JoVE Logo
著者
お問い合わせ

サインイン

このコンテンツを視聴するには、JoVE 購読が必要です。 サインイン又は無料トライアルを申し込む。

この記事について

  • 要約
  • 要約
  • 概要
  • プロトコル
  • 結果
  • ディスカッション
  • 開示事項
  • 謝辞
  • 資料
  • 参考文献
  • 転載および許可

要約

中立的の物理化学的性質および生理活性を調製および特徴付ける方法は、pH 応答性 siRNA ナノ粒子が提示される。サイズ、形態、表面電荷、siRNA ローディング、および遺伝子サイレンシングなどの siRNA 品を正常に行うための基準が議論されています。

要約

対象となる分子薬としての siRNA の成功は、病理組織内の細胞へのその効率的なセルゾル送達に依存する。SiRNA を用いて以前に「undruggable」肝疾患を治療するための臨床的成功が達成された。しかしながら、効率的な腫瘍 siRNA 送達には、長い循環時間、クリアランス器官 (例えば、肝臓および腎臓) の回避、および腫瘍の浸透および保持を含むさらなる薬物動態学的設計の考慮が必要性がある。ここでは、効率的な siRNA 送達、特に腫瘍などの非肝組織に対して設計されたポリマーナノ粒子の調製およびインビトロ物理化学/生物学的特性評価について説明する。SiRNA ナノ粒子は、siRNA の静電ビスホスホンとジブロック共重合体ポリ (エチレングリコール-b-[2-(dimethylamino) エチルメタクリレート-共ブチルメタクリレート]) (PEG-DB) によって調製され、ポリイオン錯体を形成します (polyplexes) は、siRNA がポリプレックスコア内に隔離されており、PEG は親水性の中立的を帯びたコロナを形成します。さらに、DB ブロックは、endolysosomal 経路酸性化 (< pH 6.8) の小胞として膜溶菌となり、siRNA のエンドソームのエスケープおよび細胞質送達をトリガする。サイズ、表面電荷、粒子形態、および siRNA ローディングなどの siRNA ナノ粒子の物理化学的特性を特徴付ける方法について説明する。SiRNA ナノ粒子の生理活性は、迅速かつハイスループットな遺伝子サイレンシングアッセイにおけるモデル遺伝子としてのルシフェラーゼを用いて測定される。これらの初期試験 (PEG − DB ベースの polyplexes など) を通過する設計は、腫瘍または他の病理部位への siRNA の送達を評価する前臨床動物研究への翻訳に適していると考えられる。

概要

Sirna は、mRNA 配列からのタンパク質の翻訳を阻害するので、理論的にはすべての既知の病理1、2、3、4、5に薬物を使用することができます。しかし、薬における sirna の使用は、sirna 分子6、7の包括的に貧弱な薬物動態学的プロファイルによって制限される。静脈内に注射すると、sirna は腎臓を通して急速に取り除かれ、ヌクレアーゼ8,9によって劣化します。大きいサイズおよび否定的な充満が原因で、siRNA は細胞質10、11、12に常駐する RNA 誘発性サイレンシング複合体 (RISC) にアクセスするためにセルに入るか、または endolysosomal 経路を逃れることができません。 13.したがって、広範な努力は、siRNA 送達戦略14の設計および実施に焦点を当ててきた。この取り組みは、siRNA をパッケージングする脂質およびポリマーベースのナノ粒子の開発に主に焦点を当てており、それをインビボでのクリアランスおよび分解から保護し、ionizable、カチオンアミン基を介して細胞取り込みおよびエンドソームエスケープを開始する。多くの臨床上の成功が報告されており、最近では、遺伝性 transthyretin 媒介性 (hATTR) アミロイドーシス15を治療するためのナノ粒子系肝 siRNA 送達について最初の臨床的成功が報告されている。

