרפידות המבחן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במיקרוסקופ לנתח לספור את 150 ביצים ולפזר אותם על פני חתוך ולח 2.5 x 7.6 x 1.3 סנטימטר תיקים עשויים לפתוח תאיםמשטח קצף Lene. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להדביק משטח הקצף לשתיל עם צד הביצה נגד לנבוח, באמצעות חוט מצופה פלסטיק. לעטוף את הריבוע קטן של הבית לעטוף סביב השתיל בדיוק מעל הקצף ולאטום אותו עם סיליקון מבוסס אצטט (ראה איור 6 א). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כולל ידוע משפחות שתיל רגישות או שתלי שולטת. </li></ol> 6. איסוף נתונים הערה: כ 52-57 שבועות לאחר הצבת כריות הקצף וביצים על עצי הבדיקה, ניתן לאסוף נתונים. זה חשוב כי זה לא נעשה עד לאחר המבוגרים החלו להטיל ביצים, כך שהיכולת שלהם להתרבות ניתן לקבוע. על כמה עצים עמידים זה לא יוצא דופן לראות מספר קטן של מבוגרים להקים אך ללא רבייה מתרחשת. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוציא בזהירות את משטח הקצף ולספור את מספר הכנימות למבוגרים שהוקמו על הקליפה באמצעות יד או עדשת זכוכית מגדלת (10X). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר משטח הקצף מוסר, זה לא uncommon לחלק ממבוגרים ורוב אשכולות ביצה שהוריד מהעץ עם הקצף (ראה איור 7). באמצעות מיקרוסקופ לנתח, לספור את אשכולות הביצה ומבוגרים שנשארו מחובר למשטח הקצף. </li></ol>

<ol>
	<li>Houston, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+to+artificially+infest+beech+bark+with+the+scale,+Cryptococcus+fagisuga+(Lindinger).">A technique to artificially infest beech bark with the scale, Cryptococcus fagisuga (Lindinger).</a> U.S. Forest Service. , (1982).</li><li>Houston, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=American+beech+resistance+to+Cryptococcus+fagisuga.">American beech resistance to Cryptococcus fagisuga.</a> Proceeding, IUFRO beech bark disease working party conference. , 38-42 (1983).</li><li>Ehrlich, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+beech+bark+disease:+a+nectria+disease+of+Fagus,+following+Cryptococcus+fagi.">The beech bark disease: a nectria disease of Fagus, following Cryptococcus fagi.</a> 10, 593-692 (1934).</li><li>Papaik, M. J., Canham, C. D., Latty, E. F., Woods, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+an+introduced+pathogen+on+resistance+to+natural+disturbance:+beech+bark+disease+and+withdrow.">Effects of an introduced pathogen on resistance to natural disturbance: beech bark disease and withdrow.</a> 35, 1832-1843 (2005).</li><li>Miller-Weeks, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+status+of+beech+bark+disease+in+New+England+and+New+York.">Current status of beech bark disease in New England and New York.</a> Proceeding, IUFRO beech bark disease working party conference. , 21-23 (1983).</li><li>Houston, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beech+bark+disease:+The+aftermath+forests+are+structured+for+a+new+outbreak.">Beech bark disease: The aftermath forests are structured for a new outbreak.</a> J. For. 73, 660-663 (1975).</li><li>Twery, M. J., Patterson, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variations+in+beech+bark+disease+and+its+effects+on+species+composition+and+structure+of+northern+hardwood+stands+in+central+New.">Variations in beech bark disease and its effects on species composition and structure of northern hardwood stands in central New.</a> 14, 565-574 (1984).</li><li>Jakubus, W. J., McLaughlin, C. R., Jensen, P. G., McNulty, S. A., Evans, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternate+year+beechnut+production+and+its+influence+on+bear+and+marten+populations.">Alternate year beechnut production and its influence on bear and marten populations.</a> Beech Bark Disease: Proceedings of the Beech Bark Disease Symposium. , 79-87 (2005).</li><li>Koch, J. L., Carey, D. W., Mason, M. E., Nelson, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+beech+scale+resistance+in+full-+and+half-sib+families.">Assessment of beech scale resistance in full- and half-sib families.</a> Can. J. For. Res. 40, 265-272 (2010).</li><li>Koch, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beech+bark+disease:+The+oldest+&#8220;new&#8221;+threat+to+American+beech+in+the+United+States.">Beech bark disease: The oldest &#8220;new&#8221; threat to American beech in the United States.</a> Outlooks Pest Manag. 21, 64-68 (2010).</li><li>Koch, J. L., Mason, M. E., Carey, D. W., Palmieri, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+for+resistance+to+beech+bark+disease:+improvements+and+results+from+seedlings+and+grafted+field+selections.">Screening for resistance to beech bark disease: improvements and results from seedlings and grafted field selections.</a> Proceedings of the 4th International Workshop on Genetics of Host-Parasite Interactions in Forestry. , (2012).</li><li>Leak, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fifty+year+impacts+of+the+beech+bark+disease+in+the+Bartlett+Experimental+Forest,+New+Hampshire.">Fifty year impacts of the beech bark disease in the Bartlett Experimental Forest, New Hampshire.</a> Northern J. Appl. For. 23, 141-143 (2006).</li><li>Koch, J. L., Carey, D. W., Yaussy, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlled+cross-pollinations+with+American+beech+trees+that+are+resistant+to+beech+bark+disease.">Controlled cross-pollinations with American beech trees that are resistant to beech bark disease.</a> Proceedings of the 14th Central Hardwood Forest Conference. , 358-364 (2004).</li><li>Carey, D. W., Mason, M. E., Bloese, P., Koch, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hot+callusing+for+propagation+of+American+beech+by+grafting.">Hot callusing for propagation of American beech by grafting.</a> HortSci. 48, 620-624 (2013).</li><li>Koch, J. L., Carey, W. W., Evans, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+resistance+of+American+beech+to+beech+bark+disease:+knowledge+through+2004.">The genetics of resistance of American beech to beech bark disease: knowledge through 2004.</a> Beech Bark Disease: Proceedings of the Beech Bark Disease Symposium. , 98-105 (2005).</li></ol>

