שלוש שיטות מתוארות בפרוטוקול זה: איסוף אבקה קורביקולרית באמצעות מלכודות אבקה, מיון אבקה לפי צבע ואצטוליזה. שיטות אלה משמשות בדרך כלל במחקרים הקשורים למאביקים, כגון יעילות האבקה, דינמיקה של הזדקנות מאביקים, ואיכות וגיוון התזונה. לכידת אבקה היא דרך קלה לאסוף כמויות גדולות של אבקה ממושבות דבורי דבש.
מיון כדורי אבקה לפי צבע הוא שיטה משתלמת לסיווג אבקה הדורשת מומחיות נמוכה, ואצטוליזה מאפשרת לזהות את טקסון הצמח המשויך לכל צבע גלולה. מי שידגימו את הנוהל יהיו אלן טופיצהופר, עוזרת מחקר בפקולטה, ואמילי קרסון, עוזרת מחקר לתואר שני מהמעבדה שלי. כדי להתחיל, קבע מתי ללכוד אבקה ממיקום המכוורת הרצוי ובחר את מושבות דבורת הדבש האופטימליות ללכידת אבקה.
הערך את עוצמת המושבה על ידי ספירת פורגרים שחוזרים לכניסה למושבה למשך שתי דקות ולאחר מכן בחר מושבות עם המספר הכולל הגבוה ביותר של פורגרים חוזרים. בחר כוורות עם כלי עץ במצב טוב, רצוי ללא כניסות נוספות ומכסים מעוותים. השתמשו במושבות עם פחות כניסות חלופיות, שכן דבורים נודדות שחוזרות למושבות כאלה נוטות יותר להתמצא מחדש בכניסה למלכודת.
בחרו כניסות לכוורת הפונות דרומה במידת האפשר. אם הכוורות הן משטחים, התקינו מלכודות אבקה על כל מושבה הפונה לאותו כיוון על משטח נתון כדי למנוע סחיפה של כוורות לתוך כניסות כוורת שכנות. אם תרצה, הערך את קן הגזע של המושבה על ידי בדיקת מסגרות לנוכחות זחלים ומושבות נבחרות עם כמויות גדולות יחסית של זחלים.
לאחר מכן, התקינו מלכודות אבקה על מושבות דבורי הדבש שנבחרו. למלכודות להרכבה קדמית, חברו את המלכודת שלפני הכניסה באמצעות סיכות, ברגים וסרט הדבקה, או חברו את המלכודת לכבלי באנג'י העטופים סביב הכוורת. אטמו את כל הכניסות האפשריות האחרות למושבה בחומר שאינו דבק וניתן ליציקה, כגון לטקס או קצף פוליאוריתן או מטלית חומרה מספר שמונה עבור חורי אוגר.
השתמש בסרט דבק עבור סדקים קטנים. אם אתם משתמשים במלכודות קדמיות שנמצאות על כוורות בגובה פני הקרקע, הניחו מחסום כמו מחצלת גומי בין סל האיסוף לדשא כדי למנוע נזקי לחות מהטל. הפעילו את מנגנון הלכידה של מלכודת האבקה 24 שעות לאחר ההתקנה ולפני תחילת טיסת ההמלטה של היום.
אספו אבקה קורביקולרית מסוימת ממגש האיסוף והכניסו אותה לשקיות ניילון או צינורות צנטריפוגה, ואז אחסנו אותה בצידנית עם קרח. השתמשו בכף מדידה או בכף גדולה כדי להוציא 10 גרם אבקה כתת-מדגם מייצג. הסר את כל חלקי הדבורים והפסולת מתת-הדגימה, ולאחר מכן מיין כל כדור אבקה מתת-הדגימה במשקל 10 גרם לקבוצת צבעים באמצעות צבע האבקה והמרקם כדי להבדיל בין הקבוצות.
כדי להבטיח לפחות 0.25 גרם מכל קבוצת צבעים לצעדים במורד הזרם, מקם את כל הכדורים שאינם בשפע מספיק כדי ליצור קבוצת צבעים של לפחות 0.25 גרם לקבוצה שונה. תנו שם לכל קבוצת צבעים בנפרד בעזרת מדריך הצבעים Pantone. שקלו 0.25 גרם של כדורי אבקה מכל קבוצת צבעים.
אל תעשה את ה- PPE המתאים. לאחר מכן, הוסיפו באיטיות 500 מיקרוליטרים של חומצה חומצית קרחונית לכל צינור מיקרוצנטריפוגה המכיל 0.25 גרם אבקה מקבוצת הצבעים. תוך כדי בדיקה ויזואלית של הצינור, ערבבו את האבקה עם קיסם נקי למשך 10 עד 15 שניות.
