Per iniziare, parassita circa 40 pupe Lucilia sericata su vespe Nasonia adulte emergenti maschi e femmine accoppiate per 1,5 giorni. Entro 12-24 ore dopo la parassitizzazione, aprire con attenzione un'estremità del guscio della pupa usando un ago da dissezione sterile. Tenere l'altra estremità del guscio e individuare l'embrione di vespa.
Quindi trasferire l'embrione su un filtro cellulare sterile inumidito con PBS. Una volta trasferiti da 20 a 30 embrioni, lavarli con 1.000 microlitri di soluzione di ipoclorito di sodio al 10% seguita da PBS sterile e etanolo al 70%. Infine, lavarli tre volte con PBS sterile.
Quindi, posizionare un foglio di rete di polipropilene pre-bagnato con PBS in una piastra a 24 pozzetti. Utilizzando una piccola spazzola sterilizzata, trasferire delicatamente gli embrioni di vespa dal colino cellulare al foglio di rete di polipropilene. Per l'allevamento di vespe, aggiungere 50 microlitri di NRM preparato a ciascun pozzetto con un foglio.
Quindi aggiungere un millilitro di acqua sterile tra ciascun pozzetto per mantenere un ambiente umido per la crescita. Il giorno successivo, trasferire la rete di polipropilene contenente la larva da un pozzetto all'altro usando una pinzetta disinfettata con alcool e aggiungere 50 microlitri di NRM equilibrato. Dopo nove o 11 giorni di alimentazione, oltre l'80% della larva dovrebbe svilupparsi in pupe bianche o gialle.
Quindi trasferire la rete su una piastra pulita. Nel presente studio, il tasso di sopravvivenza delle vespe prive di germi dalla larva alle pupe è stato significativamente migliorato rispetto all'allevamento di vespe prive di germi con NRM versione tre. Inoltre, non vi era alcuna differenza nel periodo di generazione tra le vespe prive di germi e quelle allevate convenzionalmente.
