Posizionare il mouse anestetizzato in una cornice stereotassica. Identifica bregma e lambda, assicurandoti di non superare i 100 micrometri di dislivello tra i due punti di riferimento. Trova e segna le coordinate calcolate sul cranio con una matita sterile.
Attorno alle coordinate, crea un contorno della finestra di craniotomia di due millimetri per due millimetri. Dopo aver controllato la profondità dell'anestesia, utilizzare un trapano ad alta velocità per creare una finestra per craniotomia di due millimetri per due millimetri. Applicare da 0,5 a 1 millilitro di soluzione fisiologica normale per evitare che la superficie del cervello si secchi.
Rimuovere la dura madre utilizzando un ago da siringa e una pinza fine. Quindi, utilizzare un trapano ad alta velocità per creare un foro di bava separato per l'elettrodo di riferimento delle sonde in silicone, generalmente a uno o due millimetri dalla finestra cranica. Applicare 0,2 millilitri di adesivo siliconico a bassa tossicità sul cranio per sigillare completamente la craniotomia.
Utilizzando la piastra della testa e le viti, fissare la testa del mouse all'impianto di registrazione elettrofisiologica. Quindi rivestire il gambo della sonda in silicone con colorante fluorescente in modo che la traiettoria della sonda possa essere ricostruita dopo l'esperimento. Successivamente, montare la sonda sul manipolatore e impostare l'angolo desiderato.
Per abbassare la sonda di registrazione sulla superficie cerebrale all'interno del centro della finestra cranica, inserire manualmente la sonda a una profondità di circa 300 micrometri. Una volta inserita a questa profondità, abbassare lentamente la sonda automaticamente a 200 micrometri al minuto alla profondità desiderata per ridurre al minimo il danno tissutale. Infine, applicare olio minerale sulla superficie cerebrale all'interno della finestra craniotomica per prevenire l'essiccazione.
Quindi registrare i dati dalla sonda al silicio e dall'ECOG a 30 kilohertz utilizzando un controller di registrazione Intan. La maggior parte dei neuroni registrati ha diminuito la loro attivazione durante l'anestesia con sevoflurano. L'attivazione di VLPAG è diminuita significativamente dal basale al durante il sevoflurano.
Questa diminuzione è stata coerente in tutti i neuroni VLPAG.