צנטריפוגה של הדגימה במשך שלוש דקות ב 1, 100 פעמים G, ולאחר מכן deduced את supernatant לתוך פסולת חומצה. כדי להכין את תערובת אצטוליזה, להוסיף 10.8 מיליליטר של חומצה חומצית קרחונית לכוס שכותרתה תערובת אצטוליזה. לאחר מכן, לאט להוסיף 1, 200 microliters של חומצה גופרתית מרוכזת מתמיסת המניות.
לאט להוסיף 1, 000 microliters של תערובת אצטוליזה לכל צינור ומערבבים עם קיסם נקי במשך 10 עד 15 שניות. מניחים את הדגימות על בלוק חום שחומם מראש ל 80 מעלות צלזיוס. לדגור את הצינורות במשך חמש דקות, תוך ערבוב כל צינור ביסודיות עם קיסם נקי באמצע הדגירה.
לאחר הדגירה, הוסיפו באיטיות 500 מיקרוליטרים של חומצה אצטית קרחונית לכל צינור וערבבו עם קיסם נקי למשך 10 עד 15 שניות. צנטריפוגה של הדגימות, ולאחר מכן לרוקן את supernatant מכל צינור לתוך פסולת חומצה. יש לשטוף כל דגימה שלוש פעמים במים על ידי הוספת 1, 000 מיקרוליטר של מים מזוקקים לכל צינור וערבוב עם קיסם נקי.
צנטריפוגה את הדגימות ואת decant את supernatant מן הצינורות לתוך של סודיום ביקרבונט. לאחר מכן, חזור על שטיפת המים פעמיים נוספות. מוסיפים 1, 000 מיקרוליטר של 95% אתנול מכוס האתנול לכל צינור ומערבבים עם קיסם נקי.
לאחר מכן, צנטריפוגה של הדגימות ודקירה את הסופרנטנט מהצינורות לתוך פסולת האתנול. מערבבים את תמיסת הכתמים safranin-O ומוסיפים 5 עד 10 טיפות לכל שפופרת. מערבבים עם קיסם במשך 10 עד 15 שניות ומשאירים את הקיסם בשפופרת.
מוסיפים 1, 000 מיקרוליטר של 95% אתנול מכוס האתנול לכל צינור ומערבבים. לאחר צנטריפוגה של הדגימות, מכניסים את הסופרנטנט לכוס פסולת האתנול. יש להוסיף 10 עד 15 טיפות גליצרין לכל צינור ולערבב את התכולה למשך 10 עד 15 שניות.
השאירו את הצינורות פתוחים במכסה האדים כדי לאדות את האתנול למשך שעתיים לפחות בטמפרטורת החדר. שקופיות מיקרוסקופ תוויות לזיהוי אבקה. הסירו טיפה אחת של שאריות אבקה מהצינור והניחו אותה במרכז מגלשת המיקרוסקופ המסומנת שלה, כדי לאפשר לטיפה להתפשט מעט.
יש להניח כיסוי נקי על הטיפה שעל המגלשה ולאטום את הכיסוי להחלקה עם לק שקוף. באמצעות השיטות המתוארות נאסף אבקה קורביקולרית, מוינו לפי צבע, וזוהו המקורות הצמחיים של כל קבוצת צבעים של גלולות כדי להעריך את מגוון האבקה. לכל דגימת איסוף אבקה היו מספר קבוצות צבעים הניתנות להבחנה.
בחלק מהדגימות, קבוצות הצבעים של האבקה הכילו לא פחות מארבעה עד חמישה כדורים. עם זאת, לרוב הקבוצות היה הרבה יותר, והן שימשו כקבוצת צבע מסומנת משלהן לאצטוליזה. לאחר אצטוליזה, נעשה שימוש במיקרוסקופיית אור שדה בהיר כדי לזהות ביעילות כל קבוצת צבעים לדרגה הטקסונומית הנמוכה ביותר האפשרית שלה על ידי אישור המאפיינים המורפולוגיים עם אלה של דגימות שוברים שנאספו מהאזור המקיף כל אתר מחקר.
האבקה שנאספה ממקומות גידול שקדים הייתה בעלת מגוון אבקה נמוך יחסית לאבקה שנאספה מגידולים אחרים, עם ממוצע של שלושה צבעי גלולה ב-3.2 טקסות צמחים לכל אתר ניתן לבדוק אבקה ממוינת לחומרי הדברה כדי להבהיר את האגרוכימיקלים שנמצאים על צמחי מספוא של דבורת הדבש, או לנתח את ההרכב הכימי שלה כדי לקבוע את ערכה התזונתי לדבורי הדבש. התוצאות ממחקר זה סיפקו תובנות חשובות על מגוון המינים שנצפו באבקה שנאספה על ידי מושבות, והדגישו את המגוון הנמוך משמעותית של אבקה שנאספה במערכות גידול שקדים.
