Monitoraggio della glicemia nella prole di topo dopo l'iniezione intracitoplasmatica di spermatozoi

Riepilogo

Qui, presentiamo un protocollo per stabilire un modello murino di iniezione intracitoplasmatica di spermatozoi (ICSI)-trasferimento di embrioni (ET), che ci consente di osservare i cambiamenti legati all'età nel metabolismo del glucosio che possono essere attribuiti all'ICSI, fornendo informazioni sui suoi potenziali impatti a lungo termine sullo sviluppo umano.

Abstract

La durata della vita umana è considerevolmente lunga, mentre i modelli murini possono simulare l'intera durata della vita umana in un periodo relativamente breve, con un anno di vita del topo equivalente all'incirca a 40 anni umani. L'iniezione intracitoplasmatica di spermatozoi (ICSI) è una tecnologia di riproduzione assistita comunemente utilizzata nella pratica clinica. Tuttavia, data la sua comparsa relativamente recente circa 30 anni fa, gli effetti a lungo termine di questa tecnica sullo sviluppo umano rimangono poco chiari. In questo studio, abbiamo stabilito il metodo ICSI combinato con il trasferimento di embrioni (ET) utilizzando un modello murino. I risultati hanno dimostrato che gli spermatozoi di topo normali, dopo essere stati sottoposti a coltura in vitro e successiva ICSI, hanno mostrato un tasso di fecondazione dell'89,57% e un tasso di due cellule dell'87,38%. Dopo l'ET, il tasso di natalità della prole era di circa il 42,50%. Inoltre, con l'avanzare dell'età dei topi, sono state osservate fluttuazioni nei livelli di metabolismo del glucosio, che possono essere associate all'applicazione della tecnica ICSI. Questi risultati indicano che la tecnica ICSI-ET del topo fornisce una piattaforma preziosa per valutare l'impatto delle anomalie spermatiche sullo sviluppo embrionale e i loro effetti a lungo termine sulla salute della prole, in particolare per quanto riguarda il metabolismo del glucosio. Questo studio fornisce importanti spunti per ulteriori ricerche sui potenziali effetti della tecnica ICSI sullo sviluppo umano, sottolineando la necessità di un'indagine approfondita sulle implicazioni a lungo termine di questa tecnologia.

Introduzione

I problemi di fertilità sono emersi come uno dei principali punti di interesse medico e sociologico, soprattutto nella società moderna, dove il calo dei tassi di fertilità e la crescente gravità della prevalenza e della gravità dell'infertilità sono saliti alla ribalta. La tecnologia di riproduzione assistita (ART) offre un'ampia gamma di possibilità per affrontare queste sfide, con l'iniezione intracitoplasmatica di spermatozoi (ICSI) comunemente utilizzata come intervento terapeutico.

Da quando Palermo ha riportato la prima gravidanza riuscita ottenuta attraverso l'iniezione intracit....

Protocollo

Il protocollo dell'ICSI-ET descritto di seguito segue le linee guida ed è stato approvato dall'Animal Ethical Review dello Shanghai Institute of Planned Parenthood research. Procedure di sicurezza: Indossare sempre dispositivi di protezione individuale (DPI) adeguati quando si maneggiano prodotti chimici o materiali biologici. Uso delle cappe: Eseguire tutte le procedure che coinvolgono sostanze chimiche volatili o la generazione di aerosol all'interno di una cappa aspirante certificata o di una cappa di biosicurezza. Utilizzare topi femmina (ceppo B6D2F1 di 6-8 settimane) per la procedura di superovulazione.

Discussione

Questo studio ha integrato tecniche di iniezione intracitoplasmatica di spermatozoi di topo (ICSI) e trasferimento di embrioni (ET) per ricapitolare in modo completo la tecnologia di riproduzione assistita umana (ART) ed esaminare l'impatto dell'ICSI in combinazione con l'ET sullo sviluppo della prole. L'applicazione della tecnica ICSI con spermatozoi di topo normali ha prodotto un'elevata fecondazione (86,76%) e tassi di 2 cellule (88,48%). Dopo l'ET, il tasso di natalità dei topi prol.......

Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
1.25% avertin (2,2,2-tribromoethanol)	Nanjing Aibei	M2960	for anesthetization
Bacteriological Petri Dishes 35 x 10 mm style w/tight lid, crystal-grade virgin polystyrene, sterile	BD	353001
Bacteriological Petri Dishes 50 x 9 mm style w/tight lid, crystal-grade virgin polystyrene, sterile	BD	351006
Biosafety Cabinet	ESCO	class BSC	Aseptic operations, making culture dishes, aliquoting reagents, etc.
CO2 Incubator	Thermo	8000DH	Embryo culture
Dissection Microscope	Olympus	SZX16	Use in mouse embryo transfer
Fluorinert Fc-770	SIGMA	F3556	Fluorinert FC-770 is a thermally stable fully fluorinated liquid with high dielectric strength and resistivity, used as operating fluid
handheld glucometer	Roche	AccuChek performa	Blood glucose measurement
HTF	Merck	MR-070-D	The EmbryoMax Human Tubal Fluid (HTF) (1x), liquid designed for use with Mouse IVF is available in a 50 mL format and has been optimized and validated for Embryo Culture.
Hydraulic Microinjector	Eppendorf	CellTram 4r Oil, 5196000030	For sperm injection
Inverted Microscope	Nikon	TI2-U	Micromanipulation observation host
KSOM	Merck	MR-020P-D	(1x), Powder, w/o Phenol Red, 5 x 10 mL
M2	Merck	MR-015-D	EmbryoMax M2 Medium (1x), Liquid, with Phenol Red
Micromanipulator	NARISHIGE	NTX-N4	Micromanipulation arm
mineral oil	SIGMA	M8410	Mineral oil is suitable for use as a cover layer to control evaporation and cross-contamination in various molecular biology applications.
Needle Cutter	Nanjing Aibei	Sutter MF-800	Use for fabricating micromanipulation needles
Needle Puller	Nanjing Aibei	Sutter model p-100	Use for making micromanipulation needles
Piezo Drill Trip Mouce ICSI	Eppendorf	5195000.087	Application of ICSI injection needle.
Piezoelectric Micromanipulator (Membrane Breaker)	Eppendorf	Eppendorf PiezoXpert	Use of micro-pulses to break the zona pellucida and oolemma of the oocyte
Pneumatic Microinjector	Eppendorf	CellTram 4r Air, 5196000013	For fixing the oocyte
Ready-to-use Human Chorionic Gonadotropin (Hcg)	Nanjing Aibei	M2520	Sterilization reagent, intraperitoneal injection. 50 IU/mL
Ready-to-use Pregnant Mare's Serum Gonadotropin (PMSG)	Nanjing Aibei	M2620	Sterilization reagent, intraperitoneal injection. 50 IU/mL
Stereomicroscope	Olympus	SZX7	Oocyte retrieval and observation of embryo development