SN ו MDD קיבל תמיכה מ- NIH K08 NS083740 ומחלקת UCLA לנוירולוגיה. AJG מודה תמיכה על ידי ד&quot;ר מרים ושלדון אדלסון למחקר רפואי וקרן לארי L. Hillblom. Kln בתודה מודה תמיכה ממרכז שבץ איגוד הלב האמריקני 14BFSC17760005 אס&quot;א-Bugher. חולה, EGS ו STC נתמכו על ידי NIH R01 NS071481. JDH מודה תמיכה מ- NIH K08 NS083740.

השימוש בבעלי חיים בפרוטוקול זה בוצע בהתאם לנהלים שאושרו על ידי האוניברסיטה של ​​טיפול בבעלי חיים קליפורניה בלוס אנג&#39;לס ועדת שימוש. הערה: התחל על ידי זיהוי אוכלוסיית murine היעד. במחקרים קודמים, wild-type זכרו רק עכברי C57 / BL6 שמשו, אולם עכברים מהונדסים או נוק אאוט שונים יכולים לשמש גם. שים לב קואורדינטות stereotactic מבוססים על האנטומיה C57 / BL6. מומלץ לכל משתמש בתחילה לאמת לוקליזציה של שבץ חומר לבן. 1. אינדוקציה שבץ החומר הלבן - גישת זוויתי המדיאלי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בגין על ידי הכנת פיפטה זכוכית משך באמצעות צינור נימי 0.5 מ&quot;מ כך בקוטר דיסטלי הוא בין 15-25 מיקרומטר 11. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן aliquot סטרילי 10 μl של L-נ.י.ו. (N (5) - (1) -iminoethyl-L-ornithine HCl) ב 27.4 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​(130 מיקרומטר) מלח רגיל 0.9% סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מילוי מראש פיפטה זכוכית המשךעם קטן נפח של L-נ.י.ו. (2-5 μl) על ידי הדבקת פיפטה זכוכית צינורות לחבר לקו ואקום. הנח את פיפטה שטוח על גבי ספסל והכנס סוף נכנס הפתרון L-נ.י.ו.. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החלתי את הוואקום עד לפחות 2 מ&quot;מ של חלק 0.5 מ&quot;מ של פיפטה מתמלא. כבה את הוואקום למשוך את פיפטה. מניח אותו בצד עד שלב 1.12. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר בתא אינדוקציה ולגרום הרדמה של העכבר באמצעות isoflurane 32% תקן זרמו מאדה (5 L / min בשאיפה עם 5 חמצן L / min ו -0.5 ליטר / דקה N 2) 1 דקות או עד anesthesized עמוק. העברת העכבר מנגנון stereotactic מצויד מיקרוסקופ stereotactic. תחזוקה לספק הרדמה באמצעות 32% isoflurane זרמו מאדה (2 ליטר / דקה בשאיפה עם 5 חמצן L / min ו -0.5 ליטר / דקה N 2) וכן חרטומו. בדוק עומק ההרדמה עם קמצוץ הבוהן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם את הזרוע הזריק ל -36 °. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפיXA משך בעל פיפטה זכוכית אל הקצה הדיסטלי של מערכת הזרקה בלחץ נמוך נפח וצרף אותו בזרוע הזרקה של ההתקנה stereotactic. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעיל הדובדבן החיה הרדים עם וזלין משחה דמעה מלאכותית מקום מעל שתי העיניים. כן שדה כירורגי סטרילי על ידי צבת וילון סטרילי מעל הראש של החיה עם פתח 5-10 סנטימטר מעל הראש. כן משטח כירורגית aspetic ידי גילוח הפרווה המכסה את הגולגולת. נקה את הקרקפת בבטאדין לסירוגין ו מטליות אלכוהול 70%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך בקרקפת קו האמצע 1.5 ס&quot;מ עם מספריים בסדר סטרילי לחשוף את פני הגולגולת. לייבש את הגולגולת עם מקלון צמר גפן סטרילי באמצעות מיקרוסקופ stereotactic בהגדלה 1-3X, להסיר את כל רקמת periosteal שמעליה באמצעות כלי הנקודות מיקרו סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סמן את גבחת כנקודת התייחסות באמצעות סמן נקודה בסדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקדוח craniotomy 2 מ&quot;מ ellipitical באמצעות מקדח כירורגית Stip בסדר סטרילי0; החל בדיעבד על גבחת והארכת anteriorly רק השמאלי של קו האמצע. סר שבר עצם מכסת רקמות רכות כך בקליפת המוח ניתן דמיינה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור בתחום כירורגית קליפת המוח משטח לח ידי החלת טיפות לסירוגין של תמיסת מלח סטרילית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להטביע טפטפת זכוכית משך לזרוע מזרק של המנגנון stereotactic. יישר את הקצה הדיסטלי של פיפטה עם גבחת ואפס את הקואורדינטות stereotactic. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקדם את פיפטה הקדמי / האחורי (A / P) המדיאלי / לרוחב (M / L) קואורדינטות מופיע בלוח 1 הראשון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקדם את פיפטה אל פני שטח קליפת המוח ואפס מדידת גב / גחון (D / V). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט להעביר את פיפטה לתוך המוח עד שמגיעים D / V הראשון לתאם בטבלה 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מערכת הזרקה בלחץ נמוך נפח נקבע על 20 psi במשך 20 פולסים msec, להזריק 100 nl של L-נ.י.ו. לתוך המוח ולחכות 5 דקות כדי למנוע ריפלוקסאת מסלול פיפטה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש reticle מכויל העינית של המיקרוסקופ stereotactic וכן הגדלה של 3X. