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Method Article
This video demonstrates a model to study the development of myointimal hyperplasia after venous interposition surgery in rats.
Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. Research models for bypass graft failure are essential for a better understanding of pathobiological and pathophysiological processes during graft patency loss. Large animal models, such as pigs or sheep, resemble human anatomical structures but require special facilities and equipment. This video describes a rat vein interposition model to investigate vein graft patency loss. Rats are inexpensive and easy to handle. Compared to mouse models, the convenient size of rats permits better operability and enables a sufficient amount of material to be obtained for further diverse analysis. In brief, the inferior epigastric vein of a donor rat is harvested and used to replace a segment of the femoral artery. Anastomosis is conducted via single stitches and sealed with fibrin glue. Graft patency can be monitored non-invasively using duplex sonography. Myointimal hyperplasia, which is the main cause for graft patency loss, develops progressively over time and can be calculated from histological cross sections.
虚血性心疾患およびこれらの合併症は、世界中の主要な死因の一つです。現在の治療戦略が狭く、血管を拡張するか、またはバイパスを作成することによってのいずれかで、再確立の血流に焦点を当てます。静脈自家移植片を用いて、冠動脈バイパス術(CABG)は、最初1968年に記載されたし、長年にわたって洗練されています。離れて左冠動脈前下行枝の血行再建から、伏在静脈導管は、最も一般的に1を使用しています。しかし、グラフト開存は、伏在静脈グラフト(SVG)のアキレス腱のまま。一年間手術後、グラフト開存は、10年2,3後に61%に低下、85%です。 SVGの開存損失の病態生理学的メカニズムと原因を発表することが重要な作業です。
このビデオでは、静脈グラフトの損失を調査するため、ラットの静脈介在モデルを示しています。この方法の全体的な目標は、基礎となる病理生物学を探求していますそして、-physiologicalプロセス疾患の進行中に、薬剤や治療法の選択肢のテストに適したモデルを開発します。動脈系への浅腹壁静脈に移植することにより、このモデルは、厳密に、冠状動脈バイパス移植の臨床状況を模倣します。外科的外傷、虚血、および壁応力は、病理学的な血管の変化の重要なトリガーであると説明したモデルで模倣されています。
異なるモデルと種が静脈グラフト開存損失を調査するために利用可能です。このような豚4、ヒツジ5、犬6、およびサル7などの大型動物モデルは、人間の血管との解剖学的構造に似ているので、8をテストするために、このようなバイパスステント留置術または新しい外科技術のような複雑な治療戦略を可能にします。しかし、特別な住宅、設備、スタッフが必要とされています。また、高コストと手術中の追加の麻酔医の必要性は、そのより広範な適用を妨げます。 Smのラットを含めたすべての動物は、特別な住宅を必要としない、取り扱いが容易で、かつ管理コストを持っています。マウスモデル9,10に比べて、ラットのモデルは結果より良い操作性、したがってより少ない可変性という利点を有します。ラットは、生理学的および遺伝的にマウス11,12よりヒトに類似しています。さらに、ほとんどの野生型マウスは、IIエラーを入力しやすいマウスモデルを作る限定myointima 13を 、開発します。このような下大静脈などの主要なマウスの静脈の組織学は、わずか数細胞層で構成され、13難しい早期評価をレンダリングします。さらなる欠点は、移植片回収後のその後の分析のために利用可能な組織の少量です。
このビデオで説明したモデルは、再現可能な、安価、かつ実施が容易であり、迅速かつ確実に確立することができます。このようなウイルスベクターのような高価な実験的な治療薬を評価するために特に適しています経済的な様式で、遺伝子治療のために。
動物は、実験動物資源研究所が作成し、国立衛生研究所が発行し、実験動物の原則のためのガイドに準拠した人道的なケアを受けました。全ての動物プロトコルは責任を負う地方自治体(「AMTのエリーゼお大事にウントVerbraucherschutz、Hansestadt(保健・消費者保護のためのオフィス)ハンブルグ」)によって承認されました。
1.動物ケア
ドナーラットの作製
受信者のラットの調製
4.二重超音波検査
注:使用したラット14で非侵襲的に血液の流れを可視化するduxplex超音波検査。
5.組織病理学
注:形態学的分析15のためのマッソンの三重染色で容器を収穫し、染色します。
6.生物発光イメージング(BLI)
注:術後の移植片は、生物発光信号1を測定することにより、生体内で時間をかけて追跡しました6。
ラット静脈介在モデルはmyointima過形成および静脈グラフト不全の発達を研究するのに適しています。動物は手術からよく回復し、優れた物理的条件ポスト動作を示しています。 図1は、キーの外科的手順を示しています。リネアの鼠径沿って皮膚切開後、心窩部表在静脈と大腿動脈( 図1A)が同定されています。これは初期の移植不全と開存性の損失につながる可能?...
