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Method Article
Neurexinsとneuroliginsはシナプス分化と伝達に重要な役割を実行する膜ニューロンの接着タンパク質です。のニューロリギン欠損変異体 C.エレガンス浸透圧強度を検出するのに欠陥がある、しかし彼らはまた、ニューレキシンをコードする遺伝子に変異が含まれている場合、彼らは野生型の表現型を回復する。
Neurexinsとneuroliginsは、興奮性と抑制性シナプスに存在する細胞接着分子であり、それらは正しいニューロンのネットワーク機能1に必要です。これらのタンパク質は、シナプス前及びシナプス後膜2で見られる。マウスの研究では、neurexinsとneurologinsがシナプス伝達1の本質的な役割を持っていることを示している。最近の報告では、人間の神経系の開発中に変更された神経細胞の接続は、自閉症スペクトラム障害3の多数の例病因の基礎を構成することができることが示されている。
線虫(Caenorhabditis elegans)があるため実験室での実験のためのそのシンプルさ、シナプス成分の機能の研究を促進するために実験的なツールとして使用し、その神経系、シナプスの配線が完全に特徴付けされていることを与えることができます。 Cで。 エレガンスNRX - 1とNLG - 1遺伝子は、それぞれα-ニューレキシン- 1、ニューロリギン- 1タンパク質を、エンコード人間NRXN1とNLGN1遺伝子にオルソロガスです。ヒトと線虫では、neurexinsとneuroliginsの組織は、機能ドメインの点で似ています。
線虫の頭部はamphid、浸透力を含め様々な刺激に応答を媒介する線虫の感覚器官が含まれています。 amphidは繊毛状突起一シナプス前終末軸索4の12の感覚バイポーラの神経細胞で作られています。 ASHRとASHLという名前のこれらのニューロンの二つは、高い浸透力5で水溶性の忌避剤を検出し、浸透圧感覚機能に特に重要です。これら2つのニューロンの樹状突起は、口の先端に長くし、軸索は、彼らが行動反応6を決定する他のニューロンとのシナプス結合を作る神経リング、に拡張します。
高い浸透力の回避にニューレキシンとニューロリギンの影響を評価するために、我々は、4Mフルクトースリング7に基づいてメソッドを使って、NRX - 1とNLG - 1遺伝子に欠陥のある線虫変異株の異なる応答を示しています。行動の表現型が特異的RNAiのクローン8を用いて確認された。 C.で虫は 、RNAiを引き起こすために必要なdsRNAは、9を供給することにより投与することができます。食品を介してdsRNAの配信は、このように遺伝的要素とのネットワーク経路の同定を可能にする目的の遺伝子のRNAiの干渉を誘導する。
1:浸透回避アッセイ。
2:RNAiの給餌によるノックダウンのワームの発生。
3:使用される菌株。
C.本研究で使用した線虫株を表1に示す。変異株は、N2野生に対して外交配- タイプの少なくとも4倍、突然変異誘発のプロトコル中に生成されている可能性が不要なランダムな突然変異を削除する。
。。OP50 E coli株は、プラスミドNRX - 1を運ぶpL4440(JA:C29A12.5)と線虫遺伝子センター、ミネソタ大学、米国大腸菌 HT115(DE3)でsuppliiedしたとNLG - 1(JA:C40C9.5 )遺伝子断片は、ピーターAskjaer、セントロアンダルシアデBiologíaデル開発省(CABD)、CSIC大学パブロオラビデ、セビリア、スペインで提供されていました。
4:代表的な結果。
例示的な結果は図1と図2で表されます。各菌株三レプリカ実験の最低の10匹を行った。
図1。浸透回避行動の実験。
対照株とNRX - 1 V欠損mutantwormsは、彼らが浸透バリア(4Mフルクトース)を発生したときに逆方向に反転することで対応(ok1649とtm1961)。NLG - 1(ok259とtm474)X変異体はこのバリアーを検出に失敗する。 NLG - 1とNRX - 1の欠損二重変異体は、菌株CRR21(ok1649、ok259)VXとCRR23(tm1961、ok259)VXは、野生型の表現型を回復した。 *は、t -学生の試験によるブリストルN2野生型に各菌株の応答では、T -生徒のテストで有意差(P≤0.001)を示しています
図2。 RNAiの給餌によるノックダウンのワームを用いた実験。
大腸菌 HT115(DE3)空のpL4440ベクターで形質転換または標的遺伝子NRX - 1またはNLG - 1に対応するフラグメントを含むが飼育異なるワームの菌株に使用されていました。 *は、空のpL4440ベクトルが供給N2株と比較して、NLG - 1遺伝子を標的断片でpL4440ベクターを保持する細菌が供給N2株の応答では、T -生徒のテストで有意差(P≤0.001)を示しています。
Neurexinsとneuroliginsはシナプス伝達11とシナプス結合12の分化に重要な役割を行う。両分子は、自閉症13,14のための候補遺伝子として同定されている。
このビデオでは、私たちはCの浸透回避反応に影響を及ぼす遺伝子の影響を研究することができるシンプルな方法を示してエレガンス 。ニューロリギン欠損変異体では、浸透力を検出す...
我々は彼の貴重な支援に感謝博士アントニオミランダ- Vizueteしたいと思います。我々はまた、貴重な技術支援のためにサルマBoulayouneとイザベルキャバに私たちの感謝の意を表したいと。この作品は、アンダルシア州政府(BIO - 272)からの助成金によって賄われた。この研究は、ヨーロッパでは遺伝子実験を規制する現行の法律との合意で行われている。
表1。C.虫系統。
Name | Company | Catalog Number | Comments |
ひずみ | 遺伝子 | 対立遺伝子 | 元 |
ブリストルN2 | - | - | aCGC |
VC228 | NLG - 1 | ok259 | CGC |
FX00474 | NLG - 1 | tm474 | bNBP - 日本 |
VC1416 | NRX - 1 | ok1649 | CGC |
FX1961 | NRX - 1 | tm1961 | NBP -ジャパン |
NL2099 | RRF - 3 | pk1436 | CGC |
CRR21 | NRX - 1、NLG - 1 | ok1649; ok259 | この作業 |
CRR22 | NRX - 1、NLG - 1 | tm1961; ok259 | この作業 |
A. 線虫遺伝子センター、ミネソタ大学、米国。
B.実験動物"線虫C. elegans"のためのナショナルバイオリソースプロジェクト。東京女子医大、 日本。
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