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בהתאם לכך, לעקור סך של 0.100 מ&quot;מ 3 (0.5 אורך מ&quot;מ טפטף בקוטר 0.5 מ&quot;מ, מקביל ל -100 NL) מן פיפטה זכוכית משך עבור כל קבוצה של קואורדינטות. באמצעות reticule, למדוד ולתקנן שכן כל להגדיר משתנה בהתאם הגדלה וקשקשת בשימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למדידת נפח מדויקת במהלך כל זריקה, מתקרב פיפטה זוויתי עם מיקרוסקופ מהצד כך המניסקוס נוזל-האוויר יש נוף sagittal. המניסקוס אמור להופיע באותו מישור המוקד של שני הקיר הפנימי והחיצוני של פיפטה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט למשוך את פיפטה וחזר על צעדי 1.13-1.16.3 על הסט השני ושלישי של קואורדינטות מופיעות בלוח 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הזריקה האחרונה, להסיר את פיפטה ולמקם שעוות עצם מספיק כדי למלא את אתר craniotomy. אpproximate קצות הפצע בקרקפת להיקשר עם דבק עורי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק 0.1 מיליליטר של 0.5% Marcaine לשולי הפצע באמצעות מחט 30 G סטרילי כדי למנוע למנוע כאב מקומי המשויכים חתך בקרקפת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחזירים את החיה לאנטיביוטיקה שלאחר הניתוח דיור ואספקה ​​(0.48 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​trimethoprim-sulfamethoxazole, או 0.5 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​levofloxacin) במי השתייה במשך 5 ימים. </li></ol> 2. אינדוקצית שבץ חומר לבן - גישת זוויתי אחורית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע שלבים 1.1-1.12 כפי בפרוטוקול הגישה זוויתי המדיאלי, למעט להתאים את הזרוע ההזרקה של ההתקנה stereotactic ל -45 מעלות בכיוון הקדמי אל האחורי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקדם את פיפטה A / P ו- M / L קואורדינטות תחילה סיפקה בטבלה 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שלבים נותרים שלמים 1.14-1.20 כמו בפרוטוקול הגישה זוויתי לרוחב. </li></ol> 3. תיוג המדרדר עצבי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כן סטרילית 10aliquot μl של L-נ.י.ו. ב 54.8 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​סליין 0.9% נורמלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כן aliquot סטרילי של 20% Fluororuby (או 20% אמינים dextran biotinylated או 2% Fluorogold) סליין 0.9% נורמלים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדלל יחד 1: 1 עבור ריכוזי הסופי של 27.4 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​L-נ.י.ו. ו -10% Fluororuby. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצעו את פרוטוקול שבץ כנ&quot;ל בצעדים 1.3-1.23. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דמיינו את נותב ניאון מקורי בסעיף הרקמה על ידי קיבעון זלוף, cryosectioning מיקרוסקופ כפי שתואר לעיל 8. </li></ol> עיבוד רקמות 4. Immunofluorescence <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בהפרש שלאחר שבץ מתאים הנעים בין 3 שעות ל -14 ימים לאחר שבץ, להרדים עכברים באמצעות מנת יתר isoflurane או מקומיים IACUC אושרו הליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את חלל בית החזה באמצעות מספריים בזווית וכנס מחט פרפר 23 G לתוך החדר השמאלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח חתך קטן העלייה הימנית באמצעות מספריים בסדר לאפשר מסלול יצוא של נוזל זלוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Transcardially perfuse עם 30-40 מ&quot;ל של תמיסת מלח פוספט שנאגרו קר ואחריו 30-40 מ&quot;ל של paraformaldehyde 4% קר בשיעור של 10 מ&quot;ל / דק &#39;ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לערוף את העכבר להסיר את המוח באמצעות מספריים סטרילי כדי לפתוח את הגולגולת בדיעבד ולאחר מכן הסר בעדינות את הגולגולת שמעליה עם מרית, מניחים את המוח לתוך 4% קר PFA למשך 24 שעות, ולאחר מכן להעביר סוכרוז 30% ב PBS במשך 48 שעות . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כן ארבעים סעיפים צפים מיקרון באמצעות cryostat ולבצע עיבוד נוגדנים כפי שתואר לעיל 6-8. במחקר זה, השתמש הנוגדנים הבאים: ארנב 200 נגד neurofilament (דילול 1: 500); ארנב-vimentin אנטי (1: 500); עז נגד GFAP (1: 500); ארנב נגד תייבא-1 (1: 1,000). </li></ol> עיבוד רקמות 5. חלבון או ניתוח RNA <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בהפרש שלאחר שבץ מתאים הנעים בין 3 שעות ל -14 ימים לאחר שבץ, להרדים באמצעות מנת יתר isoflurane או מקומיים IACUC אושר הליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לערוף אתעכבר ולהסיר את המוח באמצעות מספריים סטרילי כדי לפתוח את הגולגולת בדיעבד ולאחר מכן הסר בעדינות את הגולגולת שמעליה עם מרית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס מרית 4 מ&quot;מ סטרילי בקדמת המוח לנתק את הנורה חוש הריח ואת עצבי הראייה. הרם בעדינות את המוח מתוך calvarium ומניחים למאגר לנתיחה קר כקרח (תמיסת מלח מאוזן של 1x האנק, 25 מ&quot;מ HEPES-KOH, pH 7.4, 35 גלוקוז מ&quot;מ, 4 מ&quot;מ סודיום ביקרבונט, ו 0.01 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​cyclohexamide). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות בלוק מוח סכיני גילוח חדשים סטרילי, להכין 2-3 לוחות מ&quot;מ המכילים שבץ ומקום למאגר לנתיחה קר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחת מיקרוסקופ לנתח, לזהות את הקורטקס המוטורי הבסיסי חומר לבן בחצי הכדור מוזרק. במרווחים שלאחר בתנועה ארוכה באזור ניתן לזהות ויזואלית על ידי נימק מוקדים וחיוורון המיאלין. הערה: במרווחי מוקדם שלאחר שבץ, הזרקה של L-נ.י.ו. מעורבב עם 1 μl של 10% מהיר גרין יכול לאפשר זיהוי חזותי של שבץ ( <strong&gt; איור 4 א). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחת הדרכתו של מיקרוסקופ לנתח באמצעות אזמל טרי, בזהירות לנתח את האזור של חומר לבן המכיל את השבץ, המזוהה באמצעות תיוג ירוק מהיר או אובדן רקמות. סר הקורטקס שמעליה בסטריאטום בסיסית כפי רצוי. </li></ol>

