Per iniziare, utilizzare la risonanza magnetica multi o biparametrica per localizzare il tumore e la sua posizione nella ghiandola prostatica prima dell'intervento chirurgico. Successivamente, preparare il paziente con l'accesso addominale, l'insufflazione e il posizionamento della chemioterapia. Impostare il pneumoperitoneo a 12 millimetri.
Praticare un'incisione sul peritoneo per rilasciare la vescica e sezionare lo spazio perirettale. Ora, apri la fascia pelvica su entrambi i lati ed esegui una dissezione completa degli aspetti anteriore e laterale della prostata e della vescica. Aprire il collo vescicale e identificare l'uretra prossimale.
Sezionare l'uretra prossimale per accedere agli aspetti posteriori della prostata e della vescica. Successivamente, seziona le vescicole seminali e lo spazio del retto, seguiti dagli aspetti laterali della prostata. Sezionare l'apice.
Quindi sezionare l'uretra distale. Completare quindi l'anastomosi vescico-uretrale. Estrarre la prostata, quindi suturare l'incisione.
Metti la prostata appena raccolta in un contenitore asciutto. Per elaborare la prostata per la raccolta del campione, selezionare prima le zone mirate in base alle informazioni della risonanza magnetica. Con un ago automatico monouso, è possibile prelevare campioni cilindrici dalle aree selezionate.
Quindi identificare la zona esterna del cilindro e bloccarlo con un paio di pinze per tessuti. Posizionare il cilindro su un vetrino e segnare la zona esterna con inchiostro per fazzoletti. Posizionare i cilindri raccolti orizzontalmente su un disco portacampioni riempito con terreno di inclusione del criostato e trasferirli su una piastra di raffreddamento a microtomo per il taglio.
Quindi, collegare il disco portacampione al mandrino del campione. Utilizzare il composto OCT per incorporare il campione di tessuto prima del sezionamento. Utilizzare un microtomo criostato per tagliare il campione a 25 gradi Celsius.
Raccogliere sottili sezioni di tessuto a forma di cilindro su vetrini da microscopio trattati. Fissare i vetrini in etanolo al 96%, quindi idratarli in acqua distillata. Colorare le sezioni con ematossilina di Harris per un minuto.
Ora trattare i vetrini con idrossido di ammonio al 30% per trasformare l'ematossilina in blu. Quindi colorare i vetrini lavati con eosina per 30 secondi. Quindi disidratare i vetrini con titolazioni crescenti di alcol, quindi eliminare con xilene al 100%.
Montare i vetrini con GPX e posizionare un vetrino coprioggetti sul tessuto colorato. Utilizzare un microscopio ottico per analizzare il campione colorato, discriminando le aree con il carcinoma e determinando il punteggio di Gleason del tumore. Contrassegnare con precisione le zone tumorali sui vetrini.
Quindi, con la lama chirurgica, macro-microdissezionare le aree del campione contrassegnate sul vetrino all'interno del disco OCT. Quando il tessuto di inclusione inizia a scongelarsi, sollevare il tessuto con un paio di pinze e posizionarlo in criotubi correttamente etichettati. Questa tecnica è stata utilizzata per ottenere materiale tumorale dal 61% dei casi studiati.
Delle 16 prostate in cui l'acquisizione del tumore non ha avuto successo, 10 avevano meno del 10% di carico tumorale e nessuna superava il 20%Un'analisi della curva ROC ha mostrato un'area sotto la curva di 0,843, indicando che questo metodo può fornire risultati soddisfacenti nell'acquisizione del tumore. La correlazione istopatologica del campione di prostatectomia radicale rispetto alla biopsia cilindrica processata è stata eseguita utilizzando la colorazione con ematossilina ed eosina. Diversi modelli istologici sono stati trovati lungo il cilindro, come il modello di Gleason 3, che mostrava piccole ghiandole ben formate rivestite da cellule cancerose.
Ghiandole di forma irregolare con cellule atipiche ingrandite sono state osservate nel modello di Gleason 4 sezioni. I campioni con neoplasia intraepiteliale prostatica mostravano cellule affollate all'interno degli spazi duttali.