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

הנדרשים להצלחה של assay זה השלבים הקריטיים כוללים ביצוע בדיקת כדאיות על הביצים והשימוש בפקדים רגישים בכל אתר נבדק, ועם חומרים בעציצים. חשוב גם להשתמש בכרית מבחן יותר מפעם אחת לכל עץ או שתיל. מצאנו כי גם בשטח והן בבדיקות מבוקרות יותר על עציצים, מקור תכוף של טעות יכול להיות כישלון כרית. לדוגמא, בתחום, גם עם השינוי של מכסה את משטח הבדיקה עם הבית לעטוף כדי למנוע עודף לחות, מים זורמים במורד הגזע יכול להעדיף צד אחד של עץ ולגרום לאובדן של משטח בדיקה שלנו. על מנת לקבל תוצאות מדויקות, חשוב להבקיע שני משטח העץ מתחת לכרית ומשטח הקצף עצמו. בנוסף למבוגרים ואשכולות ביצה, השלב הנייד רק במחזור החיים בקנה מידה שנקרא טופסי נימפות, יכול גם להיות שנצפה. נימפות אלה ניידים סופו של דברהכנס stylet ההאכלה שלהם לקליפת העץ, הופך נימפה צורה השנייה. שני הסוגים של נימפות דומים מאוד בגודל ומראה לביצים קטנות, בצורת האליפסה, בעוד שהמבוגרים יותר צורה כדורית יותר. טופסי נימפה הוא להבחין בין ביצים כי יש לו עיניים אדומות והוא נע, אבל תנועה זו גורמת מקבלת ספירה מדויקת מאוד קשה. נימפה הצורה השנייה יכולה בקלות להיחשב בטעות לביצה, ובמיוחד בעת הקלטת נתונים בשדה עם יד עדשה או זכוכית מגדלת ולא במיקרוסקופ. מסיבות אלה, אנו ממליצים לספור רק את המבוגרים ואת מספר אשכולות ביצה, שמצאנו נותן לנו נתונים לשחזור על יכולתו של עץ בדיקה כדי לתמוך התפשטות בקנה מידה עצמית לקיום. העבודות קודמות הראו כי ספירת המבוגר בקורלציה גבוהה עם אשכול מספר ביצי 9. במקרים רבים זה עשוי להיות מספיק רק כדי לספור מבוגרים; עם זאת, ראו כמה מקרים שבם מבוגרים המסוגליםההקמה בגנוטיפים מסוימים של עצים, אך אינו מייצרים ביציות. בלי היכולת להתרבות, שריצה בקנה מידה לא תהיה בת קיימא על עצים אלה. נפילתו צפויה של assay זה כאשר היא מבוצעת בתחום היא את האטרקטיביות של רפידות מבחן לדובים. שינויים עתידיים לפרוטוקול צריכים להתמקד בשימוש בחומרים שעלולות להיות פחות אטרקטיבי לדובים או הצבת רפידות מבחן בגבהים שונים. הגבלה לשיטה זו של בדיקה היא שזה לא צריך להיות בשימוש באזורים שעדיין אין לי לפחות בקנה מידה התפשטות אשור אור, כדי למנוע את הסיכון של התפשטות מחלה קליפת אשור. השירות של טכניקה זו הוא שניתן להשתמש בו כדי להעריך את ביצועים של הורה כחלק מתכנית רבייה. לצאצאים כגון בדיקות קריטריונים מחמירים לקנה מידת התנגדות הן בדרך כלל אחרי, המאפשרות רק בוגר אחד ואפס לדוגמאאשכולות גרם כקריטריון להתנגדות. שימוש בהנחיות אלה לבחירת הורים, חלקם של צאצאים עמידים צריך להיות כ 50%, המהווה שיפור ניכר על זרעים פתוחים האבקה 15. עם זאת, לצורך ניהול קרקעות זה עשוי להיות רצוי להשתמש בקריטריונים מחמירים פחות לשמירה על עצים מפני שעצים שתומכים ברמה נמוכה של כנימות עשויים להישאר בריאים יחסית.

