Dipartimento di Chirurgia, Università di California, San Francisco Raymond Shaheen, MD

I. Preparazione cellulare <ol><li> Le cellule tumorali del colon-retto sono cresciuti in coltura e raccolta quando subconfluent. </li><li> Una sospensione singola cella viene preparato in tampone fosfato e tenuta in ghiaccio. </li></ol> II. Preparazione del tumore <ol><li> Un mouse con un precostituito tumore del colon-retto per via sottocutanea è eutanasia. </li><li> Il tumore sottocutaneo viene rimosso utilizzando una tecnica sterile e diviso in 2-3 pezzi millimetri </li><li> I pezzi del tumore sono tenuti in tampone fosfato salino sul ghiaccio. </li></ol> III. Preparazione del mouse Nota: Nel nostro laboratorio usiamo per via inalatoria isoflurano per anestetizzare il mouse, in alternativa, si può usare anestetici iniettabili per ottenere lo stesso effetto <ol><li> La profondità di anestesia viene valutata usando un pizzico piedi. Non ci dovrebbero essere ritirarsi reflex con un pizzico punta. </li><li> Gli antibiotici può essere somministrato a questo punto. </li><li> Il mouse anestetizzato, che in precedenza era rasata, sia posizionata correttamente. </li><li> L&#39;addome viene preparato con una soluzione di Betadine. </li><li> Dell&#39;addome e del sito chirurgico sono drappeggiati in modo sterile. </li></ol> IV. Laparotomia <ol><li> Un piccolo nick è realizzata in pelle </li><li> La muscolatura della parete addominale è colto ed elevato </li><li> La cavità addominale è entrato e una singola lama delle forbici è usato per spingere l&#39;intra-addominale contenuti via </li><li> L&#39;incisione è estesa a 2-3 cm </li></ol> L&#39;esposizione V. del cieco <ol><li> Il cieco con il suo sacchetto finale cieco è identificato e esteriorizzato </li><li> Il cieco è isolato dal resto del mouse utilizzando un pre-taglio, garza sterile </li><li> Salina calda viene utilizzata per mantenere umido il cieco </li></ol> VI. L&#39;iniezione di cellule nella parete del cieco <ol><li> A 27 G o un ago sottile viene usato per iniettare un volume di 50 ml di cellule nella parete del cieco </li><li> L&#39;ago viene rimosso </li><li> Il sito di iniezione è controllato per garantire l&#39;assenza di perdite </li><li> Il cieco è tornato alla cavità addominale </li></ol> VII. Il trapianto di Tumore sulla Cieco Nota: oltre a iniettare le cellule nel muro del cieco, un approccio alternativo consiste nel trapianto di tumore sul cieco <ol><li> Una figura di 8 punti è posizionato sul cieco utilizzando 6-0 o 7-0 sutura dimensioni </li><li> La parete del cieco è leggermente danneggiato </li><li> Poi, il pezzo tumorale è posizionata </li><li> Il punto è legato </li><li> Il cieco è tornato alla cavità addominale </li></ol> VIII. Chiusura del mouse parete addominale e di recupero <ol><li> La parete addominale del mouse è chiuso con tre punti di sutura interrotta utilizzando 3-0 o 4-0 sutura dimensioni </li><li> In alternativa, si può usare un punto semplice esecuzione </li><li> Post-operatorio analgesici e un bolo fluido può essere data a questo punto </li><li> Il mouse è permesso di recuperare l&#39;anestesia. </li></ol> Nota: con anestetici inalatori questo richiede in genere 30 secondi IX. Risultati - tumore primitivo e metastasi epatiche <img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_8/A.png" alt="" /><img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_9/B.png" alt="" /><img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_10/C.png" alt="" /> Tumore primario - mostrato in situ (A) e con evidenza di neovascolarizzazione (B); alla colorazione H &amp; E, i tumori localmente invasivi (C) <img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_11/D.png" alt="" /> Metastasi al fegato - mostrato ex vivo (D)

<ol>
	<li>Heijstek, M. W., Kraneburg, O., Rinkes Borel, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+colorectal+cancer+and+liver+metastases.">Mouse models of colorectal cancer and liver metastases.</a> Dig Surg. 22, 16-25 (2005).</li><li>Kobaek-Larsen, M., Thorup, I., Diederichsen, A., Fenger, C., Hoitinga, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+of+colorectal+cancer+and+its+metastases+in+rodent+models:+comparative+aspects+with+those+in+humans.">Review of colorectal cancer and its metastases in rodent models: comparative aspects with those in humans.</a> Comp Med. 50, 16-26 (2000).</li><li>Wilmanns, C., Fan, D., O&apos;Brian, C. A., Bucana, C. D., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+and+ectopic+organ+environments+differentially+influence+the+sensitivity+of+murine+colon+carcinoma+cells+to+doxorubicin+and+5-fluorouracil.">Orthotopic and ectopic organ environments differentially influence the sensitivity of murine colon carcinoma cells to doxorubicin and 5-fluorouracil.</a> Int J Cancer. 52, 98-104 (1992).</li><li>Kashtan, H., Rabau, M., Mullen, J. B., Wong, A. H. C., Roder, J. C., Shiptz, B., Stern, H. S., Gallinger, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intra-rectal+injection+of+tumor+cells:+a+novel+animal+model+of+rectal+cancer.">Intra-rectal injection of tumor cells: a novel animal model of rectal cancer.</a> Surg Oncol. 1, 251-256 (1992).</li></ol>

Anche se il mouse modelli di tumore sottocutaneo sono facili da stabilire e controllare, è chiaro che questo modello non può replicare il sito originale anatomica del tumore colorettale. A causa della differenza di microambiente, le cellule del cancro colorettale in crescita sotto la pelle hanno dimostrato di cambiare il loro fenotipo e quasi sempre non riescono a progredire e metastasi 1,2. In realtà, la risposta del tumore alla terapia può variare notevolmente a seconda che le cellule tumorali sono impiantate in un ectopica...