このビデオでは、静脈グラフトの損失を調査するための基礎となる病理学的プロセスの探求、新しい薬や治療法の選択肢のテストを可能にするために、ラットの静脈介在モデルを示しています。
麻酔は外科的処置の重要な側面です。これは、特に長時間の操作中に、安全で簡単な方法であるような連続吸入麻酔システムは、推奨されます。この操作は1時間以上を要する?...
The authors have nothing to disclose.
著者は、彼女の技術支援のためのクリスティPahrmannに感謝します。この研究は、ドイツ財団fuer Herzforschung(F / 28/14)で賄われていました。 DWは、心臓や肺移植のための国際社会からの旅行賞によってサポートされていました。 TDはエルス・クローネ - フレゼニウス・財団(2012_EKES.04)からエルスクローネ優秀給付金を受け取りました。 SSはドイツ学術協会(; DE2133 / 2-1、TDおよびSCHR992 / 3 1、SCHR992 / 4-1、SS DFG)からの研究助成金を受けました。
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Rat LEW/Crl | Charles River | Stock number 004 | |
Rat LEW-Tg(Gt(ROSA)26Sor- 1 luc)11Jmsk | Institute of laboratory animals, Kyoto University, Japan | NBPR rat number 0299 | http://www.anim.med.kyoto-u.ac.jp/NBR/ |
PFA 4% | Electron Microscopy Sciences | #157135S | 20% |
hair clipper | WAHL | 8786-451A ARCO SE | |
Forene | AbbVie | PZN 10182054 Art.Nr.: B506 | Isoflurane |
microsurgical clamp | Fine Science Tools | 18055-04 | Micro-Serrefine - 4 mm |
clamp applicator | Fine Science Tools | 18056-14 | |
hair removal creme | Rufin cosmetic | 27618 | |
Povidone-Iodine | Betadine Purdue Pharma | NDC:67618-152 | |
10-0 Ethilon suture | Ethicon | 2814G | |
5-0 prolene suture | Ethicon | EH7229H | |
Rimadyl | Pfizer | 400684.00.00 | Carprofen |
Novaminsulfon | Ratiopharm | PZN 03530402 | Metamizole |
Heparin | Rotexmedica | PZN: 3862340 | 25.000 I.E./ ml |
Xylocain 1% | AstraZeneca | PZN: 1137907 | Lidocain |
EVICEL | J&J Med.Ethicon Biosur | PZN 7349697 Art. Nr.:EVK01DE | fibrin glue |
NaCl 0.9% | B.Braun | PZN 06063042 Art. Nr.: 3570160 | |
Vevo 770 high-resolution in vivo micro-imaging system | VisualSonics | duplex sonography | |
Ecogel 100 ultrasound gel | Eco-med | 30GB | |
D-Luciferin Firefly, potassium salt | Biosynth | L-8220 | |
PBS pH 7.4 | Gibco | 10010023 | |
Xenogen Ivis 200 | Perkin Elmer | bioluminescence imaging | |
Weigerts iron hematoxylin Kit | Merck | 1.15973.0002 | Trichrome staining |
Resorcine-Fuchsine Weigert | Waldeck | 2.00E-30 | Trichrome staining |
Acid Fuchsin | Sigma-Aldrich | F8129-25G | Trichrome staining |
Ponceau S solution | Serva Electrophoresis | 33427 | Trichrome staining |
Azophloxin | Waldeck | 1B-103 | Trichrome staining |
Molybdatophosphoric acid hydrate | Merck | 1.00532.0100 | Trichrome staining |
Orange G | Waldeck | 1B-221 | Trichrome staining |
Light Green SF | Waldeck | 1B-211 | Trichrome staining |
Vitro-Clud | Langenbrinck | 04-0001 | |
Glacial Acetic Acid | Sigma-Aldrich | 537020 | |
37% HCl | Sigma-Aldrich | H1758 | |
Xylene | Th. Geyer | 3410 | |
Paraffin | Leica biosystems | REF 39602004 | |
Ethanol absolute | Th. Geyer | 2246 | |
Ethanol 96% | Th. Geyer | 2295 | |
Ethanol 70% | Th. Geyer | 2270 | |
Slide Rack | Ted Pella | 21057 | |
Staining dish | Ted Pella | 21075 | |
Bepanthen Eye and Nose ointment | Bayer | 1578675 | Eye ointment |
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