<ol>
	<li>Go, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+disease+and+stroke+statistics--2014+update:+a+report+from+the+American+Heart+Association.">Heart disease and stroke statistics--2014 update: a report from the American Heart Association.</a> Circulation. 129, 28-292 (2014).</li><li>Saini, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silent+stroke:+not+listened+to+rather+than+silent.">Silent stroke: not listened to rather than silent.</a> Stroke. 43, 3102-3104 (2012).</li><li>Koton, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burden+and+outcome+of+prevalent+ischemic+brain+disease+in+a+national+acute+stroke+registry.">Burden and outcome of prevalent ischemic brain disease in a national acute stroke registry.</a> Stroke. 44, 3293-3297 (2013).</li><li>Jiwa, N. S., Garrard, P., Hainsworth, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+of+vascular+dementia+and+vascular+cognitive+impairment:+a+systematic+review.">Experimental models of vascular dementia and vascular cognitive impairment: a systematic review.</a> J Neurochem. 115, 814-828 (2010).</li><li>Sozmen, E. G., Hinman, J. D., Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+that+matter:+white+matter+stroke+models.">Models that matter: white matter stroke models.</a> Neurotherapeutics. 9, 349-358 (2012).</li><li>Sozmen, E. G., Kolekar, A., Havton, L. A., Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+white+matter+stroke+model+in+the+mouse:+axonal+damage,+progenitor+responses+and+MRI+correlates.">A white matter stroke model in the mouse: axonal damage, progenitor responses and MRI correlates.</a> J Neurosci Methods. 180, 261-272 (2009).</li><li>Rosenzweig, S., Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-dependent+exacerbation+of+white+matter+stroke+outcomes:+a+role+for+oxidative+damage+and+inflammatory+mediators.">Age-dependent exacerbation of white matter stroke outcomes: a role for oxidative damage and inflammatory mediators.</a> Stroke. 44, 2579-2586 (2013).</li><li>Hinman, J. D., Rasband, M. N., Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remodeling+of+the+axon+initial+segment+after+focal+cortical+and+white+matter+stroke.">Remodeling of the axon initial segment after focal cortical and white matter stroke.</a> Stroke. 44, 182-189 (2013).</li><li>McCall, T. B., Feelisch, M., Palmer, R. M., Moncada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+N-iminoethyl-L-ornithine+as+an+irreversible+inhibitor+of+nitric+oxide+synthase+in+phagocytic+cells.">Identification of N-iminoethyl-L-ornithine as an irreversible inhibitor of nitric oxide synthase in phagocytic cells.</a> Brit j pharmacol. 102, 234-238 (1991).</li><li>Gadea, A., Aguirre, A., Haydar, T. F., Gallo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelin-1+regulates+oligodendrocyte+development.">Endothelin-1 regulates oligodendrocyte development.</a> J Neurosci. 29, 10047-10062 (2009).</li><li>Dean, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+(pulling)+of+needles+for+gene+delivery+by+microinjection.">Preparation (pulling) of needles for gene delivery by microinjection.</a> CSH prot. , (2006).</li><li>Hughes, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+lesions+in+the+rat+central+nervous+system+induced+by+endothelin-1.">Focal lesions in the rat central nervous system induced by endothelin-1.</a> J. Neuropathol. Exp. Neurol. 62, 1276-1286 (2003).</li><li>Whitehead, S. N., Hachinski, V. C., Cechetto, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+between+a+rat+model+of+cerebral+ischemia+and+beta-amyloid+toxicity:+inflammatory+responses.">Interaction between a rat model of cerebral ischemia and beta-amyloid toxicity: inflammatory responses.</a> Stroke. 36, 107-112 (2005).</li><li>Frost, S. B., Barbay, S., Mumert, M. L., Stowe, A. M., Nudo, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+animal+model+of+capsular+infarct:+endothelin-1+injections+in+the+rat.">An animal model of capsular infarct: endothelin-1 injections in the rat.</a> Behav Brain Res. 169, 206-211 (2006).</li><li>Horie, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+focal+cerebral+ischemia+using+endothelin-1.">Mouse model of focal cerebral ischemia using endothelin-1.</a> J Neurosci Methods. 173, 286-290 (2008).</li><li>Wang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cognitive+deficits+and+delayed+neuronal+loss+in+a+mouse+model+of+multiple+microinfarcts.">Cognitive deficits and delayed neuronal loss in a mouse model of multiple microinfarcts.</a> Neuroscience. 32, 17948-17960 (2012).</li><li>Shih, A. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+smallest+stroke:+occlusion+of+one+penetrating+vessel+leads+to+infarction+and+a+cognitive+deficit.">The smallest stroke: occlusion of one penetrating vessel leads to infarction and a cognitive deficit.</a> Nat Neurosci. 16, 55-63 (2013).</li><li>Jung, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+endothelin+receptor+A+during+myelination+of+developing+oligodendrocytes.">The role of endothelin receptor A during myelination of developing oligodendrocytes.</a> J Korean Med Sci. 26, 92-99 (2011).</li></ol>

