This work was supported by NIH grants to T.W. (R01AI072060 and R01AI099123). G. Xie was supported by a Sealy Center for Vaccine Development Predoctoral Fellowship. We thank Dr. Richard Flavell (Howard Hughes Medical Institute, Yale University School of Medicine, New Haven) and Dr. Shizuo Akira (Osaka University, Japan) for providing the MyD88&#8211;/&#8211; mice and Dr. Y Cong (UTMB, Galveston) for providing OTII transgenic mice.

כל הניסויים בבעלי החיים אושרו על ידי ועדת הטיפול בבעלי חיים ושימוש באוניברסיטת טקסס רפואית הסניף. 1. בידוד של DCs מעכברים נגועים ללא ונגוע WNV <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאמה לגיל ושיסוד פעילות המינית 6-10 בן שבוע, wild-type C57BL / 6 (B6) וMyD88 - / - עכברים. לחסן intraperitoneally (IP) עם 500 יחידות פלאק ויוצרים (PFU) של המוטציה WNV NS4B- P38G. ביום 3 לאחר פגיעה, להרדים MyD88 B6 ו-- / - עכברים עם CO 2. השתמש בעכברים שאינם נגועים בשתי הקבוצות שולטת. השתמש בשלושה עכברים מכל קבוצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פרווה רטובה על צד השמאלי של עכבר הקריב באמצעות אתנול 70% וחתכה את הפרווה בצד השמאלי של העכבר, כמחצית דרך בין החלק הקדמי ורגליו האחוריות. גזור לפתוח את חלל הגוף. הסר את הטחול באמצעות המלקחיים. מניחים את הטחול בצלחת פטרי עם RPMI. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבודד DCs טחול באמצעות חרוזים מגנטיים אנטי-CD11c פיהוראות היצרן. </li></ol> 2. טיהור ותיוג של תאי T של עכברים הטרנסגניים OTII <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קציר טחול אחד מעכבר OTII נאיבי כמתואר בשלב 1.2 לעיל וhomogenize הטחול בין הקצוות החלבית של שתי שקופיות. מעביר את ההשעיה לתא צינור חרוטי 15 מיליליטר, להוסיף בינוני RPMI עד 14 מיליליטר. בואו ההשעיה לשבת במשך 5 דקות ולהעביר 13 מיליליטר של אותו צינור חרוטי 15 מיליליטר חדש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בודד תאי CD4 + T טחול באמצעות ערכת בידוד תא CD4 + T על פי הוראות היצרן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת תאים לתוך צינור חרוטי 50 מיליליטר, לשטוף פעמיים עם PBS. תאים גלולים בPBS עם אלבומין 0.5% בסרום שור (BSA) בשעה 1 x 10 6 תאים לכל מיליליטר, ולהוסיף 0.5 μmol / מיליליטר של CFSE. לדגור על 37 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות, מוגנות מפני אור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 5 מיליליטר בינוני מלא קר (RPMI-1640 עם 10% בסרום שור עוברי חום מומת, כרך 1/100אנטיביוטיקה / antimycotics, 1/100 כרך L-גלוטמין ו 1/1000 כרך של 1000 x 2-mercaptoethanol). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה על קרח למשך 5 דקות. לשטוף את תאי פעם עם PBS, לתקן 0.2 x 10 6 תאי CD4 + T שכותרתו ב 2% PFA ולרכוש על cytometer זרימה. השתמש בדוגמה זו כדי לקבוע את הרמה הבסיסית של CFSE. מחדש להשעות את שאר תאים שכותרתו במדיום מלא. </li></ol> 3. תאים Co-תרבות OTII T עם DCs של עכברים נגועים WNV <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות 2 x 10 5 תאים של עכברי OTII CD4 + T מטוהרים לבד או עם DCs המטוהר של wild-type או MyD88 - / - עכברים (2 x 10 4) בצלחת גם 24 עם או בלי שאריות OVA 323-339 (ז 1 / מיליליטר) ב 1 מיליליטר בינוני מלא בכל טוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה תאים ב 37 מעלות צלזיוס למשך 5 ימים. קציר תאים, לשטוף פעמיים במאגר FACS (PBS עם 1% FBS) ולתקן ב0.25 מיליליטר 2% PFA. מערבולת באופן מיידי. </li></ol> 4. ניתוח תזרים Cytometry של במבחנה &lt;/ Em&gt; תא T לקרקע <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרכישה, לחץ לחיצה כפולה על סמל תוכנת cytometry הזרימה. עבור חלקת צפיפות של יניארי FSC-מול SSC-ליניארי, ערוצים בחרו 0 עד 200,000 בFSC-ו0 עד 200,000 על SSC-. ואז ליצור שער על תאי חיים (P2, ראה איור 1 א). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לנתח את עוצמת הקרינה של CFSE, לפתוח את ההיסטוגרמה עבור ערוץ FL1 ולרכוש 20,000 אירועים על האוכלוסייה מגודרת. הגדר את סמן על דגימות תאים בתרבית OTII לבד (איור 1 א). