פרוטוקול זה מאפשר למשתמש למדוד באופן כמותי סמנים אנלוגיים קליניים של נזק בהדמיית רשתית עכברים, מה שמחזק את יכולת התרגום של הממצאים הבאים. שיטות אלה מאפשרות לנו לייעל את הניתוח ולתת לנו את היכולת להשוות באופן מהימן הדמיה בין חיות ניסוי. בעוד ששיטות אלה פותחו כדי לחקור סקירה כללית של מודל עכברים, הן יכולות בקלות להתרחב למחקר על כל מחלות רשתית המשתמשות באותן טכניקות הדמיה.
הפעל את תיבת האור של מיקרוסקופ הדמיית הרשתית, את מכונת טומוגרפיה קוהרנטית אופטית ואת פלטפורמת העכבר המחומם. הפעל את המחשב ופתח את תוכנית ההדמיה. הוסיפו טיפה אחת של פנילפרין וטרופיקמיד לכל עין.
להזריק 100 מיקרוליטר של 1% פלואורסצין intraperitoneal. התאימו את העכבר לרציף. התאימו את הגובה והזווית של הפלטפורמה עד שהתצוגה של פונדוס הרשתית תהיה ברורה וממוקדת.
צלם תמונה של הפונדוס. פתח את תוכנת טומוגרפיה הדמיה וקוהרנטיות אופטית. בתוכנית טומוגרפיה קוהרנטית אופטית להתאים נדנוד ל 10.
צלם תמונת טומוגרפיה קוהרנטית אופטית, הוסף 75 מיקרומטר דיסטלי מהכוויה. חזור על הפעולה עבור שלושת הרבעים האחרים של הרשתית. העבר את המצלמה למסנן של 488 ננומטר.
הגדל את רווח המצלמה ל-5. צלם תמונה של הפונדוס בדיוק 5 דקות לאחר הזרקת פלואורסצין. פתח את תמונת הפלואורסצ'יין בתוכנת עיבוד התמונה.
שכפל את התמונה. באמצעות כלי בחירה, לעקוב בקפידה אחר הכלים העיקריים. התעלמו מכל כלי שיט המסתעפים מכלי שיט אלה.
בתמונה הראשונה, מחק את הבחירה, והשאיר רק את כלי השיט. שמור תמונה מוסווית זו. הזיזו את הבחירה לתמונה השנייה, הפכו את הבחירה ומחקו, תוך בידוד הרקע.
שמור תמונה מוסווית זו. פתח את תמונת הרקע ומדוד את הצפיפות המשולבת. פתח את תמונת כלי השיט, בחר את קווי המתאר של הכלים ולאחר מכן מדוד את העוצמה הממוצעת.
חלקו את הצפיפות המשולבת של הרקע בעוצמה הממוצעת של כלי הדם, ויצרו את יחס הדליפה לעין. רשום את יחס הדליפה הזה עבור כל עין בקבוצת ניסוי. כדי להגביר את השליטה על הרקע, נרמלו את העיניים הניסיוניות ליחס הדליפה הממוצע של עיני בקרה לא פגועות.
פתח את תמונת טומוגרפיה קוהרנטית אופטית בתוכנת עיבוד התמונה. עקוב אחר הגבולות של שכבת תאי הגנגליון, שכבת הפרספקס הפנימית, השכבה הגרעינית הפנימית, שכבת הפלקסיפורם החיצונית, שכבת הפוטורצפטור ושכבת RPE. ייצא את הקבצים כ- CSV.
יש למדוד את העובי הממוצע של כל שכבה ולחזור על הפעולה עבור כל עין בקבוצת הניסוי. פתח את תמונת טומוגרפיה קוהרנטית אופטית בתמונה J.באמצעות כלי הקו, מדוד את המרחק שבו הגבול העליון של שכבת הפרספקס החיצונית אינו ברור. מדוד אופקית, תוך שמירה על קו הרוחב שבו מתחיל חוסר הארגון.
חשב את סכום המרחקים הלא מאורגנים בתמונה. חלק את אורך חוסר הארגון באורך הכולל של הרשתית כדי לקבל את היחס של חוסר ארגון. חזור על המדידה והחישוב עבור תמונות טומוגרפיה קוהרנטית אופטית משלושת הרבעים האחרים של הרשתית.
קח את הממוצע של יחסי חוסר הארגון מארבע תמונות טומוגרפיה קוהרנטית אופטית. מספר זה מייצג את חוסר הארגון הממוצע עבור הרשתית כולה. יש לחזור על הפעולה עבור כל עין בקבוצת הניסוי.
ניתן להשוות את תמונות המסכות המשמשות לחישוב יחס הדליפה עבור כל תמונת רשתית לאחרות ולנתח אותן, תוך הפרדת כלי הדם העיקריים מאזורים אחרים ברשתית. כימות פלואורסצין מאפשר השוואה בין חומרת הפציעה ויעילות הטיפול, כמו גם חקר השינויים בדליפה במהלך זמן הפציעה. נצפה תיחום של שכבות הרשתית בתמונת OCT.
כימות העובי של כל שכבת רשתית מראה שלתגובה הראשונית של הרשתית יש השפעה עמוקה יותר על שכבות הרשתית הפנימיות. מניתוח של מהלך זמן של נזק לחסימת ורידים ברשתית, ניתן לראות את הנפיחות הדלקתית הראשונית של שכבות הרשתית, ואת ההידלדלות הניוונית בסופו של דבר. השכבה הגרעינית הפנימית חווה תגובה הרבה יותר גדולה לפגיעה הראשונית, אך שכבת הפרספקס הפנימית מדגימה הידלדלות חמורה יותר לאחר שהבצקת הראשונית התייצבה וחזרה לנקודת ההתחלה.
חוסר הארגון של שכבת הרשתית הפנימית מתבטא בהיעלמות הגבול העליון של שכבת הפלקסיפום החיצונית, תוך מיזוג השכבות החיצוניות והגרעיניות הפנימיות יחד. חוסר הארגון ברשתית של שתי קבוצות ניסוי הושווה כדי לחקור את היעילות של מעכב בהפחתת נזק לרשתית. איכות התמונה חשובה ביותר לאיכות הניתוח.
בעת רכישת תמונות רשתית, קח את הזמן כדי להבטיח ששכבות הפונדוס והרשתית יהיו ברורות וממוקדות ככל האפשר. ניתן להשתמש בשיטות לא פולשניות אלה לאורך ובשילוב עם מחקר ביוכימי ואימונוהיסטוכימי של רקמות כדי ליצור פרופילים רבגוניים ומפורטים יותר של מחלות. טכניקה זו מאפשרת כימות אמין של נתוני הדמיית רשתית in Vivo במודלים של מחלות נוירו-וסקולריות, כך שניתן יהיה לתרגם את הנתונים ביתר קלות למחלות אנושיות.