מחלה אשור קליפה (BBD) יש לו השפעה מזיקה על אשור אמריקאי בצפון אמריקה מאז כניסתה של החרקים פולשני בקנה מידה אשור, fagisuga Cryptococcus, במחוז הקנדי של נובה סקוטיה בסוף 1890s 3. מורכבת חרקי מחלה זו היא יזמה כאשר החרק בקנה מידה האשור מוסיף stylet ההאכלה שלה לתוך הקליפה יוצרת סדקים קטנים המספקים כניסה לזיהום על ידי אחד המינים במיקרוסקופ סטראו של פטרייה (ditissima מיקרוסקופ סטראו או faginata מיקרוסקופ סטראו). כתפטיר הפטרייה לגדול, אזורים גדולים של רקמה עלולים למות, בסופו חוגרים את העץ לגמרי. הנזק מהמחלה מחליש את העץ, מה שהופך אותו נוטה למצלמים ברוחות חזקות 4. רמת התמותה בגל הראשון של המחלה דווח להיות גבוה ככל 50% 5. עצים ששרדו לעתים קרובות מעוותים באופן חמור כcankers יוצר הפחתת ערכו של העץ כמוצר עץ.0, יש עצים מסוג זה נטייה לשורש הנבטה שמובילה להיווצרות של &quot;סבך אשור&quot; שמונע מין רצוי יותר אחר מהקמת, הפחתת הערך הכלכלי ואקולוגי של העמדה 6. למרות המחלה קליפת אשור אינה צפויה להוביל להכחדה של האשור האמריקאי, זה משנה לעמוד הרכב ובריאות שמוביל לירידה במזון ובית גידול ל7,8 חיות בר. ביציעים מושפעים BBD במשך שנים רבות, עצים שנותרו ללא כל סימפטומים של המחלה כבר דיווחו. ניסויים חיסון מלאכותיים הראו כי עצים אלה הם עמידים לחרקים בקנה מידה 2. ללא נגיעות בקנה מידה, יש הזדמנות קטנה לזיהום במיקרוסקופ סטראו, למזער את השפעתה של הפטרייה. תמותה בקנה מידה גדולה באשור אמריקאי עקב הזיהום במיקרוסקופ סטראו בהעדר התפשטות בקנה מידה לפני מעולם לאדווח, ולכן התנגדות לתוצאות חרקים בקנה מידה אשור בהתנגדות לBBD. מחקר שנערך לאחרונה בניהולו של BBD התמקד בזיהוי, התפשטות, רבייה, ושמירה של עצי אשור אמריקאים עם התנגדות לחרקים בקנה מידה אשור. מחקרים גנטיים הראו כי התנגדות לחרקים בקנה מידה היא תורשתית ובחירת רבייה זהירה של עצים עמידים יכולים לגרום לשיפור משמעותי בדור אחד 9. ממצא זה הגבירו את מאמציהם של מנהלי מדינה ויער לאומי בארצות הברית להקמת מטעי זרעים אזוריים של אשור אמריקאי עמיד לספק מקור זרע BBD עמיד גנטי מגוון לנטיעות שיקום 10,11. המחקר גם הצביע על כך שמניפולצית silvicultural גנטיקה עמדה על ידי הסרה של עצים ושימור עצים עמידים רגישים יכולה לגרום 9,12 שיפור עמדה. &lt;/ P&gt; ניהול של BBD באמצעות פעילויות שיפור עץ או באמצעות ביצוע המרשמים silvicultural דורש את היכולת לבחור וללהבחין בין עצים בקנה מידה עמידה ורגישה אשור. השיטות שהוצגו כאן הותאמו משיטה הוצגה לראשונה על ידי דייב יוסטון לחסן באופן מלאכותי שתילים עם ביצים בקנה מידה אשור 1. השיטה יכולה לשמש ככלי מיון לזהות לוקוסי תכונה כמותית (QTL) הקשורים להתנגדות או להבחין בין שתילים בעציץ עמידים ורגישים או ramets מורכב במחקרים גנטיים. לחלופין, ניתן להשתמש בו לסינון עצים בוגרים בתחום לזהות עצים עמידים לפיתוח מטע זרע, או שמירה בתחום. ניתן לזהות עצים רגישים והוסרו כדי למזער את השפעות מחלה.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1006">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="63" rowspan="2" style="height:63px;width:163px;">Nylon Mesh Sheet, 250 micron</td>
			<td rowspan="2" style="width:120px;">Small Parts</td>
			<td rowspan="2" style="width:99px;">CMN-0250-D</td>
			<td style="width:627px;">Mesh opening size: 250 microns square, % of open area: 34, thread diameter: 180 micron, width: 24&#8221;, Length: 12&#8221;, Package quantity: 1</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:627px;"><a href="http://www.amazonsupply.com/dp/B000FMWH1S/ref=sp_dp_g2c_asin">http://www.amazonsupply.com/dp/B000FMWH1S/ref=sp_dp_g2c_asin</a></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="42" rowspan="2" style="height:42px;width:163px;">Tyvek Home Wrap</td>
			<td rowspan="2" style="width:120px;">DuPont</td>
			<td rowspan="2" style="width:99px;">D1349991</td>
			<td style="width:627px;">9 ft x 150 ft roll, can ask for it to be cut in half.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:627px;"><a href="http://www.lowes.com/pd_14582-2020-D13499991_0__">http://www.lowes.com/pd_14582-2020-D13499991_0__</a></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="42" rowspan="2" style="height:42px;width:163px;">Polyethylene foam, &#189;&#8221; thick&#160;</td>
			<td rowspan="2" style="width:120px;">Columbus Foam Products</td>
			<td rowspan="2" style="width:99px;">N/A</td>
			<td style="width:627px;">2 ft x 50 ft roll</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:627px;"><a href="http://www.colsfoam.com/apcfp/products.htm">http://www.colsfoam.com/apcfp/products.htm</a></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="64" rowspan="2" style="height:64px;width:163px;">MetroMix 510</td>
			<td style="width:120px;">Sun Gro&#160;</td>
			<td rowspan="2" style="width:99px;">N/A</td>
			<td style="width:627px;">2.8 cu. ft. bark, peat moss, vermiculite, bark ash, starter nutrient charge (with Gypsum), slow release nitrogen and&#160;dolomitic limestone.</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:120px;">Horticulture</td>
			<td style="width:627px;"><a href="http://sungro.com/products_displayProduct.php?product_id=118&amp;brand_id=17">http://sungro.com/products_displayProduct.php?product_id=118&#38;brand_id=17</a></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="42" rowspan="2" style="height:42px;width:163px;">Osmocote Plus 15-9-12</td>
			<td rowspan="2" style="width:120px;">Everris</td>
			<td rowspan="2" style="width:99px;">E903206</td>
			<td style="width:627px;">Standard 3-4 month release.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:627px;"><a href="http://everris.us.com/product/15-9-12">http://everris.us.com/product/15-9-12</a></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="42" rowspan="2" style="height:42px;width:163px;">Sight Savers 10 X</td>
			<td rowspan="2" style="width:120px;">Bausch &#38; Lomb</td>
			<td rowspan="2" style="width:99px;">813434</td>
			<td style="width:627px;">10 x magnification illuminated coddington</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:627px;"><a href="http://www.amleo.com/Bausch---Lomb-Illuminating-Codington-Magnifier-10x/p/CM10/">http://www.amleo.com/Bausch---Lomb-Illuminating-Codington-Magnifier-10x/p/CM10/</a></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="42" rowspan="2" style="height:42px;width:163px;">Nikon Mini Field Stereoscope</td>
			<td rowspan="2" style="width:120px;">Nikon</td>
			<td rowspan="2" style="width:99px;">7314</td>
			<td style="width:627px;">20 x magnification</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:627px;"><a href="http://www.opticsplanet.com/nikon-fieldmicroscope.html">http://www.opticsplanet.com/nikon-fieldmicroscope.html</a></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="42" rowspan="2" style="height:42px;width:163px;">Silicone II clear</td>
			<td rowspan="2" style="width:120px;">GE</td>
			<td rowspan="2" style="width:99px;">159538</td>
			<td style="width:627px;">2.9 oz clear window &#38; door caulk</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:627px;"><a href="http://www.midlandhardware.com/159538.html">http://www.midlandhardware.com/159538.html</a></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a technique to screen american beech for resistance to the beech scale insect (cryptococcus fagisuga lind.)