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרכוש דוגמאות לתאי OTII שיתוף תרבותיים עם DCs wild-type (איור 1) או MyD88 - / - DCS (איור 1 ג) באופן דומה. </li></ol> 5. בידוד וגירוי של Splenocytes לציטוקין מבחני <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להדביק B6 וMyD88 - / - עכברים עם המוטציה WNV NS4B-P38G באותו האופן כפי שתואר בSTEp 1.1. ביום 30 לאחר פגיעה, מחדש אתגר ששרד עכברים עם 2000 PFU של ip הזן הפראי סוג WNV בימים 8 ו -21 זיהום על-יסודי WNV או ביום 4 הבאים זיהום משני, להרדים עכברים עם CO 2 לאוסף של טחולים . הערה: השתמשנו 2-3 עכברים בכל קבוצה לכל נקודת זמן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך השעיה תא בודדת של splenocytes כמתואר לעיל בשלב 1.2 ושלב 2.2. ספירת תאים באמצעות hemocytometer מחדש להשעות אותם ב 10 מיליליטר בינוני שלם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדלל תאים עם מדיום מלא ל -2.5 x 10 6 תאים / מיליליטר. הוסף 1 מיליליטר של splenocytes בצינור מיקרו צנטריפוגות 1.5 מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לדמות תאי CD8 + T, לדלל פפטידים WNV הספציפי NS4B וE (SSVWNATTA וIALTFLAV) ל1 מ&quot;ג / מיליליטר בDMSO. לגירוי של תאי CD4 + T, לדלל פפטידים WNV הספציפי ns3 ו- E (RRWCFDGPRTNTILE וPVGRLVTVNPFVSVA) ל1 מ&quot;ג / מיליליטר בDMSO. הוסף 10 μl של פפטידים לתאים followeד על ידי 1 μl של פתרון Brefeldin. השתמש בתאים ללא טיפול פפטידים כפקדים. מערבבים את התאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אגרוף שני חורים עם מחט G 18 בכובע של הצינור. דגירה תאים ב 37 מעלות צלזיוס למשך 5 שעות. </li></ol> 6. תאיים ציטוקין מכתים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת תאי צינור מיקרו צנטריפוגות חדשה. ספין תאים 5 דקות ב300-400 XG ויוצקים את supernatant. הוסף 1 מיליליטר FACS חיץ, ספין 5 דקות ב300-400 XG מחדש להשעות תאים על ידי pipetting עם 120 μl FACS חיץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 2 μl חוסם Fc דגירה תאים בטמפרטורת חדר למשך 10 דקות. הוסף 1 מיליליטר FACS חיץ על צינור אחד. ספין 5 דקות ב300-400 x ז. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשעות מחדש תאים ב300 μl FACS חיץ ולפצל אותם לשלושה צינורות (כ -0.8 x 10 6 תאים לכל צינור). כפי שניתן לראות בטבלה 1, שומרים לעצמנו את הצינור הראשון של כל מצב תרבות לחולדת צביעת IgG-PE. לצינור השני, להוסיף 3 μl של אנטי-CD4 APC לCD4 תאי פפטידים שטופלו, 3 μl אנטי CD8 FITC לתאים שטופלו-פפטידים CD8 או שניהם הנוגדנים לתאים ללא טיפול פפטידים. השתמש בצינור השלישי לצביעת פיצוי. עבור כל מצב תרבות, להשתמש בשלושה צינורות של תאי CD4 מוכתמים בAPC-מצומדות, CD8 FITC- מצומדות או נוגדני PE- כותרת CD3 לבד (3 μl לכל צינור) כפקדי פיצוי על FL1, fl2 וערוצי FL4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים בקצרה מערבולת. השאר על קרח למשך 20 דקות ולהגן מפני אור. להוסיף 1.4 מיליליטר חיץ FACS. ספין 5 דקות ב300-400 XG ויוצקים את supernatant. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להתסיס לשבש תא גלולה (או בקצרה מערבולת). מחדש להשעות תא גלולה ב250 pipetting solutionby הקיבעון / permeabilization μl. דגירה בטמפרטורת חדר למשך 20 דקות ולהגן מפני אור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 1.2 מיליליטר חיץ FACS. דקות ספין 5 ב300-400 תאי XG וגלולים במאגר FACS 300 μl. הערה: בשלב זה, ניתן להעביר תאים למעבדה BL2 לעיבוד נוסף או לאחסן במקרר ומוגן מפני אור לup לשלושה ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 500 μl FACS חיץ. ספין 5 דקות ב300-400 תאי XG וגלולים ב500 μl של חיץ permeabilization / לשטוף 1x. ספין 5 דקות ב300-400 גר &#39;x. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשעות מחדש תאים ב100 μl 1x פרם / לשטוף, להוסיף 3.5 אנטי-IFNγ-PE μl לצינור הוסיף בעבר עם נוגדנים לCD4 ו / או סמני תא CD8 T בשלב 6.3 ועכברוש μl 3.5 IgG-PE בצינור שמורות לשליטת IgG במשך 25 דקות על קרח ולהגן מפני אור. לשטוף את התאים על ידי הוספת 1.4 מיליליטר של חיץ permeabilization / לשטוף 1x. ספין 5 דקות ב300-400 גר &#39;x. חזור על שלב הכביסה על ידי הוספת 1.4 מיליליטר 1x חיץ permeabilization / לשטוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספין 5 דקות ב300-400 XG ולמזוג supernatant. לשטוף את התאים על ידי הוספת 1.4 מיליליטר של חיץ FACS מחדש להשעות ב400 μl של חיץ FACS לרכישה סופית. </li></ol> 7. ניתוח תזרים Cytometry של תאיים ציטוקין מכתים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש באותן הגדרות כמו בשלב הרכישה 4.1. Create שער על תאי חיים (P2, ראה איור 2 א). התאם את המתח באמצעות צינורות פיצוי לכל אחת מקבוצות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שני מגרשי נקודה חדשים פתוחים, אחד כדי להציג נתונים שנאספו לFL1 vs. Fl2 (CD8 vs. IFN-γ), והשני הוא להציג נתונים שנאספו לFL4 vs. Fl2 (CD4 vs. IFN-γ). לרכוש 50,000 אירועים לאוכלוסייה מגודרת של כל דגימה. </li></ol>

