Per iniziare, preparare l'inoculo per studiare la cinetica di crescita di Chlorella sorokiniana e Haematococcus pluvialis Preparare il volume richiesto di terreno di coltura sterile secondo le procedure standard di laboratorio. Configura la sorgente luminosa sia per il fotobioreattore che per il pallone sullo spettro di colori desiderato. Coprire entrambi i sistemi per evitare interferenze con la luce esterna.
Dopo aver regolato le impostazioni del fotoperiodo, collegare il sistema di durata dell'anidride carbonica al fotobioreattore per fornire anidride carbonica per 12 ore alla clorella. Successivamente, inoculare il recipiente di coltura per ottenere una densità cellulare iniziale di 300.000 cellule per millilitro o una densità ottica di 0,180 a 550 nanometri. Assaggia la coltura a intervalli regolari di 12 ore per Chlorella sorokiniana e otto ore per Haematococcus pluvialis.
Mettere 40 millilitri di campione in una provetta da centrifugazione conica di plastica. Centrifugare la provetta a 3000 G per 20 minuti a 15 gradi Celsius. Decantare il surnatante e aggiungere tre millilitri di soluzione di acetone puro al 90% per risospendere le cellule, quindi trasferire le cellule in un tubo di vetro coperto con un foglio di alluminio per prevenire l'ossidazione e mescolare utilizzando un vortice.
Sonicare il campione sospeso in un bagno di ghiaccio per due cicli di cinque minuti ciascuno e lasciare riposare il campione a quattro gradi Celsius per 16 ore. Dopo il riposo, sonicare nuovamente il campione per due cicli di cinque minuti ciascuno nelle stesse condizioni e centrifugare il campione a 3000 G per 20 minuti a 15 gradi Celsius. Separare l'estratto di pigmento utilizzando una pipetta Pasteur e trasferirlo in un'altra provetta pulita e protetta dalla luce.
Quindi posizionare l'estratto di pigmento in una cella di quarzo e leggerlo in uno spettrofotometro a 600, 647 e 664 nanometri. Calcola le concentrazioni di clorofilla usando l'equazione. Il contenuto di clorofilla di Chlorella sorokiniana era più alto nel trattamento quattro, in condizioni di elevata aggiunta di anidride carbonica, luce viola e alta intensità luminosa.
Il grafico degli effetti principali ha mostrato che l'intensità della luce ha avuto un effetto inferiore rispetto all'anidride carbonica e agli effetti della luce viola. Nella Chlorella sorokiniana, è stato osservato un aumento consistente delle clorofille A e B durante l'esperimento, con la clorofilla A che ha superato la clorofilla B a 50 ore. Una diminuzione della concentrazione di clorofilla è stata osservata in Haematococcus pluvialis a 50 ore, con la clorofilla B che è diminuita significativamente mentre la clorofilla A è rimasta più alta.