מחלה אשור קליפת תוצאות (BBD) ברמות גבוהות של תמותה ראשונית, והשאירה מאחורי עצי הניצולה שנחלשו מאוד ומעווה. המחלה היא ביוזמת האכלת פעילות של החרקים פולשני בקנה מידה אשור, Cryptococcus fagisuga, אשר יוצרים נקודות כניסה לזיהום על ידי אחד המינים במיקרוסקופ סטראו של פטרייה. ללא נגיעות בקנה מידה, יש הזדמנות קטנה לזיהום פטרייתי. שימוש בביצים בקנה מידה לשורצת באופן מלאכותי עצים בריאים בדוכנים בכבדות השפיעו BBD הראתה כי עצים אלה היו עמידים לחלק החרקים בקנה מידה של מורכבות המחלה 1. כאן אנו מציגים פרוטוקול שפיתחנו, המבוסס על הטכניקה המלאכותית שריצה על ידי יוסטון 2, אשר יכול לשמש מסך לעצים בקנה מידה עמידה בתחום ובקטן יותר שתילים ושתלים בעציצים. זיהוי של עצים בקנה מידה עמידה הוא מרכיב חשוב של ניהול BBD של דרך עץתוכניות שיפור ומניפולציה silvicultural.

איור 6 מראה שתיל עמיד (C) ושני שתילים רגישים (D, E) המציג דרגות שונות של רגישות. דוגמא למה שעץ בוגר רגיש נראה כמו 57 שבועות לאחר בדיקת נגיעות המלאכותית הוקמה מוצגת באיור 5. כשהקצף התקלף מהעץ, זה לא נדיר עבור כנימות ואשכולות הביצה שלהם כדי להישאר דבוק לקצף כפי שמוצגים באיור 7, ולכן זה חיוני כדי לאסוף נתונים משני העץ ומשטח הקצף . איור 8 ממחיש את המספר הממוצע של חרקים בוגרים הוקמו לכל 100 ביצים על עצים נגועים באופן מלאכותי בשתי עמדות שונות, אחד ביער הלאומי אלגני (ANF) בפנסילבניה, והשני בפרק המדינה Ludington (LSP), מישיגן. שני היציעים היו שורצים BBD ובכל עמדה, מקבץ של עץ בריאים היה מזוהה (LSP עמיד ועמיד ANF) ונחוש בדעתו להיות מבוסס על ניתוח ה-DNA משובט (מידע לא מוצג). אשכול משובט של עצי BBD-רגישים זוהה גם בLSP (LSP רגיש) אבל בANF שימשו חמישה עצים רגישים שונים (ANF רגיש). בתוך ובין אשכולות משובטים, גודל מגוון עם DBH החל 2.1-12.8 סנטימטרים. איור 8 מראה כי למרות שיש הרבה וריאציה במספר המבוגרים שהוקמו על העצים רגישים, הבדלים ברורים מזוהים בין עצים רגישים ועמידים. הייתה פחות וריאציה במספר המבוגרים בשני אשכולות עמידים יחסית לעצים רגישים. באשכול עמיד ANF, כל 12 שיבוטים שנבדקו לא היו מבוגרים, ואילו באשכול עמיד LSP היו כמה שיבוטים מספר קטן של מבוגרים. עם זאת, לא הייתה חפיפה בסטיית התקן מהממוצע של העצים עמידים ורגישים בשני האתרים. השונותtion במספר המבוגרים בעצים הקשורים clonally בLSP (LSP רגיש) הוא גדול יותר מאשר נצפה בעצי ANF רגישים (ANF רגישים) למרות העובדה שהעצים האלה הם לא משובטים ושונים מבחינה גנטית. בדיקות כדאיות (מידע לא מוצג) מצביעות על וריאציה זו אינה נובעת מהבדלים גדולים ביכולת הקיום של הביצים. הווריאציה היא כנראה עקב שני הבדלים גנטיים וסביבתיים, וממחישה את החשיבות של בעל פקדים רגישים להתייחסות בכל אתר בדיקה. <img alt="איור 1" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/51515/51515fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51515/51515fig1.jpg" /> איור 1. אוסף של ביצים בקנה מידה מעץ אשור אמריקאי שורץ בקנה מידה. . עץ אשור אמריקאי כבדות שורצי קנה מידה. ב &#39;. מכחול משמש לצחצח כנימות בוגרות וביצים שלהם לתוך שקית אחסון סגר מתחת. <html><img alt="איור 2" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/51515/51515fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51515/51515fig2.jpg" /> איור 2. בנייה של מסננת כדי להפריד ביצים בקנה מידה ממבוגרים ומזהמים אחרים. כיכר מראש לחתוך 4 X 4 סנטימטר של 250 רשת ניילון מיקרון ממוקמת בין חתיכת 4 סנטימטר של צינור PVC בקוטר 2 &quot;וצימוד כדי ליצור את המסננת . <img alt="איור 3" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/51515/51515fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51515/51515fig3.jpg" /> איור 3. ביצי סולם לפני () ואחרי סינון (ב &#39;). תערובת. של כנימות בוגרות, ביצים, ופסולת שנצפו תחת מיקרוסקופ לנתח לאחר איסוף מעץ. ב &#39;. ביצים מטוהרים שהושגו לאחר שעבר את המסננת. ge = &quot;תמיד&quot;&gt; <img alt="איור 4" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/51515/51515fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51515/51515fig4.jpg" /> איור 4. בדיקת כדאיות ביצה. טבעת. נפט בצלחת פטרי לנימפות מלכודת לאחר הבקיעה. ב &#39;. טופס I נימפה בצד הימין של ביצה. C בקע-האו&quot;ם. ביצים בקעו הם קלים בצבע ושקוף ביחס לביצים צהבהבות אטומות לפני הבקיעה. <img alt="איור 5" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/51515/51515fig5highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51515/51515fig5.jpg" /> איור 5. התפשטות מלאכותית של אשור האמריקאי בוגר בתחום. לעטוף. בית המודבק עם סיליקון מבוסס אצטט כדי למנוע עודף לחות להצטבר על משטח קצף עם ביצים מתחת. ב &#39;. הבית לעטוף הוסר ומשטח הקצף קלף 52 שבועות לאחר ההשמה לחשוף יםקייל קולוניזציה מתחת לעץ רגיש זה. <img alt="איור 6" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/51515/51515fig6highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51515/51515fig6.jpg" /> איור 6. התפשטות מלאכותית של שתילי אשור אמריקאים בעציצים. א קצף עם ביצים הצמודות לגזע. קצף הבית ב &#39;לעטוף כיסוי. ג קצף הוסר לאחר 56 שבועות על שתיל עמיד, ד&#39; שתיל רגיש, א ושתיל רגיש מאוד. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51515/51515fig6highres.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של נתון זה.</a> <img alt="איור 7" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/51515/51515fig7highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51515/51515fig7.jpg" /> <sטרונג&gt; איור 7. קנה מידה למבוגרים ואשכול ביצה על משטח קצף. החרקים קנה המידה למבוגרים מוקף ומכוסה חלקית על ידי frass הלבן, דמוי שעווה. ביצים הקטנות יותר, חלק ומבריקים הן על גביו של החרק הבוגר ובתוך השעווה. זה יהיה הבקיע כבוגר אחד ואשכול ביצה אחת. <img alt="איור 8" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/51515/51515fig8highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51515/51515fig8.jpg" /> איור 8. השוואה של המספר הממוצע של חרקים בוגרים הוקמו על עצים נגועים באופן מלאכותי בשני יציעים נפרדים. עצים עמידים ביער אלגני הלאומי, הרשות הפלסטינית (ANF) ובפרק מדינת Ludington, MI (LSP) הן בהשוואה לעצי שליטה רגישות. מספר העצים שנבדקו בכל אחת מקבוצות רשומים בסוגריים בהמשך, וספירה מבוגר לכל 100 ביצים מיושמות היו בממוצע על פני כל העצים בתוך הקבוצה. בר מייצג סטיית תקן אחת ממ &#39;EAN.