אף לא אחד

מספר הדגמים הקודמים של שבץ קורטיקליים תואר כולל זריקות מוקד של אנדותלין -1 לתוך הקפסולה הפנימית, חומר לבן קורטיקליים בסטריאטום ב 6,15 עכברוש 12-14 והעכבר. מודלים מאוחרים יותר של משייכות מוקדים קטנות נצלו הזרקת microemboli כולסטרול בעורק התרדמה 16 ו חסימת photothro...

Stroke affecting the subcortical white matter is a common clinical entity, accounting for up to 25% of clinical strokes annually in the US 1. Ischemic damage to white matter also occurs silently at a significantly higher rate and contributes to the development of vascular dementia 2,3. Presently, patients with this form of cerebral ischemia have few, if any treatment choices. Despite the clinical importance of this disease, few clinically relevant animal models exist 4,5. 
The goal of this protocol is to produce a focal ischemic lesion within the murine white matter. This murine model of human disease allows the specific study of axonal injury response to stroke and how the cellular elements of white matter, namely oligodendrocytes and astrocytes along with axons, respond to and repair after stroke.
Previous reports have described a model of subcortical white matter stroke using endothelin-1 (ET-1) 6 that is similar to the one described here. Several key changes to the experimental protocol have been made thereby the potential uses of this model have expanded 7,8. This protocol provides a reliable and modifiable strategy to produce a focal stroke within mouse brain white matter. 
The major advantages of this model are the use of a chemical endothelial nitric oxide synthase (eNOS) inhibitor N(5)-(1)-iminoethyl-L-ornithine HCl (L-Nio) 9 with no known paracrine effects on cellular elements of white matter which had been a complication of models using endothelin-1 10. In addition, the stereotactic targeting of white matter in the mouse allows the use of any variety of transgenic or knockout strains, greatly expanding the available tools to determine the effect of stroke on brain white matter. Here, two variations on this technique are described and demonstrate some of the additional variations that can be utilized to enhance the understanding of axonal and white matter damage and repair after stroke.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="725">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">L-N5-(1-Iminoethyl)ornithine, Dihydrochloride</td>
			<td style="width:204px;">Calbiochem</td>
			<td style="width:133px;">400600-20MG</td>
			<td style="width:81px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isoflurane</td>
			<td>Phoenix Pharmaceutical, Inc.</td>
			<td>NDC 57319-559-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Capillary tubes</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>50-821-807</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Picospritzer</td>
			<td>Parker Instrumentation</td>
			<td>Picospritzer II</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Stereotactic setup</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>KSC51725</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pipette puller</td>
			<td>KOPF</td>
			<td>Model 720</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Stereomicroscope SZ51</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>88-124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fine scissors</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>14084-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Forceps</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>PY2 72-8547</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Curved Forceps</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>PY2 72-8598</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Blunt dissection tool</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>10066-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Drill</td>
			<td>Dremel</td>
			<td>8220-1/28</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Drill bits</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>19007-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vetbond</td>
			<td>3M</td>
			<td>1469SB&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Marcaine</td>
			<td>HOSPIRA</td>
			<td>NDC 0409-1610-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trimethoprim-Sulfamethaxole</td>
			<td>STI Pharmacy</td>
			<td>NDC 54879-007-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fluororuby</td>
			<td>Fluorochrome Inc</td>
			<td>30mg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Paraformaldehyde</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>O4042-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sucrose</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP220-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cryostat</td>
			<td>Leica CM3050 S</td>
			<td>14047033518</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass slides</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>12-544-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fast Green&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F7252-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dissection microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ1500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">23 gauge butterfly needle</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-840-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10X Hank&#39;s Balanced Salt Solution</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>14065056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1M HEPES-KOH, pH 7.4</td>
			<td>Affymetrix</td>
			<td>16924</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">D-Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G8270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cyclohexamide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>01810</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a versatile murine model of subcortical white matter stroke for the study of axonal degeneration and white matter neurobiology

