מטרת הסרט היא להדגים את ההליך של הגישה החדשה שלנו לחולים עם תפקוד לקוי של השחלות. תפקוד השחלות יורד בהדרגה במהלך ההזדקנות וכמה מצבים פתופיזיולוגיים כולל חריגות קריוטיף, מחלות אוטואימוניות, טיפולי כימותרפיה והקרנות וניתוחי שחלות. רוב הנשים בגיל העמידה עם עתודה נמוכה השחלות הראו תגובה השחלות עניים גירוי השחלות להניב ביציות בוגרת.
יתר על כן, חולים צעירים עם מספר נמוך של זקיקי antral הראו גם תגובה השחלות עניים לגירוי השחלות. שימור פוריות חשוב כדי לשמור את OCS הפוטנציאלי להריון עתידי. לשימור פוריות, ההקפאה ביצית הוקמה.
עם זאת, אלה חולים תגובה השחלות המסכן יכול לאחזר מספר מוגבל מאוד של ביציות גם לאחר גירוי השחלות הנכון, המוביל את הדרישה של הליכים יקרים חוזרים ונשנים כדי להבטיח מספר מספיק של ביציות כדי להבטיח תינוק אחד. כדי לפתור בעיות אלה, פיתחנו לאחרונה את ההפעלה במבחנה, הליך IVA, המאפשר לנו לעורר את השלב המוקדם של זקיקי השחלות להתפתח לשלב זקיק טרום antral. הליך IVA המקורי יכול לקדם צמיחה ראשונית, ראשונית ומשנית זקיק על ידי פיצול קליפת המוח השחלות, המוביל שיבוש איתות היפופוטם.
לאחר מכן, יומיים של פולחן עם ממריץ איתות Akt. הליך זה מתאים לחולי POI עם מעט זקיקים שיורית. עם זאת, הליך זה הוא טיפול מוגזם עבור חולים שיש להם זקיקים משניים מרובים.
עבור חולים שיש להם כמה זקיקים משניים שיורית, הקמנו את השיטה שנקראת IVA ללא סמים וכבר בדקנו את האפשרות של קידום צמיחת זקיק משני על ידי רק לשבש את מסלול איתות היפופוטם. היו לנו גם כמה מקרים מוצלחים של משלוח על ידי IVA ללא סמים. כבר פרסמנו את ההליך הכירורגי של IVA ללא סמים ואת הפרוטוקול של גירוי השחלות הבאים.
בסרטון זה, אנו מציגים את הפרטים של שיטות מעבדה הנדרשות עבור IVA ללא סמים. גייסנו את המטופלים ל-IVA ללא סמים בהתבסס על הקריטריונים של בולוניה. לחולים יכולים להיות מספר זקיקים משניים.
בהתחלה, חלק מקליפת המוח הוסר מן השחלה אחת או שתיהן על ידי לפרוסקופיה. חולי POR הם אלה שהיו להם שחלות בגודל בינוני. ברוב החולים, הוצאנו רק חלק מהרקמות הקורטיקליות מהשחלות בצד אחד או בשני הצדדים.
רקמות קריטיות שחולצו הועברו מיד לצלחת תרבות המכילה מדיום תרבות עם חיץ HEPES, ונותחו את הרקמה הקטנה הזו לקוביות קטנות לשיבוש איתות היפופוטם. פרטי ההליך יוצגו בסרטון וידאו זה. מסלול איתות היפו הוא חיוני כדי לשמור על גודל איבר אופטימלי.
מסלול זה מורכב ממספר רגולטורים שליליים לצמיחה. לאחר איתות היפופוטם הוא שיבש, רמות זרחן של YAP, אחד הרגולטורים צמיחה שלילית הפועלים מפל קינאז, הוא ירד ורמות הגרעין של YAP הוא גדל. YAP פועל בתיאום עם גורמי שעתוק TEAD כדי להגדיל את גורם הגדילה של CCN במורד הזרם.
מצד שני, פילמור actin של משחק כדורי, G-actin, לצורה הסיבית, F-actin, חשוב עבור תחזוקת צורת התא ותנועה. דיווח בעבר אינדוקציה של היווצרות F-actin משבש היפופוטם איתות וגורם overgrowth בתאי HeLa אנושיים. דיווחנו בעבר פיצול השחלות להגדיל את היווצרות F-actin, וזה מוביל לירידה של רמת זרחון של YAP.
זה מוביל לביטוי מוגבר של גורם גדילה CCN. לאחר החיתוך, קוביות אלה מושתלות בשחלה הנותרת. הליך זה יכול לקדם את הצמיחה זקיק משני שיורית ולהוביל למספר מוגבר של ביצית התבגר.
IVA ללא סמים מורכב מארבעה שלבים. כבר פרסמנו את ההליך הכירורגי עבור IVA ללא סמים. אנא עיין בספרות זו עבור מיצוי קליפת המוח השחלות השתלה אוטומטית.
כאן אנו מראים את נהלי הפרטים של שיטות מעבדה הנדרשות עבור IVA ללא סמים. בשלב הראשון, אנו מראים כיצד מתבצע פיצול קליפת המוח השחלתית. בשלב השני, אנו מראים כיצד לטעון את קוביות קליפת המוח השחלות לתוך המכשיר להשתלה, כאן, אני אראה פיצול קליפת המוח השחלות.
מחקר זה אושר על ידי הוועדה האתית של המכון שלנו, וכל ההליכים בוצעו בהתאם לקוד האתיקה של ההסתדרות הרפואית העולמית. פיצול קליפת המוח השחלות. הכלים הבאים הנדרשים לשלב זה:מנה, גזה סטרילית, מספריים עדינות, מלקחיים עדינים ואזמל.