Watch this Scientific Journal Video about A Technique to Screen American Beech for Resistance to the Beech Scale Insect Cryptococcus fagisuga Lind. at JoVE.com

A Technique to Screen American Beech for Resistance to the Beech Scale Insect Cryptococcus fagisuga Lind.

מחלה קליפת אשור היא ביוזמת האכלת פעילויות של החרק בקנה מידה אשור שיוצרים נקודות כניסה פטרייתי בקליפה. עצים, כי הם עמידים לחרקים בקנה מידה הם גם מחלה עמידה. כאן אנו מציגים את הפרוטוקול שפיתחנו למסך עצי אשור פרט להתנגדות בקנה מידה אשור.

טכניקה למסך בוק האמריקאי להתנגדות לחרקי האשור Scale (<em&gt; Fagisuga Cryptococcus</em&gt; לינד.)

Beech bark disease (BBD) results in high levels of initial mortality, leaving behind survivor trees that are greatly weakened and deformed.&#160;The ...

a-technique-to-screen-american-beech-for-resistance-to-beech-scale

Google

Research

JoVE Journal

Environment

A Technique to Screen American Beech for Resistance to the Beech Scale Insect (Cryptococcus fagisuga Lind.)

9.5K Views.  US Forest Service.  מחלה קליפת אשור היא ביוזמת האכלת פעילויות של החרק בקנה מידה אשור שיוצרים נקודות כניסה פטרייתי בקליפה. עצים, כי הם עמידים לחרקים בקנה מידה הם גם מחלה עמידה. כאן אנו מציגים את הפרוטוקול שפיתחנו למסך עצי אשור פרט להתנגדות בקנה מידה אשור. 

Video: A Technique to Screen American Beech for Resistance to the Beech Scale Insect Cryptococcus fagisuga Lind.

A Noninvasive Method For In situ Determination of Mating Success in Female American Lobsters (Homarus americanus)

Despite being one of the most productive fisheries in the Northwest Atlantic, much remains unknown about the natural reproductive dynamics of American lobsters. Recent work in exploited crustacean populations (crabs and lobsters) suggests that there are circumstances where mature females are unable to achieve their full reproductive potential due to sperm limitation. To examine this possibility in different regions of the American lobster fishery, a reliable and noninvasive method was developed for sampling large numbers of female lobsters at sea. This method involves inserting a blunt-tipped needle into the female&#39;s seminal receptacle to determine the presence or absence of a sperm plug and to withdraw a sample that can be examined for the presence of sperm. A series of control studies were conducted at the dock and in the laboratory to test the reliability of this technique. These efforts entailed sampling 294 female lobsters to confirm that the presence of a sperm plug was a reliable indicator of sperm within the receptacle and thus, mating. This paper details the methodology and the results obtained from a subset of the total females sampled. Of the 230 female lobsters sampled from George&#39;s Bank and Cape Ann, MA (size range = 71-145 mm in carapace length), 90.3% were positive for sperm. Potential explanations for the absence of sperm in some females include: immaturity (lack of physiological maturity), breakdown of the sperm plug after being used to fertilize a clutch of eggs, and lack of mating activity. The surveys indicate that this technique for examining the mating success of female lobsters is a reliable proxy that can be used in the field to document reproductive activity in natural populations.