<ol>
	<li>Campbell, G. L., Marfin, A. A., Lanciotti, R. S., Gubler, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=West+Nile+virus.">West Nile virus.</a> Lancet Infect. Dis. 2, 519-529 (2002).</li><li>Welte, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+responses+to+an+attenuated+West+Nile+virus+NS4B-P38G+mutant+strain.">Immune responses to an attenuated West Nile virus NS4B-P38G mutant strain.</a> Vaccine. 29, 4853-4861 (2011).</li><li>Iwasaki, A., Medzhitov, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+receptor+control+of+the+adaptive+immune+responses.">Toll-like receptor control of the adaptive immune responses.</a> Nat. Immunol. 5, 987-995 (2004).</li><li>Akira, S., Hemmi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recognition+of+pathogen-associated+molecular+patterns+by+TLR+family.">Recognition of pathogen-associated molecular patterns by TLR family.</a> Immunol. Lett. 85, 85-95 (2003).</li><li>Xie, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+West+Nile+virus+NS4B-P38G+mutant+strain+induces+adaptive+immunity+via+TLR7-MyD88-dependent+and+independent+signaling+pathways.">A West Nile virus NS4B-P38G mutant strain induces adaptive immunity via TLR7-MyD88-dependent and independent signaling pathways.</a> Vaccine. 31 (38), 4143-4151 (2013).</li><li>Fang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=gammadelta+T+cells+promote+the+maturation+of+dendritic+cells+during+West+Nile+virus+infection.">gammadelta T cells promote the maturation of dendritic cells during West Nile virus infection.</a> FEMS Immunol. Med. Microbiol. 59, 71-80 (2010).</li><li>Silva, M. C., Guerrero-Plata, A., Gilfoy, F. D., Garofalo, R. P., Mason, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+activation+of+human+monocyte-derived+and+plasmacytoid+dendritic+cells+by+West+Nile+virus+generated+in+different+host+cells.">Differential activation of human monocyte-derived and plasmacytoid dendritic cells by West Nile virus generated in different host cells.</a> J. Virol. 81, 13640-13648 (2007).</li><li>Shrestha, B., Samuel, M. A., Diamond, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8++T+Cells+Require+Perforin+To+Clear+West+Nile+Virus+from+Infected+Neurons.">CD8+ T Cells Require Perforin To Clear West Nile Virus from Infected Neurons.</a> J. Virol. 80, 119-129 (2006).</li><li>Wang, Y., Lobigs, M., Lee, E., Mullbacher, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8++T+cells+mediate+recovery+and+immunopathology+in+West+Nile+virus+encephalitis.">CD8+ T cells mediate recovery and immunopathology in West Nile virus encephalitis.</a> J. Virol. 77, 13323-13334 (2003).</li><li>Plebanski, M., Katsara, M., Sheng, K. C., Xiang, S. D., Apostolopoulos, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+to+measure+T-cell+responses.">Methods to measure T-cell responses.</a> Expert Rev. Vaccines. 9, 595-600 (2010).</li><li>Lyons, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysing+cell+division+in+vivo+and+in+vitro+using+flow+cytometric+measurement+of+CFSE+dye+dilution.">Analysing cell division in vivo and in vitro using flow cytometric measurement of CFSE dye dilution.</a> J. Immunol. Methods. 243, 147-154 (2000).</li><li>Kraus, A. A., Priemer, C., Heider, H., Kruger, D. H., Ulrich, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+Hantaan+virus-containing+samples+for+subsequent+investigations+outside+biosafety+level+3+facilities.">Inactivation of Hantaan virus-containing samples for subsequent investigations outside biosafety level 3 facilities.</a> Intervirology. 48, 255-261 (2005).</li><li>Saxena, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+hamster-derived+west+nile+virus+isolate+induces+persistent+renal+infection+in+mice.">A hamster-derived west nile virus isolate induces persistent renal infection in mice.</a> PLoS Negl. Trop. Dis. 7, 2275 (2013).</li><li>Welte, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vgamma4++T+cells+regulate+host+immune+response+to+West+Nile+virus+infection.">Vgamma4+ T cells regulate host immune response to West Nile virus infection.</a> FEMS Immunol. Med. Microbiol. 63, 183-192 (2011).</li></ol>

יש לי המחברים אין לחשוף.

WNV הוא פתוגן BL3. בשל תקנות בטיחות, מבחני אימונולוגיים עם דגימות נגועות WNV לעתים קרובות מוגבלים על ידי הזמינות של ציוד במתקנים BL3 או יותר ארוכים ומייגע לבצע. במחקר שנערך לאחרונה, השתמשנו בשתי שיטות מבוססות cytometry זרימה ללמוד תגובות חיסוני בתיווך תא במהלך זיהום WNV 5. ב...