אנחנו בדרך כלל משתמשים בסוג זה של צלחת גזה סטרילית אבל מוצרים אחרים כמו צלחת פטרי פלסטיק, צלחת זכוכית, וכולי, עשוי גם להיות מתאים להליך זה, וכל סוג של גזה סטרילית הוא גם מתאים. עם זאת אנו ממליצים בחום על השימוש בצורה זו של מלקחיים ואזמל. בנוסף, השתמש בצלחת החמה לשמירה על הטמפרטורה של הכלים המכילים רקמות מקום מתחת לווילון סטרילי.
רקמות קליפת המוח מועברות מיד לתוך המנה המכילה mHTF. צלם תמונה עם שם המטופל כדי לתאם את נתוני המטופל. רשום את הגודל, העובי והמצב של הרקמה.
הסר רקמת מדולה שיורית. לפני פיצול הרקמות, הסר את רקמת המדולה. שים את קליפת המוח על הגזה הסטרילית.
כפי שמוצג בסרטון, הגזה לחה עם מדיום. במהלך הליך זה, יש למרוח מדיום עם פיפטה חד פעמית לפני שפני השטח של קליפת המוח מתייבשים. הסר שאריות רקמות עם מספריים מיקרו עד עובי מגיע אחד עד שני מילימטרים.
בחולי POR, זקיקים משניים ממוקמים עמוק יותר ממילימטר אחד מפני השטח של קליפת המוח, ולכן אינם הופכים את הרקמות לפחות ממילימטר בעובי. חותכים צד אחד של קליפת המוח של כל רקמה לרצועה מדידה אחד אחד על ידי חמישה מילימטר לניתוח היסטולוגי כדי לקבוע את נוכחותם של זקיקים שיורית. שים את הרצועה הזאת לתוך צינור 1.5 מיליליטר עם מדיום תרבות ולשמור על ארבע מעלות צלזיוס עד תיקון.
הכנת קוביות קליפת המוח השחלות. לאחר הסרת רקמת medulla, קליפת המוח השחלות מקוטע עבור היפופוטם איתות הפרעה. בהתחלה, לחתוך את קליפת המוח לתוך אחד אחד על ידי 10 רצועות מילימטר באמצעות אזמל.
ואז לחתוך רצועות אלה לקוביות קטנות קוביות מילימטר אחד. במדיום, הרקמה חלקלקה וקשה לחתוך. לחיתוך קל, חותכים את הרצועות על ידי לחיצה על האזמל ולא על ידי משיכתו.
לאחר החיתוך, לספור את מספר הקוביות ולהכין את השתלה אוטומטית. כדי למנוע את השינויים של לחץ אוסמוטי במדיום, להוסיף את המדיום במתינות לפני השתלה אוטומטית של הרקמה. עבור השתלה אוטומטית בשחלות, השימוש במכשיר בצורת קנולה מאפשר טעינה קלה יותר.
שלב זה מכיל שני שלבים. בעבר, שברי השחלות הושתלו בזה אחר זה באמצעות מלקחיים תחת לפרוסקופיה. עם זאת, זה לקח בערך שלוש עד ארבע שעות כדי להשלים את הניתוח.
בהליך זה, אנו משתמשים במכשיר בצורת צינורית העשוי ממזרק פנימי וצילינדר חיצוני. זוהי צורה פשוטה וקלת משקל. בנוסף, קצה התקן זה הוא בעל צורה עגולה.
אין נקודות חדות שנמנעות מפגיעה באתר ההשתלה. שימוש בסוג זה של מכשיר מאפשר להביא עד 20 עד 30 קוביות לאתר ההשתלה בבת אחת. זה מוביל להשתלה יעילה והפחתה בזמן הניתוח.
טוען שברי קליפת המוח השחלות. הכנת קנולה IVA. הכן את הצינורית IVA ולשטוף את המכשיר הזה mHTF.
חזור על שאיפה ופריקה בינונית מספר פעמים. מלא את קצה הקנוולר על ידי שאיפה של כ -100 מיקרוליטרים של המדיום. זאת כדי למנוע מהקוביות לצייר במהלך טעינת שברי רקמות.
טוען קוביות קליפת המוח. בחר קוביה על ידי מלקחיים עדינים ולשים אותו בקצה של cannular. מספר הקוביות המושתלות תלוי בגודל אתר ההשתלה.
חזור על טעינת הקוביות בזו אחר זו עד שתגיע למספר היעד. לאחר טעינת הקוביות, מעבירים את הצינורית למנתח בזהירות. אם אתר ההשתלה אינו מוכן, החלק של הקנולר המכיל קוביות השחלות הוא להיות מוחזק על ידי האצבעות, כדי למנוע ירידה בטמפרטורה של קוביות.
כבר דיווחנו על התוצאות הקליניות של IVA ללא תרופות. עיין במאמר שפורסם על תוצאות קליניות. פרוטוקול מעבדה זה נדרש 30 עד 50 דקות עבור חולה אחד.
הזמן הממוצע הוא במשך 10 עד 20 דקות עבור פיצול קליפת המוח השחלות, ו 20 עד 30 דקות עבור טעינת שברים אלה קנולה IVA. זה תלוי בגודל הרקמה, אבל כמעט כל החולים יכולים להיות גמורים בזמן ממוצע זה. מסקנות. IVA ללא סמים היא גישה חדשה של טיפול פוריות לחולי POR עם רזרבת השחלות פוחתת.
פרוטוקול מעבדה זה מוביל להפחתת הזמן הנדרש לניתוח ולאובדן שברים במהלך ההשתלה. טכניקת המעבדה של IVA ללא סמים יכול להיות הבסיס של יישום עתידי של תרבות רקמת השחלות כדי להשיג ביציות בוגרת ללא השתלה.
