Per iniziare, centrifugare le provette contenenti sangue coagulato a 626-1.409 G per 20 minuti a una temperatura compresa tra due e otto gradi Celsius. Quindi raccogliere con cura il surnatante in un nuovo tubo. Conservare il surnatante a meno 80 gradi Celsius.
Successivamente, impostare i pozzetti standard e campionare in bianco. Pipettare 50 microlitri degli standard diluiti nella piastra ELISA. Quindi trasferire 40 microlitri dei campioni diluiti nei pozzetti del campione.
Aggiungere 10 microlitri di siero nei pozzetti del campione. Ora, sigillare la piastra con una pellicola sigillante. Mettere il piatto sigillato in un'incubatrice a 37 gradi Celsius per 30 minuti.
Diluire la soluzione di lavaggio concentrata 30 volte con acqua distillata per ottenere una soluzione di lavaggio a forza singola. Quindi, rimuovere la pellicola sigillante dalla piastra e scartare il liquido. Ora, riempi ogni pozzetto con 200 microlitri di soluzione di lavaggio cinque volte.
Dopo aver scartato il surnatante per l'ultima volta, picchiettare la piastra per asciugarla. Pipettare 50 microlitri di reagente enzimatico in tutti i pozzetti diversi da quelli bianchi. Quindi sigillare la piastra con una pellicola sigillante prima di metterla in un'incubatrice a 37 gradi Celsius per 30 minuti.
Dopo aver lavato la piastra altre cinque volte, aggiungere 50 microlitri di ciascuno degli sviluppatori di colore, A e B.Agitare delicatamente la piastra per mescolare bene. Quindi incubare la piastra a 37 gradi Celsius in condizioni di scarsa illuminazione per 10 minuti. Ora, pipettare 50 microlitri della soluzione di arresto in ciascun pozzetto per terminare la reazione.
Misurare l'assorbanza di ciascun pozzetto in sequenza a 450 nanometri. La concentrazione plasmatica di omocisteina nel gruppo metionina era due volte maggiore rispetto al gruppo di controllo. Le concentrazioni plasmatiche di omocisteina erano relativamente più basse nei gruppi di trattamento.