וירוס הנילוס המערבי (WNV), neurotropic, בתוספת חש-flavivirus, הוא איום על בריאות ציבור מתעורר. נכון לעכשיו, אין חיסונים אושרו לשימוש בבני אדם 1. זן WNV מוחלש, שבו יש תחלופה P38G בחלבון 4B nonstructural (NS), ידוע לגרום לא קטלני בעכברים אבל ציטוקינים מולדים גבוה יותר ותגובות של תאי T בעכברים מאשר wild-type WNV NY99 זן 2. עכברים שחוסנו עם המוטציה NS4B-P38G היו מוגנים מפני כל אתגר המשני עם wild-type הקטלני WNV. הדבר מצביע על כך שיש המוטציה NS4B-P38G תכונות מתאימות למועמד אידיאלי חיסון. המנגנונים שבאמצעותם המוטציה NS4B-P38G גורמת חסינות אדפטיבית מגן גבוהה לא ברור הם הבינו עדיין. קולטנים כמו אגרה (TLRs), אשר מכירים הבקשורים דפוסים מולקולריים הפתוגן, ממלאים תפקיד חיוני בייזום של חסינות מולדת לזיהום נגיפי. מסלול איתות TLR ליבה מנצל תגובה הראשונית בידול מיאלואידית gene 88 (MyD88) כמתאם הראשי 3,4. במחקר שנערך לאחרונה, איתות MyD88 הוצגה לשחק תפקיד חשוב בהתפתחות של חסינות תא בתיווך בזיהום המוטציה WNV NS4B- P38G בעכברי 5. תאי Dentritic (DC) הם אחד מתאי מציגי אנטיגן החשובים ביותר מציגים היכולת הייחודית ליזום תגובות תא T העיקרי בזיהום ויראלי 6,7. CD4 + CD8 + ותאי T הן לתרום לחסינות לטווח ארוכה וחשובים להישרדות מארח בעקבות זיהום WNV wild-type 8,9. שני מבחני אימונולוגיים שמשו במחקר זה להעריך את הפונקציות של תאים אלה בעכברים שעברו מוטציה נגועה NS4B-P38G. ראשית, assay תחול במבחנה תא T נוצל כדי להשוות את יכולת מציגי אנטיגן של DCs של נגוע WNV wild-type וMyD88 - / - עכברים. כדי להגביר את הרגישות של assay, CD4 הנאיבי &lt;sup&gt; + תאי T היו מבודדים מעכברים מהונדסים OTII, המבטאים ספציפי Vα2 / Vβ5 TCR לovalbumin העוף פפטיד (OVA) 323 - 339. DCs של עכברים נגועים WNV היה מטוהרים, ושיתוף תרבותי עם carboxyfluorescein succinimidyl פסחא (CFSE ) תאי CD4 + T שכותרתו בנוכחות פפטיד OVA. לאחר 5 ימים של התרבות המשותפת, תאים נקצרו וקבוע עם paraformaldehyde (PFA) ונותחו על ידי הזרימה cytometry. מבחני שגשוג בוצעו באופן מסורתי באמצעות שילוב של 5-bromo-2&#39;-deoxyuridine (BrdU) או deoxyriboside tritiated הטימין (3 HTdr) 10. עם זאת, מבחני אלה הם או רדיואקטיביים ו / או בצורך של ציוד מיוחד ברמת הבטיחות ביולוגית (BL) 3 מתקנים, שבו מחקרי WNV מתבצעים. ניתוח התזרים cytometric של שגשוג לימפוציטים ידי halving הסידורי של עוצמת הקרינה של הצבע החיוני CFSE הפך נפוץ יותר במבחנים חיסוניים כצבע הוא יותר ביציבותושולב באופן שווה לתאים, זוהה בקלות על ידי cytometry זרימה, והוא nonradioactive 11. Assay יש גם את היכולת להעריך את מספר חלוקות תא. אחד יתרונות עיקריים של שימוש assay זה במחקרי WNV הוא שקיבוע של התאים הנגועים ב1-2% PFA יכול להשבית 12 WNV, אשר יאפשר רכישת מדגם עם cytometer זרימה במעבדה BL2. בשלב הבא, הליך מכתים ציטוקינים תאיים שונה (ICS) שימש כדי ללמוד את התפקיד של MyD88 איתות ברגולציה של תגובות תא T הספציפיות WNV בעכברים הנגוע במוטציה NS4B-P38G. ב assay זה, טופלו splenocytes מבודד מעכברים נגועים במבחנה עם פפטידים ספציפיים WNV. Brefeldin התווסף ללשמור ציטוקינים בתוך התא. אחרי 5 שעות דגירה, תאים נקצרו, שטפו ומוכתמים עבור תת תא T. תאים אז היו קבועים בPFA, permeabilized ומוכתמת לאינטרפרון -γ (IFN) ונותחו על ידי זרימת cytometry.כמו עם assay זרימה אחר מבוסס cytometry, פעם אחת מטופלות התאים עם קיבעון וחיץ permeabilization מכיל PFA, ניתן להעביר דגימות נגועות למעבדה BL2 לעיבוד וניתוח נוספים. במספר מחקרים שפורסמו, השתמשנו ICS למדוד פונקציות מפעיל סלולארי T בעכברים נגוע WNV 13,14. למרות שזה מבוסס היטב, חסרון עיקרי אחד של assay זה הוא שההליך הוא ארוך מאוד ויכול להיות זמן רב יותר כאשר היא מבוצעת בתוך מתקני BL3. כאן, שיטה מבוססת ICS צינור מיקרו צנטריפוגות הוצגה להיות יותר ריאלי, קל יותר להמשיך ופחות זמן רב כאשר היא מבוצעת בתוך מעבדה BL3.

<table><tbody><tr><td>RPMI 1640</td><td>Invitrogen</td><td>11875</td><td>warm up at 37 &amp;deg;C</td></tr><tr><td>anti-CD11c magnetic beads</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-052-001</td><td>follow the manufacturer&amp;rsquo;s instructions</td></tr><tr><td>anti-CD4 magnetic beads</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-095-248</td><td>follow the manufacturer&amp;rsquo;s instructions</td></tr><tr><td>CFSE</td><td>Invitrogen</td><td>C34554</td><td></td></tr><tr><td>OVA residue 323-339</td><td>Genscript Corporation</td><td>RP10610</td><td></td></tr><tr><td>Peptides</td><td>Proimmune</td><td>PC0AD-D</td><td></td></tr><tr><td>Brefeldin A solution</td><td>BD Bioscience</td><td>555029</td><td></td></tr><tr><td>Mouse Fc Blocker</td><td>e-Bioscience</td><td>14-0161-85</td><td></td></tr><tr><td>APC-conjugated CD4</td><td>e-Bioscience</td><td>17-0041-81</td><td></td></tr><tr><td>FITC-conjugated CD8</td><td>e-Bioscience</td><td>11-0081-82</td><td></td></tr><tr><td>Fixation/Permeabilization Solution</td><td>BD-Bioscience</td><td>554722</td><td></td></tr><tr><td>Permeabilization/wash buffer</td><td>BD-Bioscience</td><td>554723</td><td></td></tr><tr><td>anti-IFN&amp;gamma;-PE</td><td>e-Bioscience</td><td>12-7311-82</td><td></td></tr><tr><td>Accuri flow cytometer</td><td>BD Bioscience</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

in vitro analysis of myd88-mediated cellular immune response to west nile virus mutant strain infection