שבץ המשפיעים חשבונות בחומר לבנים של עד 25% של מצגות שבץ קליניות, מתרחש בשקט בשיעורים שעשויות להיות 5-10 לקפל יותר, ותורם רב להתפתחות של דמנציה וסקולרית. דגמים מעטה לשבץ חומר לבן מוקדים להתקיים זה חוסר הדגמים המתאימים עכב את הבנת מנגנוני הנוירולוגית המעורבת בתגובת פציעה ותיקון לאחר סוג זה של שבץ. המגבלה העיקרית של מודלי שבץ קורטיקליים אחרים היא שהם לא focally להגביל את האוטם אל החומר הלבן או אומתו בעיקר במינים שאינם בעכברים. זה מגביל את היכולת ליישם המגוון הרחב של כלי מחקר בעכברים ללמוד לנוירוביולוגיה לשבץ חומר לבן. כאן אנו מציגים מתודולוגיה לייצור האמין של שבץ מוחה מוקדים בעניין בעכברים לבן באמצעות זריקה מקומית של מעכב eNOS בלתי הפיך. כמו כן, אנו מציגים כמה וריאציות על הפרוטוקול הכללי כולל שני stereotactic ייחודיוריאציות, מעקב עצבי מדרדר, כמו גם תיוג רקמות טרי לנתיחה המרחיב את היישומים האפשריים מאוד של טכניקה זו. וריאציות אלו מאפשרות גישות מרובות כדי לנתח את השפעות הנוירולוגית של צורה נפוצה, אלתרה זה של שבץ.

בעזרת המודל שהוצג, קליפת הסנסורית הבסיסית forelimb חומר הלבן יכולה להיות ממוקדת באופן מהימן. מודל שבץ כימי מושרה זו מפיק אובדן axonal ו המיאלין מוקדי, astrocytosis, ו microgliosis (איור 1), כפי שנראה בדרך כלל אוטמי אַגמִימִי אדם. באמצעות שלוש זריקות, מודל שימושי...

Watch this Scientific Journal Video about A Versatile Murine Model of Subcortical White Matter Stroke for the Study of Axonal Degeneration and White Matter Neurobiology at JoVE.com

A Versatile Murine Model of Subcortical White Matter Stroke for the Study of Axonal Degeneration and White Matter Neurobiology

Here we present methodology for the production of a focal stroke in murine white matter by local injection of an irreversible endothelial nitric oxide synthase (eNOS) inhibitor (L-Nio). Presented are two stereotactic variations, retrograde neuronal tracing, and fresh tissue labeling and dissection that expand the potential applications of this technique.

שבץ בחומר הלבן צדדי דגם Murine של קורטיקליים לחקר ניוון אקסונלית ולבן Matter לנוירוביולוגיה

Stroke affecting white matter accounts for up to 25% of clinical stroke presentations, occurs silently at rates that may be 5-10 fold greater, and ...

a-versatile-murine-model-subcortical-white-matter-stroke-for-study

Research

JoVE Journal

Medicine

8.0K Views.  University of California, Los Angeles. Here we present methodology for the production of a focal stroke in murine white matter by local injection of an irreversible endothelial nitric oxide synthase (eNOS) inhibitor (L-Nio). Presented are two stereotactic variations, retrograde neuronal tracing, and fresh tissue labeling and dissection that expand the potential applications of this technique.

Video: A Versatile Murine Model of Subcortical White Matter Stroke for the Study of Axonal Degeneration and White Matter Neurobiology

A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize their blood glucose levels, islet transplantation has been proposed to be a potential treatment for type 1 diabetes 1,2. More recently, advances in human islet transplantation have further strengthened this view 1,3. However, two major limitations prevent islet transplantation from being a widespread clinical reality: (a) the requirement for large numbers of islets per patient, which severely reduces the number of potential recipients, and (b) the need for heavy immunosuppression, which significantly affects the pediatric population of patients due to their vulnerability to long-term immunosuppression. Strategies that can overcome these limitations have the potential to enhance the therapeutic utility of islet transplantation.
Islet transplantation under the mouse kidney capsule is a widely accepted model to investigate various strategies to improve islet transplantation. This experiment requires the isolation of high quality islets and implantation of islets to the diabetic recipients. Both procedures require surgical steps that can be better demonstrated by video than by text. Here, we document the detailed steps for these procedures by both video and written protocol. We also briefly discuss different transplantation models: syngeneic, allogeneic, syngeneic autoimmune, and allogeneic autoimmune.

Transplantation of isolated islets has been proposed to be a potential treatment for type 1 diabetes. Here we describe a method to isolate islets from mouse pancreata and transplant them to the subcapsular space of the kidney.

שיטה בידוד איילט Murine והשתלות כליה Subcapsular

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize ...