A Noninvasive Method For In situ Determination of Mating Success in Female American Lobsters Homarus americanus

Fishery-induced changes to exploited crustacean fisheries, such as the American lobster fishery, could potentially influence their reproductive dynamics, leading to a reduction in mating success. This study&#39;s goal was to develop a noninvasive method for ascertaining the mating success of female lobsters that may be physiologically or functionally mature.

שיטה לא פולשנית ל<em&gt; באתרו</em&gt; קביעת ההצלחה זיווג בלובסטרים אמריקאים נקבה (<em&gt; Americanus Homarus</em&gt;)

Despite being one of the most productive fisheries in the Northwest Atlantic, much remains unknown about the natural reproductive dynamics of American ...

Video Tracking Protocol to Screen Deterrent Chemistries for Honey Bees

The European honey bee, Apis mellifera L., is an economically and agriculturally important pollinator that generates billions of dollars annually. Honey bee colony numbers have been declining in the United States and many European countries since 1947. A number of factors play a role in this decline, including the unintentional exposure of honey bees to pesticides. The development of new methods and regulations are warranted to reduce pesticide exposures to these pollinators. One approach is the use of repellent chemistries that deter honey bees from a recently pesticide-treated crop. Here, we describe a protocol to discern the deterrence of honey bees exposed to select repellent chemistries. Honey bee foragers are collected and starved overnight in an incubator 15 h prior to testing. Individual honey bees are placed into Petri dishes that have either a sugar-agarose cube (control treatment) or sugar-agarose-compound cube (repellent treatment) placed into the middle of the dish. The Petri dish serves as the arena that is placed under a camera in a light box to record the honey bee locomotor activities using video tracking software. A total of 8 control and 8 repellent treatments were analyzed for a 10 min period with each treatment was duplicated with new honey bees. Here, we demonstrate that honey bees are deterred from the sugar-agarose cubes with a compound treatment whereas honey bees are attracted to the sugar-agarose cubes without an added compound.

The loss of honey bee colonies presents a challenge to crop pollination services. Current pollinator protection practices warrant an alternative approach to minimize the contact of honey bees to harmful pesticides using repellent chemistries. Here, we provide detailed methods for a visual tracking protocol to screen deterrents for bees.

פרוטוקול מעקב וידאו מסך ההרתעה Chemistries עבור דבורים דבש

The European honey bee, Apis mellifera L., is an economically and agriculturally important pollinator that generates billions of dollars annually. Honey ...

Lab-Scale Model to Evaluate Odor and Gas Concentrations Emitted by Deep Bedded Pack Manure

A lab-scaled simulated bedded pack model was developed to study air quality and nutrient composition of deep-bedded packs used in cattle mono-slope facilities. This protocol has been used to effectively evaluate many different bedding materials, environmental variables (temperature, humidity), and potential mitigation treatments that can improve air quality in commercial deep-bedded mono-slope facilities. The model is dynamic and allows researchers to easily collect many chemical and physical measurements from the bedded pack. Weekly measurements, collected over the course of six to seven weeks, allows sufficient time to see changes in air quality measurements over time as the bedded pack matures. The data collected from the simulated bedded packs is within the range of concentrations previously measured in commercial deep-bedded mono-slope facilities. Past studies have demonstrated that 8 - 10 experimental units per treatment are sufficient to detect statistical differences among the simulated bedded packs. The bedded packs are easy to maintain, requiring less than 10 minutes of labor per bedded packs per week to add urine, feces, and bedding. Sample collection using the gas sampling system requires 20 - 30 minutes per bedded pack, depending on the measurements that are being collected. The use of lab-scaled bedded packs allows the researcher to control variables such as temperature, humidity, and bedding source that are difficult or impossible to control in a research or commercial facility. While not a perfect simulation of &#34;real-world&#34; conditions, the simulated bedded packs serve as a good model for researchers to use to examine treatment differences among bedded packs. Several lab-scale studies can be conducted to eliminate possible treatments before trying them in a research or commercial-sized facility.

A protocol has been developed to measure gases, odors, and nutrient composition in lab-scaled bedded manure packs, which can be used to study ways to improve air quality in commercial cattle facilities using deep-bedded manure packs.

המעבדה-מודל להערכת ריח וריכוזי גזים הנפלטת עמוק עם מיטות Pack זבל

A lab-scaled simulated bedded pack model was developed to study air quality and nutrient composition of deep-bedded packs used in cattle mono-slope ...

Double-stranded RNA Oral Delivery Methods to Induce RNA Interference in Phloem and Plant-sap-feeding Hemipteran Insects

Phloem and plant sap feeding insects invade the integrity of crops and fruits to retrieve nutrients, in the process damaging food crops. Hemipteran insects account for a number of economically substantial pests of plants that cause damage to crops by feeding on phloem sap. The brown marmorated stink bug (BMSB), Halyomorpha halys (Heteroptera: Pentatomidae) and the Asian citrus psyllid (ACP), Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Liviidae) are hemipteran insect pests introduced in North America, where they are an invasive agricultural pest of high-value specialty, row, and staple crops and citrus fruits, as well as a nuisance pest when they aggregate indoors. Insecticide resistance in many species has led to the development of alternate methods of pest management strategies. Double-stranded RNA (dsRNA)-mediated RNA interference (RNAi) is a gene silencing mechanism for functional genomic studies that has potential applications as a tool for the management of insect pests. Exogenously synthesized dsRNA or small interfering RNA (siRNA) can trigger highly efficient gene silencing through the degradation of endogenous RNA, which is homologous to that presented. Effective and environmental use of RNAi as molecular biopesticides for biocontrol of hemipteran insects requires the in vivo delivery of dsRNAs through feeding. Here we demonstrate methods for delivery of dsRNA to insects: loading of dsRNA into green beans by immersion, and absorbing of gene-specific dsRNA with oral delivery through ingestion. We have also outlined non-transgenic plant delivery approaches using foliar sprays, root drench, trunk injections as well as clay granules, all of which may be essential for sustained release of dsRNA. Efficient delivery by orally ingested dsRNA was confirmed as an effective dosage to induce a significant decrease in expression of targeted genes, such as juvenile hormone acid O-methyltransferase (JHAMT) and vitellogenin (Vg). These innovative methods represent strategies for delivery of dsRNA to use in crop protection and overcome environmental challenges for pest management.