וירוס מוחלש הנילוס המערבי (WNV), (NS) 4B-P38G מוטציה nonstructural, מושרה ציטוקינים מולדים גבוה יותר ותגובות של תאי T מסוג wild-WNV בעכברים. לאחרונה, גורם בידול מיאלואידית 88 איתות (MyD88) הוצגה להיות חשוב ליחול תא T ראשוני ופיתוח תא T הזיכרון במהלך זיהום המוטציה WNV NS4B-P38G. במחקר זה, שני לזרום שיטות מבוססות cytometry - במבחנה assay תא T תחול ומכתים ציטוקינים תאיים (ICS) - נוצלו כדי להעריך תאים דנדריטים (DCS) ופונקציות תא T. בתא T תחול assay, התפשטות תאים נותחה על ידי זרימת cytometry הבא שיתוף התרבות של DCs משני הקבוצות של עכברים עם succinimidyl אסתר carboxyfluorescein (CFSE) - שכותרתו תאי CD4 + T של עכברים הטרנסגניים OTII. גישה זו סיפקה קביעה מדויקת של שיעור מתרבים תאי CD4 + T עם שיפור ברגישות לכללית מאשר המסורת באופן משמעותיאל מבחנים עם ריאגנטים רדיואקטיביים. מערכת צינור microcentrifuge הייתה בשימוש בשני הליכי תרבית התאים ומכתים ציטוקינים של פרוטוקול ICS. בהשוואה למערכת מבוססת צלחת תרבית רקמה המסורתית, הליך שינוי זה היה קל יותר לביצוע ברמת בטיחות ביולוגית (BL) 3 מתקנים. יתר על כן, טופלו תאים נגועים WNV- עם paraformaldehyde בשני מבחני, שאפשרו ניתוח נוסף מחוץ מתקני BL3. בסך הכל, ניתן להשתמש במבחנה מבחני אימונולוגיים אלה כדי להעריך ביעילות מערכת חיסונית בתיווך תא במהלך זיהום WNV.

בassay תא T תחול, תאי CD4 + T CFSE שכותרתו היו בתרבית עם DCs מטוהר מנגוע המוטציה wild-type NS4B-P38G וMyD88 - / - עכברים בנוכחותו או היעדריו של פפטידים OVA. תאי T שכותרתו בתרבית לבד עם או בלי OVA במשך 5 ימים שמשו כקבוצת ביקורת שלילית. כפי שניתן לראות באיור 1 א, הכולל תאי T היו סג...

Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection at JoVE.com

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

Two flow cytometry-based methods &#8211; an in vitro T cell priming assay and intracellular cytokine staining were utilized to measure antigen presenting capacity of dendritic cells and antigen-specific T cell responses to a West Nile virus mutant infection in mice.

בניתוח חוץ גופייה של תיווך Myd88 הסלולרי תגובה החיסונית לוירוס הנילוס המערבי זיהום הזנים Mutant

An attenuated West Nile virus (WNV), a nonstructural (NS) 4B-P38G mutant, induced higher innate cytokine and T cell responses than the wild-type WNV in ...

in-vitro-analysis-myd88-mediated-cellular-immune-response-to-west

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

8.1K Views.  The University of Texas Medical Branch. Two flow cytometry-based methods – an in vitro T cell priming assay and intracellular cytokine staining were utilized to measure antigen presenting capacity of dendritic cells and antigen-specific T cell responses to a West Nile virus mutant infection in mice.

Video: In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

Measurement of &#947;HV68 Infection in Mice

&gamma;-Herpesviruses (&gamma;-HVs) are notable for their ability to establish latent infections of lymphoid cells1. The narrow host range of human &gamma;-HVs, such as EBV and KSHV, has severely hindered detailed pathogenic studies. Murine &gamma;-herpesvirus 68 (&gamma;HV68) shares extensive genetic and biological similarities with human &gamma;-HVs and is a natural pathogen of murid rodents2. As such, evaluation of &gamma;HV68 infection of mice inbred strains at different stages of viral infection provides an important model for understanding viral lifecycle and pathogenesis during &gamma;-HVs infection.
Upon intranasal inoculation, &gamma;HV68 infection results in acute viremia in the lung that is later resolved into a latent infection of splenocytes and other cells, which may be reactivated throughout the life of the host3,4. In this protocol, we will describe how to use the plaque assay to assess infectious virus titer in the lung homogenates on Vero cell monolayers at the early stage (5 - 7 days) of post-intranasal infection (dpi). While acute infection is largely cleared 2 - 3 weeks postinfection, a latent infection of &gamma;HV68 is established around 14 dpi and maintained later on in the spleen of the mice. Latent infection usually affects a very small population of cells in the infected tissues, whereby the virus stays dormant and shuts off most of its gene expression. Latently-infected splenocytes spontaneously reactivate virus upon explanting into tissue culture, which can be recapitulated by an infectious center (IC) assay to determine the viral latent load. To further estimate the amount of viral genome copies in the acutely and/or latently infected tissues, quantitative real-time PCR (qPCR) is used for its maximal sensitivity and accuracy. The combined analyses of the results of qPCR and plaque assay, and/or IC assay will reveal the spatiotemporal profiles of viral replication and infectivity in vivo.

