Istituzione di un modello di impianto embrionale in vitro

Riepilogo

Questo protocollo descrive le metodologie per stabilire un modello di impianto embrionale in vitro semplice ed efficiente per valutare le molecole rilevanti che influenzano il processo di impianto dell'embrione.

Abstract

L'impianto dell'embrione è il primo passo per l'instaurazione di una gravidanza di successo. Un modello in vitro per l'impianto dell'embrione è fondamentale per la ricerca biologica di base, lo sviluppo di farmaci e lo screening. Questo articolo presenta un modello in vitro semplice, rapido e altamente efficiente per l'impianto dell'embrione. In questo protocollo, introduciamo prima l'acquisizione di blastocisti di topo e la preparazione di cellule di adenocarcinoma endometriale umano (Ishikawa) per l'impianto, seguita dal metodo di co-coltura per embrioni di topo e cellule di Ishikawa. Infine, abbiamo condotto uno studio per valutare l'impatto di concentrazioni variabili di 17-β-estradiolo (E₂) e progesterone (P4) sui tassi di adesione degli embrioni sulla base di questo modello. I nostri risultati hanno rivelato che alte concentrazioni di E₂ riducono significativamente l'adesione dell'embrione, mentre l'aggiunta di progesterone potrebbe ripristinare il tasso di adesione. Questo modello offre una piattaforma semplice e veloce per la valutazione e lo screening delle molecole coinvolte nel processo di adesione, come citochine, farmaci e fattori di trascrizione che controllano l'impianto e la ricettività endometriale.

Introduzione

L'impianto dell'embrione, la fase iniziale di una gravidanza di successo, è fondamentale per comprenderne le basi biologiche e affrontare le sfide dell'infertilità. Tuttavia, i vincoli etici pongono limiti significativi nella raccolta di campioni di embrioni clinici umani, ostacolando la ricerca sulle intricate interazioni tra embrioni umani ed endometrio durante l'inizio della gravidanza^. Una profonda comprensione di questi complessi meccanismi è vitale per far progredire la ricerca biologica fondamentale, la scoperta di farmaci e la salute riproduttiva.

I precedenti modelli in vitro utilizzavano modelli di adesione....

Protocollo

La manipolazione dei topi e gli studi sperimentali sono stati eseguiti secondo i protocolli approvati dal Comitato per gli animali dell'Istituto di Shanghai per le tecnologie biomediche e farmaceutiche. Garantire le procedure di sicurezza: Indossare sempre dispositivi di protezione individuale (DPI) adeguati quando si maneggiano prodotti chimici o materiali biologici.

1. Acquisizione di embrioni di topo

NOTA: Questa sezione descrive il processo per ottenere embrioni di topo. Topi femmina adulta (6-8 settimane di età, ibridi C57BL/6 e DBA/2) sono stati mantenuti in condizioni ambientali standard di ....

Discussione

La semplicità e la rapidità del modello in vitro proposto per l'impianto dell'embrione offrono notevoli vantaggi per lo screening farmacologico in fase iniziale e altre applicazioni di ricerca. Il protocollo semplice, unito alla natura ad alto rendimento delle linee cellulari Ishikawa, lo rende un candidato ideale per screening su larga scala, in particolare nelle prime fasi della scoperta di farmaci. Liang¹³ ha scoperto che il knockdown di TAGLN2 diminuisce la capacità di invasione de.......

Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
17-β-estradiol	SIGMA	3301	Most potent mammalian estrogenic hormone
BD Falcon	BD	353001	Bacteriological Petri Dishes 35 x 10 mm style w/tight lid, crystal-grade virgin polystyrene, sterile
Biosafety Cabinet	ESCO	class BSC	Aseptic operations, making culture dishes, aliquoting reagents, etc
CO2 Incubator	Thermo	8000DH	Embryo culture
Culture plate	Corning	3506	Cell culture
DMEM/F12	Gibco	1133032	DMEM/F12 (1x), liquid 1:1,Contains L-glutamine and 15 mM HEPES buffer
Fetal Bovine Serum	Gibco	10099141	Fetal Bovine Serum, Qualified, Australia Origin
Gelatin	SIGMA	G9391	Type B, powder, BioReagent, suitable for cell culture
HCG	Nanjing Aibei	M2520	Sterilization reagent, intraperitoneal injection, 50 IU/mL
Hyaluronidase	SIGMA	V900833	Reagent grade, powder
KSOM	Merck	MR-020P-D	(1x), Powder, w/o Phenol Red, 5 x 10 mL
L-glutamine	Gibco	25030081	L-glutamine-200 mM (100x), liquid
M2	Merck	MR-015-D	EmbryoMax M2 Medium (1x), Liquid, with Phenol Red
Mineral oil	SIGMA	M8410	Mineral oil is suitable for use as a cover layer to control evaporation and cross-contamination in various molecular biology applications
Penicillin-Streptomycin, liquid	Gibco	15140122	10,000 Units penicillin (base) and 10,000 units streptomycin (base), utilizing penicillin G (sodium salt) and streptomycin sulfate in 0.85% saline
PMSG	Nanjing Aibei	M2620	Sterilization reagent ,intraperitoneal injection, 50 IU/mL
Progesterone	SIGMA	5341	Steroid hormone secreted by the corpus luteum during the latter half of the menstrual cycle
Sodium pyruvate	Gibco	11360070	Sodium pyruvate is commonly added to cell culture media as a carbon source in addition to glucose
Stereomicroscope	Olympus	SZX7	Embryo retrieval and observation of embryo development