滴タイトルセルのカプセル化

要約

要約

プロトコル

NIH3T3細胞の準備：

イジェクト用A.セル

1. 細胞をトリプシン処理し、細胞培地で1:1に希釈し、T75フラスコから15mlのファルコンチューブに移す
2. 遠心分離によってペレットに細胞をスピンダウン、上清を吸引し、DPBSで細胞を洗浄
3. 再びペレットに細胞をスピンダウンし、上清を吸引除去する
4. メディアに懸濁し
5. 血球計（〜200 T75フラスコあたりのX 10 ⁴細胞/ mL）で細胞密度を決定する
6. 、細胞溶液を遠心上清を吸引除去し、細胞濃度を変化させるためのメディアの適切な量で再懸濁します。

B.セルの取り出し

1. 取り出しのために使用する前に渦細胞
2. シリンジに細胞溶液200μLを転送する
3. パルス発生器で適切なモードを設定します。
   1. イジェクト単一の液滴と、複数の液滴のために（バースト）、"E. BUR"モードにパルスジェネレータを設定する
   2. 連続的な液滴の吐出の場合は、"NORM"モードにパルスジェネレータを設定する
4. 信号の設定を変更する
   1. ハイレベルとローレベルの出力電圧を設定する：5 VまでとLOL 0 VにHILと"LIM"LEDが点灯していることを確認してください
   2. 方形パルスとして信号を設定します。
   3. （"DUTY"）電磁弁は、"WID"の値を変更するか、デューティサイクルを変更することにより、液滴吐出用に開いている時間の量を変更
   4. "PER"の値を変更することにより、放出の周波数を変更する
   5. "BUR"の値を変更することにより、バーストで放出された液滴の数を変更する
5. 顕微鏡でイメージングするため、プリペアド基板上に細胞液を取り出します

C.染色

1. DPBSのmL当たり0.5μLカルセイン- AM、2μLのエチジウムホモ二量体と色素溶液を作る
2. 色素溶液に浸します調製した基質
3. サンプルは37℃で10分間インキュベートすることができます·イメージングの前にC

実験の検証

1. ニコンのEclipse TE - 2000 U蛍光顕微鏡で
   1. スポット高度なソフトウェア（診断、（株））
   2. LIVE / DEADアッセイ

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資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Fluorescent Microscope		Nikon Instruments	Eclipse TE-2000 U
Solenoid valve cell ejector				Operation frequency: 1 KHz, 30psi, 50nl~0.5ul. 12V Valve Driver: 2.5 Amp drive current
5-Gallon Portable air tank		Coleman	Powermate CT5	Pressurized air: 30 PSI
Pressure regulators		Marsh Bellofram
Pulse Generator			HP8112A	Actuation frequency generation: 50 MHz
XYZ-stage		Newmark Systems		With Stepping motor: 6inch travel xy-stage(NLS4-6-25), 2.5inch travel z-stage(NLS4-2.5-25), 3axis controller(NSC-G3), 0.1um resolution
NIH 3T3	Cell-line			fibroblasts
Trypsin				0.05% solution
NIH 3T3 cell medium
DPBS	Buffer
T75				Tissue culture flasks
Plastic conical tubes				15 ml, for tissue culture