&#947;-Herpesviruses (&#947;-HVs) establish life-long persistency in their host. Infection of mice with &#947;-HV68 provides a genetically tractable in vivo model for the characterization of the lifecycle/pathogenesis of &#947;HVs. This protocol describes the detection and quantitation of &#947;HV68 infection at acute and latent stages following infection by plaque-forming, infectious center, and qPCR assays.

מדידה של זיהום γHV68 ב עכברים

&gamma;-Herpesviruses (&gamma;-HVs) are notable for their ability to establish latent infections of lymphoid cells1. The narrow host range of human ...

Dissecting Innate Immune Signaling in Viral Evasion of Cytokine Production

In response to a viral infection, the host innate immune response is activated to up-regulate gene expression and production of antiviral cytokines. Conversely, viruses have evolved intricate strategies to evade and exploit host immune signaling for survival and propagation. Viral immune evasion, entailing host defense and viral evasion, provides one of the most fascinating and dynamic interfaces to discern the host-virus interaction. These studies advance our understanding in innate immune regulation and pave our way to develop novel antiviral therapies.
Murine &#947;HV68 is a natural pathogen of murine rodents. &#947;HV68 infection of mice provides a tractable small animal model to examine the antiviral response to human KSHV and EBV of which perturbation of in vivo virus-host interactions is not applicable. Here we describe a protocol to determine the antiviral cytokine production. This protocol can be adapted to other viruses and signaling pathways.
Recently, we have discovered that &#947;HV68 hijacks MAVS and IKK&#946;, key innate immune signaling components downstream of the cytosolic RIG-I and MDA5, to abrogate NF&#922;B activation and antiviral cytokine production. Specifically, &#947;HV68 infection activates IKK&#946; and that activated IKK&#946; phosphorylates RelA to accelerate RelA degradation. As such, &#947;HV68 efficiently uncouples NF&#922;B activation from its upstream activated IKK&#946;, negating antiviral cytokine gene expression. This study elucidates an intricate strategy whereby the upstream innate immune activation is intercepted by a viral pathogen to nullify the immediate downstream transcriptional activation and evade antiviral cytokine production.

We describe a protocol to measure the antiviral cytokine production in mice infected with a model herpesvirus, murine gamma herpesvirus 68 (&#947;HV68) that is closely-related to human Kaposi&#8217;s sarcoma-associated herpesvirus (KSHV) and Epstein-Barr virus (EBV). Utilizing genetically modified mouse strains and mouse embryonic fibroblasts (MEFs), we assessed the antiviral cytokine production both in vivo and ex vivo. &#8220;Reconstituting&#8221; the expression of innate immune components in knockout embryonic fibroblasts by lentiviral transduction, we further pinpoint specific innate immune molecules and dissect the key signaling events that differentially regulate the antiviral cytokine production.

הביתור מולדת איתות חיסון בהתחמקות ויראלי של ציטוקין ייצור

In response to a viral infection, the host innate immune response is activated to up-regulate gene expression and production of antiviral cytokines. ...

Zika Virus Infectious Cell Culture System and the In Vitro Prophylactic Effect of Interferons

Zika Virus (ZIKV) is an emerging pathogen that is linked to fetal developmental abnormalities such as microcephaly, eye defects, and impaired growth. ZIKV is an RNA virus of the Flaviviridae family. ZIKV is mainly transmitted by mosquitoes, but can also be spread by maternal to fetal vertical transmission as well as sexual contact. To date, there are no reliable treatment or vaccine options available to protect those infected by the virus. The development of a reproducible, effective Zika virus infectious cell culture system is critical for studying the molecular mechanisms of ZIKV replication as well as drug and vaccine development. In this regard, a protocol describing a mammalian cell-based in vitro Zika virus culture system for viral production and growth analysis is reported here. Details on the formation of plaques by Zika virus on a cell monolayer and plaque assay for measuring viral titer are presented. Viral genome replication kinetics and double-stranded RNA genome replicatory intermediates are determined. This culture platform was utilized to screen against a library of a small set of cytokines resulting in the identification of interferon-&#945; (IFN-&#945;), IFN-&#946; and IFN-&#947; as potent inhibitors of Zika viral growth. In summary, an in vitro infectious Zika viral culture system and various virological assays are demonstrated in this study, which has the potential to greatly benefit the research community in elucidating further the mechanisms of viral pathogenesis and the evolution of viral virulence. Antiviral IFN-alpha can further be evaluated as a prophylactic, post-exposure prophylactic, and treatment option for Zika virus infections in high-risk populations, including infected pregnant women.

Zika Virus Infectious Cell Culture System and the In Vitro Prophylactic Effect of Interferons

Zika Virus (ZIKV), an emerging pathogen, is linked to fetal developmental abnormalities and microcephaly. The establishment of an effective infectious cell culture system is crucial for studies of ZIKV replication as well as vaccine and drug development. In this study, various virological assays pertaining to ZIKV are illustrated and discussed.

מערכת תרבית תאי זיהומיות וירוס זיקה ואת<em&gt; במבחנה</em&gt; אפקט מניעתי של אינטרפרונים

Zika Virus (ZIKV) is an emerging pathogen that is linked to fetal developmental abnormalities such as microcephaly, eye defects, and impaired growth. ZIKV ...

