Iniziare accendendo lo strumento e selezionando il processo di trasduzione delle cellule T dall'interfaccia touchscreen. Fare clic su Esegui per avviare la procedura e seguire le istruzioni visualizzate sullo schermo. Nella schermata di immissione del perimetro inserire le iniziali dell'operatore del set di tubi, il numero di lotto e la data di scadenza.
Quindi, selezionare il processo completo nella schermata di impostazione del processo. Ora, scegli due fiale di reagente di selezione per il metodo di selezione CD4, CD8. Installare il set di tubi, assicurandosi che tutte le connessioni dell'esca siano ben fissate e completare i test di integrità superiore e inferiore seguendo le istruzioni sul touchscreen.
A questo punto, collegare il fluido e le sacche tampone di lavorazione secondo la guida sullo schermo e iniziare l'adescamento automatico del set di tubi. Una volta visualizzata la schermata del prodotto della cella di trasferimento, trasferire il prodotto della cella a T scongelato in una sacca di trasferimento da 150 millilitri e saldarla sterile alla sacca di applicazione del set di tubi. Successivamente, utilizzare una sacca per il controllo qualità per ottenere un campione dalla sacca di applicazione ed eseguire un conteggio delle cellule utilizzando un analizzatore ematologico.
Collegare le fiale di reagenti CD4 e CD8 al set di tubi e avviare il processo di selezione per l'arricchimento delle cellule T. Dopo l'arricchimento, prelevare un campione delle cellule selezionate dalla busta di controllo qualità delle sacche di riapplicazione. Immettere la concentrazione di cellule desiderata e il numero di partenza.
Ora, collegare una fiala del reagente di attivazione secondo le istruzioni sullo schermo. Quindi, impostare la concentrazione di anidride carbonica al 5% e la temperatura della camera di coltura a 39 gradi Celsius. Stabilisci la matrice delle attività utilizzando il protocollo di alimentazione avanzato come punto di partenza e modifica i singoli passaggi in base al tuo specifico protocollo ottimizzato.
In questo caso, impostare il tempo di attività di trasduzione a 24 ore dopo la semina e il lavaggio della coltura a 48 ore dopo la trasduzione. Impostare il tempo di attivazione dello shaker in modo che inizi 30 minuti dopo l'inizio del lavaggio del coltura. Eliminare tutte le attività di scambio sacchi medi e sacchi rifiuti in quanto non più necessarie.
Quindi, premi OK sullo schermo per iniziare la coltivazione. Consentire allo strumento di pompare automaticamente il volume richiesto dalla sacca di riapplicazione nella camera di coltura. Scongelare e preparare il volume vettoriale calcolato in una sacca di reagenti da 20 millilitri con un mezzo freddo per raggiungere un volume finale di 10 millilitri.
Regolare la matrice di attività per impostare il tempo di trasduzione su due minuti nel futuro e premere OK per avviare l'attività di trasduzione. Saldare sterile la sacca vettoriale al set di tubi seguendo le istruzioni sullo schermo. Modificare la matrice di attività in base all'ora effettiva di inizio della trasduzione con il lavaggio della coltura programmato 48 ore dopo la trasduzione.
Programmare il tempo di attivazione dello shaker a 30 minuti dopo il lavaggio della coltura. Infine, assicurati che lo scambio di media avvenga nel pomeriggio alle 14:00 del sesto giorno. Premere il pulsante di campionamento e seguire le istruzioni sullo schermo per acquisire un campione di controllo qualità dalla coltura attiva.
Dividere il campione in tre aliquote da un millilitro per varie analisi. Preparare il tampone di formulazione finale, conservandone una parte per la preparazione del crioprotettore in un secondo momento. Modificare quindi la matrice delle attività, impostando la fine delle impostazioni cultura su due minuti nel futuro.
Collegare il tampone di formulazione finale al set di tubi e iniziare il raccolto. Sigillare e rimuovere la sacca di cellule bersaglio. Questa sacca contiene le cellule CAR-T pronte per l'infusione o la crioconservazione.
La RT dello studio clinico è stata del 46%Ciò indica che il processo TCT ha promosso efficacemente l'espansione cellulare. La vitalità cellulare del prodotto finale era compresa tra l'88 e il 94% e la purezza delle cellule T CD3 era compresa tra l'89 e il 93%Endotossina, micoplasma, sterilità, lentivirus competenti per la replicazione e cellule leucemiche residue non erano rilevabili.