This article demonstrates novel techniques developed for oral delivery of double-stranded RNA (dsRNA) through the vascular tissues of plants for RNA interference (RNAi) in phloem sap feeding insects.

שיטות משלוח כפול גדילי RNA אוראלי לזירוז התערבות RNA שיפה וחרקים Hemipteran צמח sap-האכלה

Phloem and plant sap feeding insects invade the integrity of crops and fruits to retrieve nutrients, in the process damaging food crops. Hemipteran ...

The Barnacle Balanus improvisus as a Marine Model - Culturing and Gene Expression

Barnacles are marine crustaceans with a sessile adult and free-swimming, planktonic larvae. The barnacle Balanus (Amphibalanus) improvisus is particularly relevant as a model for the studies of osmoregulatory mechanisms because of its extreme tolerance to low salinity. It is also widely used as a model of settling biology, in particular in relation to antifouling research. However, natural seasonal spawning yields an unpredictable supply of cyprid larvae for studies. A protocol for the all-year-round culturing of B. improvisus has been developed and a detailed description of all steps in the production line is outlined (i.e., the establishment of adult cultures on panels, the collection and rearing of barnacle larvae, and the administration of feed for adults and larvae). The description also provides guidance on troubleshooting and discusses critical parameters (e.g., the removal of contamination, the production of high-quality feed, the manpower needed, and the importance of high-quality seawater). Each batch from the culturing system maximally yields roughly 12,000 nauplii and can deliver four batches in a week, so up to almost 50,000 larvae per week can be produced. The method used to culture B. improvisus is, probably, to a large extent also applicable to other marine invertebrates with free-swimminglarvae. Protocols are presented for the dissection of various tissues from adults as well as the production of high-quality RNA for studies on gene expression. It is also described how cultured adults and reared cyprids can be utilized in a wide array of experimental designs for examining gene expression in relation to external factors. The use of cultured barnacles in gene expression is illustrated with studies of possible osmoregulatory roles of Na+/K+ ATPase and aquaporins.

The Barnacle Balanus improvisus as a Marine Model - Culturing and Gene Expression

The barnacle Balanus (Amphibalanus) improvisus is a model for studying osmoregulation and antifouling. However, natural seasonal spawning yields an unpredictable supply of cyprid larvae. Here, a protocol for the all-year-round culturing of B. improvisus is described, including the production of larvae. The use of cultured barnacles in gene expression studies is illustrated.

זיפרגליים Balanus improvisus כמודל ימית - Culturing, ביטוי גנים

Barnacles are marine crustaceans with a sessile adult and free-swimming, planktonic larvae. The barnacle Balanus (Amphibalanus) improvisus is particularly ...

Experimental Protocol for Examining Behavioral Response Profiles in Larval Fish: Application to the Neuro-stimulant Caffeine

Fish models and behaviors are increasingly used in the biomedical sciences; however, fish have long been the subject of ecological, physiological and toxicological studies. Using automated digital tracking platforms, recent efforts in neuropharmacology are leveraging larval fish locomotor behaviors to identify potential therapeutic targets for novel small molecules. Similar to these efforts, research in the environmental sciences and comparative pharmacology and toxicology is examining various behaviors of fish models as diagnostic tools in tiered evaluation of contaminants and real-time monitoring of surface waters for contaminant threats. Whereas the zebrafish is a popular larval fish model in the biomedical sciences, the fathead minnow is a common larval fish model in ecotoxicology. Unfortunately, fathead minnow larvae have received considerably less attention in behavioral studies. Here, we develop and demonstrate a behavioral profile protocol using caffeine as a model neurostimulant. Though photomotor responses of fathead minnows were occasionally affected by caffeine, zebrafish&#160;were markedly more sensitive for photomotor and locomotor endpoints, which responded at environmentally relevant levels. Future studies are needed to understand comparative behavioral sensitivity differences among fish with age and time of day, and to determine whether similar behavioral effects would occur in nature and be indicative of adverse outcomes at the individual or population levels of biological organization.

Here, we present a protocol to examine larval zebrafish and fathead minnow locomotor activities and photomotor responses (PMR) using an automated tracking software. When incorporated in common toxicology bioassays, analyses of these behaviors provide a diagnostic tool to examine chemical bioactivity. This protocol is described using caffeine, a model neurostimulant.

נסיוני לבחינת תגובה התנהגותית פרופילים בדגים זחל: ליישום הקפאין נוירו-ממריץ

Fish models and behaviors are increasingly used in the biomedical sciences; however, fish have long been the subject of ecological, physiological and ...

A Precise and Autonomous System for the Detection of Insect Emergence Patterns

Existing systems to measure insect emergence patterns have limitations; they are only partially automated and are limited in the maximum number of emerging insects they can detect. In order to obtain precise measurement of insect emergence, it is necessary for systems to be semi-automated and able to measure large numbers of emerging insects. We addressed these issues by designing and building a system that is automated and can measure emergence of up to 1200 insects. We modified the existing &#34;falling-ball&#34; system using Arduino microcontrollers to automate data collection and expand the sample size through multiple data channels. Multiple data channels enable the user to not only increase their sample size, but also allows for multiple treatments to be run simultaneously in a single experiment. Furthermore, we created an R script to automatically visualize the data as a bubble plot, while also calculating the median day and time of emergence. The current system was designed using 3D printing so the user can modify the system to be adjusted for different species of insects. The goal of this protocol is to investigate important questions in chronobiology and stress physiology, using this precise and automated system to measure insect emergence patterns.