Influenza A Virus Studies in a Mouse Model of Infection

Influenza viruses cause over 500,000 deaths worldwide1 and are associated with an annual cost of 12 - 14 billion USD in the United States alone considering direct medical and hospitalization expenses and work absenteeism2. Animal models are crucial in Influenza A virus (IAV) studies to evaluate viral pathogenesis, host-pathogen interactions, immune responses, and the efficacy of current and/or novel vaccine approaches as well as antivirals. Mice are an advantageous small animal model because their immune system is evolutionarily similar to that found in humans, they are available from commercial vendors as genetically identical subjects, there are multiple strains that can be exploited to evaluate the genetic basis of infections, and they are relatively inexpensive and easy to manipulate. To recapitulate IAV infection in humans via the airways, mice are first anesthetized prior to intranasal inoculation with infectious IAVs under proper biosafety containment. After infection, the pathogenesis of IAVs is determined by monitoring daily the morbidity (body weight loss) and mortality (survival) rate. In addition, viral pathogenesis can also be evaluated by assessing virus replication in the upper (nasal mucosa) or lower (lungs) respiratory tract of infected mice. Humoral responses upon IAV infection can be rapidly evaluated by non-invasive bleeding and secondary antibody detection assays aimed at detecting the presence of total or neutralizing antibodies. Here, we describe the common methods used to infect mice intranasally (i.n) with IAV and evaluate pathogenesis, humoral immune responses and protection efficacy.

Influenza A viruses (IAVs) are important human respiratory pathogens. To understand the pathogenicity of IAVs and to perform preclinical testing of novel vaccine approaches, animal models mimicking human physiology are required. Here, we describe techniques to evaluate IAV pathogenesis, humoral responses and vaccine efficacy using a mouse model of infection.

מחקרים וירוס שפעת A במודל של עכברים של זיהום

Influenza viruses cause over 500,000 deaths worldwide1 and are associated with an annual cost of 12 - 14 billion USD in the United States alone ...

A Method to Assess Fc-mediated Effector Functions Induced by Influenza Hemagglutinin Specific Antibodies

Antibodies play a crucial role in coupling the innate and adaptive immune responses against viral pathogens through their antigen binding domains and Fc-regions. Here, we describe how to measure the activation of Fc effector functions by monoclonal antibodies targeting the influenza virus hemagglutinin with the use of a genetically engineered Jurkat cell line expressing an activating type 1 Fc-Fc&#947;R. Using this method, the contribution of specific Fc-Fc&#947;R interactions conferred by immunoglobulins can be determined using an in vitro assay.

We describe a method to measure the activation of Fc-mediated effector functions by antibodies that target the influenza virus hemagglutinin. This assay can also be adapted to assess the ability of monoclonal antibodies or polyclonal sera targeting other viral surface glycoproteins to induce Fc-mediated immunity.

שיטה להערכת פונקציות אפקטור בתיווך Fc המושרה על ידי שפעת Hemagglutinin נוגדנים ספציפיים

Antibodies play a crucial role in coupling the innate and adaptive immune responses against viral pathogens through their antigen binding domains and ...

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

The Zika virus (ZIKV) can induce inflammation in immunoprivileged organs (e.g., the brain and testis), leading to the Guillain-Barr&#233; syndrome and damaging the testes. During an infection with the ZIKV, immune cells have been shown to infiltrate into the tissues. However, the cellular mechanisms that define the protection and/or immunopathogenesis of these immune cells during a ZIKV infection are still largely unknown. Herein, we describe methods to evaluate the virus-specific T-cell functionality in these immunoprivileged organs of ZIKV-infected mice. These methods include a) a ZIKV infection and vaccine inoculation in Ifnar1-/- mice; b) histopathology, immunofluorescence, and immunohistochemistry assays to detect the virus infection and inflammation in the brain, testes, and spleen; c) the preparation of a tetramer of ZIKV-derived T-cell epitopes; d) the detection of ZIKV-specific T cells in the monocytes isolated from the brain, testes, and spleen. Using these approaches, it is possible to detect the antigen-specific T cells that have infiltrated into the immunoprivileged organs and to evaluate the functions of these T cells during the infection: potential immune protection via virus clearance and/or immunopathogenesis to exacerbate the inflammation. These findings may also help to clarify the contribution of T cells induced by the immunization against ZIKV.

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

A protocol to evaluate antigen-specific T-cell responses in the immunoprivileged organs of the Ifnar1-/- murine model for the Zika virus (ZIKV) infection is described. This method is pivotal for investigating the cellular mechanisms of the protection and immunopathogenesis of ZIKV vaccines and is also valuable for their efficacy evaluation.

הערכה של תגובות T-cell Zika וירוס ספציפיים באיברים Immunoprivileged של עכברים נגועים Ifnar1- / -

The Zika virus (ZIKV) can induce inflammation in immunoprivileged organs (e.g., the brain and testis), leading to the Guillain-Barr&#233; syndrome and ...

Arbovirus Infections As Screening Tools for the Identification of Viral Immunomodulators and Host Antiviral Factors

RNA interference- and genome editing-based screening platforms have been widely used to identify host cell factors that restrict virus replication. However, these screens are typically conducted in cells that are naturally permissive to the viral pathogen under study. Therefore, the robust replication of viruses in control conditions may limit the dynamic range of these screens. Furthermore, these screens may be unable to easily identify cellular defense pathways that restrict virus replication if the virus is well-adapted to the host and capable of countering antiviral defenses. In this article, we describe a new paradigm for exploring virus-host interactions through the use of screens that center on naturally abortive infections by arboviruses such as vesicular stomatitis virus (VSV). Despite the ability of VSV to replicate in a wide range of dipteran insect and mammalian hosts, VSV undergoes a post-entry, abortive infection in a variety of cell lines derived from lepidopteran insects, such as the gypsy moth (Lymantria dispar). However, these abortive VSV infections can be &#34;rescued&#34; when host cell antiviral defenses are compromised. We describe how VSV strains encoding convenient reporter genes and restrictive L. dispar cell lines can be paired to set-up screens to identify host factors involved in arbovirus restriction. Furthermore, we also show the utility of these screening tools in the identification of virally encoded factors that rescue VSV replication during coinfection or through ectopic expression, including those encoded by mammalian viruses. The natural restriction of VSV replication in L. dispar cells provides a high signal-to-noise ratio when screening for the conditions that promote VSV rescue, thus enabling the use of simplistic luminescence- and fluorescence-based assays to monitor the changes in VSV replication. These methodologies are valuable for understanding the interplay between host antiviral responses and viral immune evasion factors.