Biomarkers in an Animal Model for Revealing Neural, Hematologic, and Behavioral Correlates of PTSD

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for objective diagnosis but also for the evaluation of therapeutic efficacy and resilience to trauma. Ongoing research is directed at identifying molecular biomarkers for PTSD, including traumatic stress induced proteins, transcriptomes, genomic variances and genetic modulators, using biologic samples from subjects' blood, saliva, urine, and postmortem brain tissues. However, the correlation of these biomarker molecules in peripheral or postmortem samples to altered brain functions associated with psychiatric symptoms in PTSD remains unresolved. Here, we present an animal model of PTSD in which both peripheral blood and central brain biomarkers, as well as behavioral phenotype, can be collected and measured, thus providing the needed correlation of the central biomarkers of PTSD, which are mechanistic and pathognomonic but cannot be collected from people, with the peripheral biomarkers and behavioral phenotypes, which can.
Our animal model of PTSD employs restraint and tail shocks repeated for three continuous days - the inescapable tail-shock model (ITS) in rats. This ITS model mimics the pathophysiology of PTSD 17, 7, 4, 10. We and others have verified that the ITS model induces behavioral and neurobiological alterations similar to those found in PTSD subjects 17, 7, 10, 9. Specifically, these stressed rats exhibit (1) a delayed and exaggerated startle response appearing several days after stressor cessation, which given the compressed time scale of the rat's life compared to a humans, corresponds to the one to three months delay of symptoms in PTSD patients (DSM-IV-TR PTSD Criterian D/E 13), (2) enhanced plasma corticosterone (CORT) for several days, indicating compromise of the hypothalamopituitary axis (HPA), and (3) retarded body weight gain after stressor cessation, indicating dysfunction of metabolic regulation.
The experimental paradigms employed for this model are: (1) a learned helplessness paradigm in the rat assayed by measurement of acoustic startle response (ASR) and a charting of body mass; (2) microdissection of the rat brain into regions and nuclei; (3) enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for blood levels of CORT; (4) a gene expression microarray plus related bioinformatics tools 18. This microarray, dubbed rMNChip, focuses on mitochondrial and mitochondria-related nuclear genes in the rat so as to specifically address the neuronal bioenergetics hypothesized to be involved in PTSD.

We describe a rat model of post traumatic stress disorder (PTSD) that reveals the persistent alterations in neuroendocrine function and the delayed long-term, exaggerated fear response, characteristic of PTSD patients. The animal model and methods described here are useful for correlating biomarkers in brain nuclei, which are mechanistic but cannot be measured in patients, with biomarkers in peripheral white blood cells, which can.

סמנים ביולוגיים במודל חיה לחשיפה קושרת עצבית, המטולוגית, והתנהגות של PTSD

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for ...

A Murine Model of Stent Implantation in the Carotid Artery for the Study of Restenosis

Despite the considerable progress made in the stent development in the last decades, cardiovascular diseases remain the main cause of death in western countries. Beside the benefits offered by the development of different drug-eluting stents, the coronary revascularization bears also the life-threatening risks of in-stent thrombosis and restenosis. Research on new therapeutic strategies is impaired by the lack of appropriate methods to study stent implantation and restenosis processes. Here, we describe a rapid and accessible procedure of stent implantation in mouse carotid artery, which offers the possibility to study in a convenient way the molecular mechanisms of vessel remodeling and the effects of different drug coatings.

A model of stent implantation in mouse carotid artery is described. Compared to other similar methods, this procedure is very rapid, simple and accessible, offering the possibility to study in a convenient way the vascular wall reaction to different drug-eluting stents and the molecular mechanisms of restenosis.

דגם Murine של השתלת תומכן בעורק הראשי לחקר restenosis

Despite  the considerable progress made in the stent development in the last decades,  cardiovascular diseases remain the main cause of death in western ...

A Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

In this video publication a standardized mouse model of subarachnoid hemorrhage (SAH) is presented. Bleeding is induced by endovascular Circle of Willis perforation (CWp) and proven by intracranial pressure (ICP) monitoring. Thereby a homogenous blood distribution in subarachnoid spaces surrounding the arterial circulation and cerebellar fissures is achieved. Animal physiology is maintained by intubation, mechanical ventilation, and continuous on-line monitoring of various physiological and cardiovascular parameters: body temperature, systemic blood pressure, heart rate, and hemoglobin saturation. Thereby the cerebral perfusion pressure can be tightly monitored resulting in a less variable volume of extravasated blood. This allows a better standardization of endovascular filament perforation in mice and makes the whole model highly reproducible. Thus it is readily available for pharmacological and pathophysiological studies in wild type and genetically altered mice.

A standardized mouse model of subarachnoid hemorrhage by intraluminal Circle of Willis perforation is described. Vessel perforation and subarachnoid bleeding are monitored by intracranial pressure monitoring. In addition various vital parameters are recorded and controlled to maintain physiologic conditions.

