יצירת כימרות במוח הקדמי של העופות להערכת התפתחות הפנים

שיטה זו מאפשרת לחוקרים להעריך אינטראקציות רקמות בין המוח הקדמי הבסיסי לבין הפנים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מבודדת את המוח הקדמי הבסיסי להערכה ומונעת זיהום עם תאי פסגה עצבית, אשר יבלבל את הניתוח. החלק הקשה בטכניקה זו הוא הסרת המוח הקדמי מהפונדקאי והחלפתו ברקמת התורם.

מי שתדגים את ההליך תהיה דיאן הו, מדענית מחקר ממעבדתו של ד"ר ראלף מרקוצ'יו. כדי להתחיל, להכין מדיה DMEM עם אדום ניטרלי, פיפטה העברת זכוכית, טונגסטן מושחז. בעזרת מזרק 10 מיליליטר ומחט 18 מד, מוציאים 0.5 מיליליטר אלבומין מהקצה המחודד של קליפת הביצה.

צור חור קטן על גבי הקליפה באמצעות נקודת מספריים. לאחר מכן מניחים חתיכת סרט מעל החור וחותכים פתח עגול כדי לחשוף את העובר. מכתימים את העובר באדום נייטרלי.

קצור שתלי רקמה מהצד השמאלי של המוח הקדמי הבסיסי של שלב שבע או שמונה עוברים. השתמש מחטי טונגסטן מחודדות מעוקלות כדי לחתוך בעדינות חתיכה של המוח הקדמי. כדי לא לכלול את האנדודרם הבסיסי, החליקו את המחט מתחת למוח הקדמי ובמקביל לציר הצינור העצבי.

הרימו את השתל מהעובר התורם באמצעות פיפטת העברת הזכוכית, והעבירו אותו ל- DMEM המכיל אדום נייטרלי למשך שתי דקות כדי להכתים אותו. לאחר מכן הניחו את השתל המוכתם ב-DMEM שאינו מכיל אדום נייטרלי עד שהוא מוכן לקליטה. דוגרים על ביצים מופרות מתרנגולת לגהורן לבנה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס בתא לח עד לשלב המבורגר-המילטון בשלב שבע עד שמונה.

לחשוף עוברים כפי שהודגם בעבר. באמצעות מחטי טונגסטן מושחזות, הכינו את אתר השתל על ידי חיתוך ולאחר מכן הסרה של חתיכה בגודל 0.3 על 0.2 מילימטר של המוח הקדמי הבסיסי כדי להתאים לשתל. הימנע הפרעה מוגזמת של האנדודרם הבסיסי, אשר יהיה ניכר כמו גרגרי חלמון יתחילו לדלוף דרך כל קרע שנוצר.

לאחר העברת השתל לפונדקאי, מקם את השתל כך שיחליף את המוח הקדמי הבזאלי של המארח. מניחים נייר דבק בחוזקה מעל החור, ומחזירים את העוברים לאינקובטור של 37 מעלות צלזיוס עד שהם מוכנים לניתוח. בתחילה, כימרות נוצרו על ידי השתלת רקמות שליו לעוברי אפרוחים.

באמצעות נוגדן QCPN, תאי שליו הודגמו ונבדלו מהרקמות המארחות. מערכת אפרוח השליו אישרה כי כל השתל מורכב רק מרקמה עצבית ולא היה מזוהם עם סוגי תאים אחרים. השתלת רקמת שליו בעוברי ברווזים הובילה לעיוות חמור של כימרות עקב מוח שליו המתפתח מהר יותר.

לכן, בוצעה השתלת רקמות ברווז בעוברי תרנגולות. הכימרות המתקבלות כתוצאה מכך מצביעות על כך שהמוח משתתף בוויסות המורפולוגיה. הכלאה של הר שלם C2 שימשה להערכת ביטוי קיפוד סוניק בכימרות.

בדומה למורפולוגיה, ביטוי הקיפוד הסוניק בצד הברווז של הכימרה נראה דומה יותר לברווז. הכנת האתר המארח דורשת תרגול. מספר גדול של עוברים אינם שורדים, ולכן יצירת מספר גדול של כימרות יכולה לעזור להבטיח דגימות נאותות לניתוח.

שיטה זו אפשרה להעריך כיצד אותות מהמוח מעצבים את תחום הביטוי של קיפוד סוניק באזור האקטודרמלי הקדמי.