Here, we present the protocols to identify 1) virus-encoded immunomodulators that promote arbovirus replication and 2) eukaryotic host factors that restrict arbovirus replication. These fluorescence- and luminescence-based methods allow researchers to rapidly obtain quantitative readouts of arbovirus replication in simplistic assays with low signal-to-noise ratios.

זיהומים arbovirus כמו כלים ההקרנה לצורך זיהוי גורמים אנטי ויראלי Immunomodulators ומנחה

RNA interference- and genome editing-based screening platforms have been widely used to identify host cell factors that restrict virus replication. ...

Establishment of Viral Infection and Analysis of Host-Virus Interaction in Drosophila Melanogaster

Virus spreading is a major cause of epidemic diseases. Thus, understanding the interaction between the virus and the host is very important to extend our knowledge of prevention and treatment of viral infection. The fruit fly Drosophila melanogaster has proven to be one of the most efficient and productive model organisms to screen for antiviral factors and investigate virus-host interaction, due to powerful genetic tools and highly conserved innate immune signaling pathways. The procedure described here demonstrates a nano-injection method to establish viral infection and induce systemic antiviral responses in adult flies. The precise control of the viral injection dose in this method enables high experimental reproducibility. Protocols described in this study include the preparation of flies and the virus, the injection method, survival rate analysis, the virus load measurement, and an antiviral pathway assessment. The influence effects of viral infection by the flies' background were mentioned here. This infection method is easy to perform and quantitatively repeatable; it can be applied to screen for host/viral factors involved in virus-host interaction and to dissect the crosstalk between innate immune signaling and other biological pathways in response to viral infection.

Establishment of Viral Infection and Analysis of Host-Virus Interaction in Drosophila Melanogaster

This protocol describes how to establish viral infection in vivo in Drosophila melanogaster using the nano-injection method and basic techniques to analyze virus-host interaction.

הקמתה של זיהום נגיפי וניתוח של התערבות מארח-וירוס דרוזופילה Melanogaster

Virus spreading is a major cause of epidemic diseases. Thus, understanding the interaction between the virus and the host is very important to extend our ...

Isolation and Quantification of Zika Virus from Multiple Organs in a Mouse

The methods being presented demonstrate laboratory procedures for the isolation of organs from Zika virus infected animals and the quantification of viral load. The purpose of the procedure is to quantify viral titers in peripheral and CNS areas of the mouse at different time points post infection or under different experimental conditions to identify virologic and immunological factors that regulate Zika virus infection. The organ isolation procedures demonstrated allow for both focus forming assay quantification and quantitative PCR assessment of viral titers. The rapid organ isolation techniques are designed for the preservation of virus titer. Viral titer quantification by focus forming assay allows for the rapid throughput assessment of Zika virus. The benefit of the focus forming assay is the assessment of infectious virus, the limitation of this assay is the potential for organ toxicity reducing the limit of detection. Viral titer assessment is combined with quantitative PCR, and using a recombinant RNA copy control viral genome copy number within the organ is assessed with low limit of detection. Overall these techniques provide an accurate rapid high throughput method for the analysis of Zika viral titers in the periphery and CNS of Zika virus infected animals and can be applied to the assessment of viral titers in the organs of animals infected with most pathogens, including Dengue virus.

The goal of the protocol is to demonstrate the techniques used to investigate viral disease by isolating and quantifying Zika virus, from multiple organs in a mouse following infection.

בידוד וקוונפיקציה של וירוס Zika ממספר איברים בעכבר

The methods being presented demonstrate laboratory procedures for the isolation of organs from Zika virus infected animals and the quantification of viral ...

Detecting Wolbachia Strain wAlbB in Aedes albopictus Cell Lines

As a maternally harbored endosymbiont, Wolbachia infects large proportions of insect populations. Studies have recently reported the successful regulation of RNA virus transmission using Wolbachia-transfected mosquitoes. Key strategies to control viruses include the manipulation of host reproduction via cytoplasmic incompatibility and the inhibition of viral transcripts via immune priming and competition for host-derived resources. However, the underlying mechanisms of the responses of Wolbachia-transfected mosquitoes to viral infection are poorly understood. This paper presents a protocol for the in vitro identification of Wolbachia infection at the nucleic acid and protein levels in Aedes albopictus (Diptera: Culicidae) Aa23 cells to enhance the understanding of the interactions between Wolbachia and its insect vectors. Through the combined use of polymerase chain reaction (PCR), quantitative PCR, western blot, and immunological analytical methods, a standard morphologic protocol has been described for the detection of Wolbachia-infected cells that is more accurate than the use of a single method. This approach may also be applied to the detection of Wolbachia infection in other insect taxa.

Detecting Wolbachia Strain wAlbB in Aedes albopictus Cell Lines

Four methods were used to detect intracellular Wolbachia, which complemented each other and improved the detection accuracy of Wolbachia infection of Aedes albopictus-derived Aa23 and Aa23-T&#160;cured of native Wolbachia infection using antibiotics.

זיהוי זן וולבצ'יה wAlbB ב Aedes albopictus קווי תאים

As a maternally harbored endosymbiont, Wolbachia infects large proportions of insect populations. Studies have recently reported the successful regulation ...

בניתוח חוץ גופייה של תיווך Myd88 הסלולרי תגובה החיסונית לוירוס הנילוס המערבי זיהום הזנים Mutant

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video