מודל Murine של תת עכבישי דימום

In this video publication a standardized mouse model of subarachnoid  hemorrhage (SAH) is presented. Bleeding is induced by endovascular Circle of  Willis ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As such, primary or &#39;neuronal-like&#39; cell culture systems are commonly utilized. While&#160;these systems are relatively easy to work with, and are useful model systems in which various functional outcomes (such as cell death) can be readily quantified, the examined outcomes and pathways in cultured immature neurons (such as excitotoxicity-mediated cell death pathways) are not necessarily the same as those observed in mature brain, or in intact tissue. Therefore, there is the need to develop models in which cellular mechanisms in mature neural tissue can be examined. We have developed an in vitro technique that can be used to investigate a variety of molecular pathways in intact nervous tissue. The technique described herein utilizes rat cortical tissue, but this technique can be adapted to use tissue from a variety of species (such as mouse, rabbit, guinea pig, and chicken) or brain regions (for example, hippocampus, striatum, etc.). Additionally, a variety of stimulations/treatments can be used (for example, excitotoxic, administration of inhibitors, etc.). In conclusion, the brain slice model described herein can be used to examine a variety of molecular mechanisms involved in excitotoxicity-mediated brain injury.

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

We have developed a brain slice model which can be used to examine molecular mechanisms involved in excitotoxicity-mediated brain injury.&#160;This technique generates viable mature brain tissue and reduces animal numbers required for experimentation, whilst keeping the neuronal circuitry, cellular interactions, and postsynaptic compartments partly intact.

הפעלת יתר רעיל גירוי של המוח כMicroslices<em&gt; במבחנה</em&gt; דגם של שבץ

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

DTI of the Visual Pathway - White Matter Tracts and Cerebral Lesions

DTI is a technique that identifies white matter tracts (WMT) non-invasively in healthy and non-healthy patients using diffusion measurements. Similar to visual pathways (VP), WMT are not visible with classical MRI or intra-operatively with microscope. DTI will help neurosurgeons to prevent destruction of the VP while removing lesions adjacent to this WMT. We have performed DTI on fifty patients before and after surgery between March 2012 to January 2014. To navigate we used a 3DT1-weighted sequence. Additionally, we performed a T2-weighted and DTI-sequences. The parameters used were, FOV: 200 x 200 mm, slice thickness: 2 mm, and acquisition matrix: 96 x 96 yielding nearly isotropic voxels of 2 x 2 x 2 mm. Axial MRI was carried out using a 32 gradient direction and one b0-image. We used Echo-Planar-Imaging (EPI) and ASSET parallel imaging with an acceleration factor of 2 and b-value of 800 s/mm&#178;. The scanning time was less than 9 min.
The DTI-data obtained were processed using a FDA approved surgical navigation system program which uses a straightforward fiber-tracking approach known as fiber assignment by continuous tracking (FACT). This is based on the propagation of lines between regions of interest (ROI) which is defined by a physician. A maximum angle of 50, FA start value of 0.10 and ADC stop value of 0.20 mm&#178;/s were the parameters used for tractography.
There are some limitations to this technique. The limited acquisition time frame enforces trade-offs in the image quality. Another important point not to be neglected is the brain shift during surgery. As for the latter intra-operative MRI might be helpful. Furthermore the risk of false positive or false negative tracts needs to be taken into account which might compromise the final results.

Diffusion tensor imaging (DTI) was performed to try to depict the major parts of the visual pathway. The goal was to use an FDA approved standard commercial workstation which could be used for everyday routine in order to try to reduce postoperative damage of the visual pathway in the patients.

קטעי חומר לבנים ופצעי מוחין - DTI של הנתיב החזותי

DTI is a technique that identifies white matter tracts (WMT) non-invasively in healthy and non-healthy patients using diffusion measurements. Similar to ...

Isolation and Excision of Murine Aorta; A Versatile Technique in the Study of Cardiovascular Disease

Cardiovascular disease is a broad term describing disease of the heart and/or blood vessels. The main blood vessel supplying the body with oxygenated blood is the aorta. The aorta may become affected in diseases such as atherosclerosis and aneurysm. Researchers investigating these diseases would benefit from direct observation of the aorta to characterize disease progression as well as to evaluate efficacy of potential therapeutics. The goal of this protocol is to describe proper isolation and excision of the aorta to aid investigators researching cardiovascular disease. Isolation and excision of the aorta allows investigators to look at gross morphometric changes as wells as allowing them to preserve and stain the tissue to look at histologic changes if desired. The aorta may be used for molecular studies to evaluate protein and gene expression to discover targets of interest and mechanisms of action. This technique is superior to imaging modalities as they have inherent limitations in technology and cost. Additionally, primary isolated cells from a freshly isolated and excised aorta can allowing researchers to perform further in situ and in vitro assays. The isolation and excision of the aorta has the limitation of having to sacrifice the animal however, in this case the benefits outweigh the harm as it is the most versatile technique in the study of aortic disease.

Pathology of the aorta can lead to severe morbidity and mortality, therefore research of disease progression and potential therapies is warranted. Here, we present a protocol to isolate and excise the murine aorta to aid researchers in their investigation of cardiovascular disease.

בידוד וכריתה של אב העורקים Murine; טכניקה רב-תכליתית בחקר לב וכלי דם מחלות

Cardiovascular disease is a broad term describing disease of the heart and/or blood vessels. The main blood vessel supplying the body with oxygenated ...

