Calibrazione dello spettrometro di massa per lo screening dei lipidi con marcatura isotopica stabile mediante LC-TIMS-TOF MS/MS

Per iniziare lo spettrometro di massa, o la calibrazione MS per LC-TIMS-TOF-MS/MS, aprire il software di controllo TIMS e, nella sottoscheda di calibrazione, fare clic su m/z, selezionare il mix di sintonizzazione da Dropbox e fare clic su calibra nell'angolo in basso a destra. Continuare a fare clic su calibra fino a raggiungere un punteggio del 100%. Ora seleziona la scheda mobilità e segui gli stessi passaggi mostrati fino a raggiungere il punteggio di calibrazione del 100%.

Per generare ciascun punto di calibrazione nella curva di calibrazione, aggiungere alla miscela standard interna di lipidi 10 microlitri di miscela standard interna deuterata. Preparare sette campioni di questo tipo per sette punti di calibrazione nell'intervallo desiderato. Utilizzando il software di analisi dei dati, annotare manualmente le catene di acidi grassi in base ai modelli passivi MS/MS.

Per determinare la marcatura degli isotopi stabili, o efficienza SIL, calcolare il rapporto tra l'area degli isotopi contenenti SIL e l'area degli isotopi non contenenti SIL. Calcola il modello teorico determinando la probabilità di trovare un atomo marcato in qualsiasi sito. Calcolare l'arricchimento SIL adattando i profili isotopici sperimentali con il pattern teorico simulato su software di analisi dei dati.

Per avviare la corsa, attivare il forno a colonna facendo clic sul pulsante del termometro e attivare le pompe facendo clic sul pulsante della valvola. Impostare il metodo MS sul metodo appropriato salvato in precedenza. Verificare che il volume di iniezione sia di cinque microlitri, allineare la fiala di un bersaglio 20 a uno e salvare l'elenco dei campioni.

Avviare la sequenza e confermare l'avvenuta iniezione con il messaggio di iniezione, visualizzato sul sistema. Copia la prima riga e incollala sotto per generare una nuova seconda riga. Popola la seconda riga con campioni a seconda dell'esperimento.

Assicurarsi che venga utilizzata la posizione corretta nell'autocampionatore. Se le fasi mobili sono fresche, eseguire prima un test di forma del picco con gli standard della miscela lipidica del produttore, per confrontarlo con i risultati precedenti. La miscela lipidica e gli standard vengono visualizzati sullo schermo.

Assicurarsi che le nuove linee abbiano il metodo di separazione corretto e non il metodo di precondizionamento utilizzato nella prima linea. Assicurarsi che il metodo MS inserito sia corretto. Verificare che sia stato caricato il metodo di elaborazione corretto e che l'esecuzione del processo automatizzato sia abilitata.

Salvare l'elenco di campioni per assicurarsi che i campioni vengano analizzati al termine dell'esecuzione corrente.