Measurement of insect emergence patterns requires precision. Existing systems are only semi-automated and sample size is limited. We addressed these issues by designing a system using microcontrollers to precisely measure the time of emergence of large numbers of emerging insects.

מערכת אוטונומית ומדויק עבור זיהוי דפוסי התגלות החרקים

Existing systems to measure insect emergence patterns have limitations; they are only partially automated and are limited in the maximum number of ...

Composition and Distribution Analysis of Bioaerosols Under Different Environmental Conditions

Variable microorganisms in particulate matter (PM) under different environmental conditions may have significant impacts on human health. In this study, we described a protocol for multiple analyses of the biological compositions in environmental PM. Five experiments are presented: (1) PM number monitoring by using a laser particle counter; (2) PM collection by using a cyclonic aerosol sampler; (3) PM collection by using a high-volume air sampler with filters; (4) culturable microbes collection by the Andersen six-stage sampler; and (5) detection of biological composition of environmental PM by bacterial 16SrDNA and fungal ITS region sequencing. We selected hazy days and a livestock farm as two typical examples of the application in this protocol. In this study, these two sampling methods, cyclonic aerosol sampler and filter sampler, showed different sampling efficiency. The cyclonic aerosol sampler performed much better in terms of collecting bacteria, while these two methods showed the same efficiency in collecting fungi. Filter samplers can work under low temperature conditions while cyclonic aerosol samplers have a sampling limitation for temperature. A solid impacting sampler, such as an Andersen six-stage sampler, can be used to sample bioaerosols directly into the culture medium, which increases the survival rate of culturable microorganisms. However, this method mainly relies on culture while more than 99% of microbes cannot be cultured. DNA extracted from the culturable bacteria collected by the Andersen six-stage sampler and samples collected by cyclonic aerosol sampler and filter sampler were detected by bacterial 16S rDNA and fungal ITS region sequencing.All the methods above may have wide application in many fields of study, such as environmental monitoring and airborne pathogen detection. From these results, we can conclude that these methods can be used under different conditions and may help other researchers further explore the health impacts of environmental bioaerosols.

Understanding the biological composition of environmental particulate matter is important for the study of its significant impacts on human health and disease spread. Here, we used three types of bioaerosol sampling methods and a biological analysis of airborne microbes to better explore airborne microbial communities under different environmental conditions.

הלחנה וניתוח הפצה Bioaerosols בתנאים סביבתיים שונים

Variable microorganisms in particulate matter (PM) under different environmental conditions may have significant impacts on human health. In this study, ...

Detached Leaf Assays to Simplify Gene Expression Studies in Potato During Infestation by Chewing Insect Manduca sexta

The multitrophic nature of gene expression studies of insect herbivory demands large numbers of biological replicates, creating the need for simpler, more streamlined herbivory protocols. Perturbations of chewing insects are usually studied in whole plant systems. While this whole organism strategy is popular, it is not necessary if similar observations can be replicated in a single detached leaf. The assumption is that basic elements required for signal transduction are present within the leaf itself. In the case of early events in signal transduction, cells need only to receive the signal from the perturbation and transmit that signal to neighboring cells which are assayed for gene expression.
The proposed method simply changes the timing of the detachment. In whole plant experiments, larvae are confined to a single leaf which is eventually detached from the plant and assayed for gene expression. If the order of excision is reversed, from last in whole plant studies, to first in the detached study, the feeding experiment is simplified.
Solanum tuberosum var. Kennebec is propagated by nodal transfer in a simple tissue culture medium and transferred to soil for further growth if desired. Leaves are excised from the parent plant and relocated to Petri dishes where the feeding assay is conducted with the larval stages of M. sexta. Damaged leaf tissue is assayed for the expression of relatively early events in signal transduction. Gene expression analysis identified infestation-specific Cys2-His2 (C2H2) transcription factors, confirming the success of using detached leaves in early response studies. The method is easier to perform than whole plant infestations and uses less space.

The presented method creates natural herbivore damaged plant tissue through the application of Manduca sexta larvae to detached leaves of potato. The plant tissue is assayed for expression of six transcription factor homologs involved in early responses to insect herbivory.

מנותקת עלה assays לפשט גנים ביטוי לימודי תפוחי אדמה במהלך התפשטות על ידי לעיסת חרק manduca סקסטה

The multitrophic nature of gene expression studies of insect herbivory demands large numbers of biological replicates, creating the need for simpler, more ...

Implantation of a New Micro Acoustic Tag in Juvenile Pacific Lamprey and American Eel

Juvenile Pacific Lamprey and American eels were used for laboratory evaluations to determine potential effects from tag implantation. Telemetry technology has been identified as a way to obtain more detailed information on movement and behavior across a broader spatial scale than is possible with other known technology. The purpose of this method is to provide a detailed step by step instruction on tag implantation for both lampreys and eel. For laboratory studies using actively migrating juvenile Pacific Lamprey (120-160 mm), we determined that the presence of the tag did not alter the swimming ability between tagged and untagged Individuals or have any significant tag loss (&lt;3%). Similar results were determined during laboratory testing of Yellow phase American Eels (113-175 mm). No mortality occurred during a 38-day holding period and there was minimal tag loss (3.8%). The presence of the tag did not have any significant effect on the swimming ability or survival of tagged eels compared to untagged controls and there was minimal tag loss.

This article illustrates the procedure for implanting a micro acoustic tag in juvenile Pacific Lamprey and American Eel. Our application is based on laboratory trials, which indicate that acoustic tags can be successfully implanted with no apparent effects on swimming ability or survival and minimal tag loss.

השרשה של תגית חדשה אקוסטית מיקרו עגולי הפה השקט לנוער, צלופח אמריקאי

Juvenile Pacific Lamprey and American eels were used for laboratory evaluations to determine potential effects from tag implantation. Telemetry technology ...