A Simple Critical-sized Femoral Defect Model in Mice

While bone has a remarkable capacity for regeneration, serious bone trauma often results in damage that does not properly heal. In fact, one tenth of all limb bone fractures fail to heal completely due to the extent of the trauma, disease, or age of the patient. Our ability to improve bone regenerative strategies is critically dependent on the ability to mimic serious bone trauma in test animals, but the generation and stabilization of large bone lesions is technically challenging. In most cases, serious long bone trauma is mimicked experimentally by establishing a defect that will not naturally heal. This is achieved by complete removal of a bone segment that is larger than 1.5 times the diameter of the bone cross-section. The bone is then stabilized with a metal implant to maintain proper orientation of the fracture edges and allow for mobility. 
Due to their small size and the fragility of their long bones, establishment of such lesions in mice are beyond the capabilities of most research groups. As such, long bone defect models are confined to rats and larger animals. Nevertheless, mice afford significant research advantages in that they can be genetically modified and bred as immune-compromised strains that do not reject human cells and tissue.
Herein, we demonstrate a technique that facilitates the generation of a segmental defect in mouse femora using standard laboratory and veterinary equipment. With practice, fabrication of the fixation device and surgical implantation is feasible for the majority of trained veterinarians and animal research personnel. Using example data, we also provide methodologies for the quantitative analysis of bone healing for the model.

Animal models are frequently employed to mimic serious bone injury in biomedical research. Due to their small size, establishment of stabilized bone lesions in mice are beyond the capabilities of most research groups. Herein, we describe a simple method for establishing and analyzing experimental femoral defects in mice.

דגם פגם עצם הירך קריטית בגודל פשוט בעכברים

While bone has a remarkable capacity for regeneration, serious bone trauma often results in damage that does not properly heal. In fact, one tenth of all ...

Oxygen-Glucose Deprivation and Reoxygenation as an In Vitro Ischemia-Reperfusion Injury Model for Studying Blood-Brain Barrier Dysfunction

Ischemia-Reperfusion (IR) injury is known to contribute significantly to the morbidity and mortality associated with ischemic strokes. Ischemic cerebrovascular accidents account for 80% of all strokes. A common cause of IR injury is the rapid inflow of fluids following an acute/chronic occlusion of blood, nutrients, oxygen to the tissue triggering the formation of free radicals.
Ischemic stroke is followed by blood-brain barrier (BBB) dysfunction and vasogenic brain edema. Structurally, tight junctions (TJs) between the endothelial cells play an important role in maintaining the integrity of the blood-brain barrier (BBB). IR injury is an early secondary injury leading to a non-specific, inflammatory response. Oxidative and metabolic stress following inflammation triggers secondary brain damage including BBB permeability and disruption of tight junction (TJ) integrity.
Our protocol presents an in vitro example of oxygen-glucose deprivation and reoxygenation (OGD-R) on rat brain endothelial cell TJ integrity and stress fiber formation. Currently, several experimental in vivo models are used to study the effects of IR injury; however they have several limitations, such as the technical challenges in performing surgeries, gene dependent molecular influences and difficulty in studying mechanistic relationships. However, in vitro models may aid in overcoming many of those limitations. The presented protocol can be used to study the various molecular mechanisms and mechanistic relationships to provide potential therapeutic strategies. However, the results of in vitro studies may differ from standard in vivo studies and should be interpreted with caution.

Oxygen-Glucose Deprivation and Reoxygenation as an In Vitro Ischemia-Reperfusion Injury Model for Studying Blood-Brain Barrier Dysfunction

Ischemia-Reperfusion (IR) injury is associated with a high rate of morbidity and mortality. The goal of the in vitro model of oxygen-glucose deprivation and reoxygenation (OGD-R) described here is to assess the effects of ischemia reperfusion injury on a variety of cells, particularly in blood-brain barrier (BBB) endothelial cells.

חמצן גלוקוז קיפוח וReoxygenation כ<em&gt; במבחנה</em&gt; איסכמיה reperfusion פציעת דגם לחוסר תפקוד מחסום דם-המוח לומד

Ischemia-Reperfusion (IR) injury is known to contribute significantly to the morbidity and mortality associated with ischemic strokes. Ischemic ...

An Anesthesia, Surgery, and Harvest Method for the Evaluation of Transpedicular Screws Using an In Vivo Porcine Lumbar Spine Model

Pedicle screw fixation is the gold standard for the treatment of spinal diseases. However, many studies have reported the issue of loosening pedicle screws after spinal surgery, which is a serious concern. To address this problem, diverse types of pedicle screws have been examined to identify those with good fixation strength and osseointegration in spine bone. The porcine spine is a good alternative for the human spine in the evaluation of pedicle screws due to the anatomical size, mechanical characteristics, and cost. Although several studies have reported that pedicle screws are efficient in the porcine model, no study has described detailed protocols for the evaluation of a pedicle screw using the porcine model. Here, we describe a detailed method for evaluating transpedicular screws using an in vivo porcine lumbar spine model. The technical details for anesthesia, spine surgery, and harvest provided here will facilitate with the evaluation of the transpedicular screw fixation model.

An Anesthesia, Surgery, and Harvest Method for the Evaluation of Transpedicular Screws Using an In Vivo Porcine Lumbar Spine Model

Here, we introduce a method to evaluate transpedicular screws by using an in vivo porcine lumbar spine model.

הרדמה, ניתוח, שיטת הקציר להערכת ברגים transpedicular באמצעות<em&gt; בויבו</em&gt; חור שדרה מותני

Pedicle screw fixation is the gold standard for the treatment of spinal diseases. However, many studies have reported the issue of loosening pedicle ...