In vivo Letture di lesioni vascolari nella retina del topo per promuovere la riproducibilità

Riepilogo

Qui, presentiamo tre protocolli di analisi dei dati per l'angiografia fluoresceina (FA) e le immagini di tomografia a coerenza ottica (OCT) nello studio dell'occlusione venosa retinica (RVO).

Abstract

I progressi negli strumenti di imaging oftalmico offrono un livello senza precedenti di accesso ai ricercatori che lavorano con modelli animali di lesioni neurovascolari. Per sfruttare correttamente questa maggiore traducibilità, è necessario escogitare metodi riproducibili per estrarre dati quantitativi da queste immagini. La tomografia a coerenza ottica (OCT) può risolvere l'istologia retinica con risoluzione micrometrica e rivelare differenze funzionali nel flusso sanguigno vascolare. Qui, delineiamo letture vascolari non invasive che utilizziamo per caratterizzare il danno patologico post insulto vascolare in un modello murino ottimizzato di occlusione venosa retinica (RVO). Queste letture includono l'analisi di imaging dal vivo della morfologia retinica, la disorganizzazione degli strati interni della retina (DRIL) misura dell'ischemia capillare e misure di fluorangiografia dell'edema retinico e della densità vascolare. Queste tecniche corrispondono direttamente a quelle utilizzate per esaminare i pazienti con malattia retinica nella clinica. La standardizzazione di questi metodi consente il confronto diretto e riproducibile di modelli animali con fenotipi clinici di malattia oftalmica, aumentando il potere traslazionale dei modelli di danno vascolare.

Introduzione

La malattia neurovascolare è un grave problema sanitario responsabile dell'ictus ischemico, una delle principali cause di mortalità e morbilità, e delle malattie vascolari retiniche che portano alla perdita della vista ^1,2. Per modellare la malattia neurovascolare, utilizziamo un modello murino di occlusione venosa retinica (RVO). Questo modello non è invasivo e utilizza tecniche di imaging in vivo simili a quelle utilizzate per esaminare le persone con malattia vascolare retinica in un contesto clinico. L'uso di questo modello aumenta quindi il potenziale traslazionale degli studi che utilizzano ques....

Protocollo

Questo protocollo segue la dichiarazione dell'Associazione per la ricerca in visione e oftalmologia (ARVO) per l'uso di animali nella ricerca oftalmica e visiva. Gli esperimenti sui roditori sono stati approvati e monitorati dall'Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) della Columbia University.

NOTA: L'imaging è stato eseguito su topi maschi C57BL / 6J di 2 mesi che pesavano circa 23 g.

1. Preparazione di reagenti per l'imaging retinico

1. Preparazione di soluzione iniettabile di fluoresceina.
   NOTA: La fluoresceina è molto sensibile alla luce. Proteggere dalla luce e utiliz....

Risultati

Questi metodi di analisi consentono la quantificazione della patologia retinica catturata dall'imaging FA e OCT. Gli esperimenti da cui vengono estratti i dati rappresentativi hanno utilizzato topi maschi C57BL / 6J che sono serviti come controlli illesi o sono stati sottoposti alla procedura RVO e hanno ricevuto colliri di trattamento Pen1-XBir3 o colliri di veicoli Pen1-Saline. Il modello di lesione RVO ha coinvolto l'irradiazione laser (532 nm) delle vene principali in ciascun occhio di un topo anestetizzato a seguito.......

Discussione

L'imaging retinico non invasivo dei roditori rappresenta una strada per studiare la patologia e sviluppare interventi. Studi precedenti hanno sviluppato e ottimizzato un modello murino di RVO, limitando la variabilità e consentendo una traduzione affidabile delle patologie cliniche comuni nella retina murina ^5,7,13. Gli sviluppi nella tecnologia di imaging oftalmico consentono inoltre l'uso di tecniche di imaging clinico in.......

Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
AK-Fluor 10%	Akorn	NDC: 17478-253-10	light-sensitive
Carprofen	Rimadyl	NADA #141-199	keep at 4 °C
GenTeal	Alcon	00658 06401
Image J	NIH
InSight 2D	Phoenix Technology Group		OCT analysis software
Ketamine Hydrochloride	Henry Schein	NDC: 11695-0702-1
Phenylephrine	Akorn	NDCL174478-201-15
Phoenix Micron IV	Phoenix Technology Group		Retinal imaging microscope
Phoenix Micron Meridian Module	Phoenix Technology Group		Laser photocoagulator software
Phoenix Micron Optical Coherence Tomography Module	Phoenix Technology Group		OCT imaging software
Phoenix Micron StreamPix Module	Phoenix Technology Group		Fundus imaging and acquisition targeting
Photoshop	Adobe
Refresh	Allergan	94170
Tropicamide	Akorn	NDC: 174478-102-12
Xylazine	Akorn	NDCL 59399-110-20