Per iniziare, prendi un filo di sutura di seta intrecciato e separalo in un unico filamento. Utilizzare due pinze Dumont 5 con punte e pinze micro smussate per creare un doppio anello attorno alla punta delle altre pinze. Con la pinza ad anello, afferrare l'estremità libera della sutura e tirarla con cautela attraverso entrambi gli anelli.
Utilizzare le forbici a molla vannas per tagliare i punti di sutura in eccesso da entrambi i lati. Dopo aver decapitato il ratto soppresso, eseguire un taglio longitudinale lungo la linea mediana della parete addominale. Quindi esteriorizzare il mesentere.
Taglia la connessione appena sotto lo sfintere pilorico, a circa due o tre centimetri sopra il cieco e la connessione al retto. Quindi, sciacquare i mesenteri interi sezionati in 200 millilitri di soluzione salina fisiologica ghiacciata. Successivamente, trasferirli e fissarli in una capsula di Petri rivestita di silicone contenente una soluzione salina fisiologica ghiacciata.
Utilizzando uno stereomicroscopio, una pinza fine Dumont 5 inox e forbici a molla vannas, sezionare i vasi linfatici mesenterici di secondo ordine dal grasso circostante e dal tessuto connettivo. Ora, trasferire il vaso linfatico sezionato nella camera di profusione del vaso per l'incannulamento su cannule di vetro. Far scorrere un singolo nodo su ciascuna cannula di vetro in preparazione per fissare il vaso sulle cannule in un secondo momento.
Usando un piccolo pezzo di grasso, orientare la direzione del vaso linfatico e incannulare l'estremità distale su P1. Far scorrere il nodo lungo la cannula e stringerlo per fissare il vaso linfatico. Quindi, pressurizzare il vaso linfatico per fortificare millimetri di mercurio nella camera di perfusione. Metti una pietra gorgogliante con il 7% di anidride carbonica e il 93% di ossigeno nella camera del bagno per mantenere il pH fisiologico.
Collegare la camera al regolatore di temperatura e impostarla a 37 gradi Celsius.