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Cell culture media and components</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>will vary depending on cell line used</td>
</tr>
<tr>
<td>Phosphate Buffered Saline</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BioWhitaker</td>
<td>17-512F</td>
<td>also sold by a number of other vendors</td>
</tr>
<tr>
<td>15 mL centrifuge tubes, polypropylene</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Corning</td>
<td>430790</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>6 well plates with lid</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Becton Dickinson Labware</td>
<td>353046</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Iris forceps, straight, serrated tips</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>15914</td>
<td>best to have a pair of these instruments</td>
</tr>
<tr>
<td>Iris dissecting scissors, straight, sharp</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>14393</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Needle Holder (regular)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>14109</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Needle Holder (Castroviejo)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>14137</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cidex Plus</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>7364</td>
<td>instruments should be autoclaved periodically, but may also be sterilized by soaking in Cidex</td>
</tr>
<tr>
<td>6-0 or 7-0 suture</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>for cecum; courtesy of Department of Surgery, UCSF</td>
</tr>
<tr>
<td>3-0 or 4-0 suture</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>for abd wall; courtesy of Department of Surgery, UCSF</td>
</tr>
<tr>
<td>Anesthetic machine / Isoflurane</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>J.A. Baulch and Associates</td>
<td>3206</td>
<td>also sold by a number of other vendors</td>
</tr>
<tr>
<td>Heating Pad, disposable, 6" x 6"</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Prism Technologies</td>
<td>20419</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tape, orange, 13 mm x 13 m</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>15901F</td>
<td>for restraining anesthetized mouse</td>
</tr>
<tr>
<td>Pro-Cord/Cordless Trimmer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Oster</td>
<td>78997-010</td>
<td>for shaving mouse fur</td>
</tr>
<tr>
<td>Betadine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>19-027132</td>
<td>may also be purchased at any medical supply store</td>
</tr>
<tr>
<td>2 x 2 gauze, 3-ply</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Johnson and Johnson</td>
<td>7635</td>
<td>may also be purchased at any medical supply store</td>
</tr>
<tr>
<td>Sterile Field, Barrier, 16" x 29"</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Johnson and Johnson</td>
<td>0905</td>
<td>may also be purchased at any medical supply store</td>
</tr>
<tr>
<td>Cotton tipped applicators, 6"</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>14-960-3Q</td>
<td>may also be purchased at any medical supply store</td>
</tr>
<tr>
<td>Syringe, 10 cc, Luer lock tip</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>309604</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Syringe, 1 cc, tuberculin, slip tip</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>309602</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>27 1/2 G needle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>305109</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>30 G needle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>305106</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>

orthotopic mouse model of colorectal cancer

Il tradizionale modello di tumore sottocutaneo è proprio l&#39;ideale per lo studio del cancro del colon-retto. Ortotopico modelli murini di cancro del colon-retto, che presentano le cellule tumorali in crescita nella loro posizione naturale, replicare malattia umana con l&#39;alta fedeltà. Due tecniche possono essere usate per stabilire questo modello. Entrambe le tecniche sono simili e richiedono l&#39;anestesia del mouse e laparotomia per l&#39;esposizione del cieco. Una tecnica prevede l&#39;iniezione di una sospensione di cellule di cancro del colon-retto nella parete del cieco. Le cellule cancerose vengono prima crescere in coltura, raccolto quando subconfluent e pronta come una sospensione di cellule singole. Una piccola quantità di cellule viene iniettato lentamente per evitare perdite. L&#39;altra tecnica prevede il trapianto di un pezzo di tumore sottocutaneo sul cieco. Un mouse con un precostituito tumore del colon-retto per via sottocutanea è eutanasia e il tumore è stato rimosso con tecnica sterile. Il pezzo tumore è diviso in piccoli pezzi per il trapianto di un altro mouse. Prima del trapianto, la parete del cieco è leggermente danneggiato per facilitare l&#39;infiltrazione delle cellule tumorali. Il tempo per lo sviluppo di tumori primari e delle metastasi epatiche varia a seconda della tecnica, linea cellulare, e le specie utilizzate il mouse. Questo modello murino ortotopico è utile per studiare la naturale progressione del tumore del colon-retto e test nuovi agenti terapeutici contro il cancro del colon-retto.

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Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

Due tecniche possono essere usate per stabilire questo modello: l&#39;iniezione di una sospensione di cellule tumorali nella parete del cieco o il trapianto di un pezzo di tumore sottocutaneo sul cieco. Questo modello è utile per studiare la naturale progressione del tumore del colon-retto e test nuovi agenti terapeutici contro il cancro del colon-retto.

Topo Modello ortotopico di cancro colorettale

The traditional subcutaneous tumor model is less than ideal for studying colorectal cancer. Orthotopic mouse models of colorectal cancer, which feature ...

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Research

JoVE Journal

Biology

44.4K Views.  University of California, San Francisco - UCSF. Due tecniche possono essere usate per stabilire questo modello: l'iniezione di una sospensione di cellule tumorali nella parete del cieco o il trapianto di un pezzo di tumore sottocutaneo sul cieco. Questo modello è utile per studiare la naturale progressione del tumore del colon-retto e test nuovi agenti terapeutici contro il cancro del colon-retto.