従来の薬理学 (すなわち、低分子薬) によって現在「undruggable」されている多くの癌原因遺伝子があり、癌16を治療するために高分子 siRNA ナノ粒子 (Si-NPs) の設計を動機付ける。ただし、非肝性 siRNA 送達について考慮しなければならない設計パラメータの別個のセットがあります。送達システムは、体循環17、18、19内に凝集を引き起こすポリプレックスのカチオン電荷を遮蔽しなければならない。腫瘍送達のために、具体的には、si − NP 安定性は、長期循環を見識するために不可欠であり、したがって、増強された透過性および保持 (EPR) 効果を介して腫瘍内で蓄積を増加する作用20、21。さらに、si-NP サイズに対する制御は、約20〜 200 nm の直径のサイズをレバレッジ EPR22、およびより小さい Si-NPs (〜 20-50 nm の直径) より大きいサイズのナノ粒子上の腫瘍の浸透を改善し、微粒子23。

静脈内投与後の siRNA の全身性腫瘍送達のためのこれらの追加的な設計制約に対処するために、中立的、pH 応答性 si − NPs が開発されている (図 1)24。これらの si NPs は、ペグ化、または最も最近では、Zwitterionated25、中性表面電荷および循環におけるタンパク質吸着および opsonization に対する耐性のためです。細胞内送達を駆動するためにカチオン性の特性だけに頼ることができないため、強力な遺伝子サイレンシングを達成するためには非常に効率の良いエンドソームエスケープが不可欠です。したがって、これらの si NPs のコアは、細胞外 pH (7.4) で不活性である高 endosomolytic コアで構成されていますが、endolysosomal 経路の酸性化条件でスイッチ状にトリガされます [pH 6.8 (初期エンドソーム)-5.0 (リソソーム)]。最後に、si-NPs のコア内のカチオンと疎水性の含有量の混合物は、静電とファンデルワールスの両安定化力を提供し、単なるカチオン系と比較して、血液中の si-NPs の安定性を改善します。

比較的単純な設計への多くの機能の統合は、可逆的な追加-フラグメンテーション連鎖伝達 (ラフト) 制御された重合を使用して、複合建築と精密組成でポリマーを生成することが可能である。中性表面電荷、pH 応答性、および NP 安定性を備えた si-NPs を生成するために、筏は、ポリ (エチレングリコール-b-[2-(dimethylamino) エチルメタクリレート-共ブチルメタクリレート]) (PEG-DB を合成するために使用されます。図 1a)。PEG-DB は siRNA と複合化された静電的で、PEG 化コロナと DB/siRNA コアを有する si-NPs を形成します (図 1b)。PEG は、si-NP コロナ上に不活性で中立的に帯電した親水性層を形成します。DB ブロックは、2-(dimethylamino) エチルメタクリレート (DMAEMA) およびブチルメタクリレート (BMA) の50:50 モル比で構成されています。カチオン性 DMAEMA 静電的複合体負荷電 siRNA。BMA はファンデルワールス相互作用によって NP コア内で自己アソシエートし、NP 安定性を増加させます。共に、DMAEMA および BMA は DB ポリマーブロックに pH 依存性脂質二重膜溶菌挙動を付与する。細胞外 pH では、DB ブロックは si-NP コアに隔離され、脂質りんに対して不活性です。Endolysosomal 経路内のもののような酸性条件下では、DB ブロック内の ionizable DMAEMA はプロトンスポンジ効果を促進し、そこでエンドソームバッファリングは浸透圧膨潤および破裂26につながる。さらに、DB ブロック内の疎水性の BMA 部分は、溶解脂質りんに積極的に統合し、強力な endosomolysis をもたらす。したがって、siRNA は PEG-DB と複合化され、細胞外 pH では中立的で非常に安定であり、酸性 pH でりん脂質を破壊し、siRNA ペイロードの質細胞送達を確実にします。

ここでは、PEG-DB から si-NPs を製造するための実験的手順について説明する。Si-NPs の物理化学的パラメーターと生理活性を特徴付ける方法を紹介し、議論します。Si-NP 生理活性を迅速に評価するため、ノックダウン研究のためのモデル遺伝子としてルシフェラーゼを使用しています。ホタルルシフェラーゼは、ホタル27の「輝き」の原因となるタンパク質です。したがって、ホタルルシフェラーゼ遺伝子を導入した哺乳動物細胞は、ルミノメーターを用いて捕捉できる生物発光「グロー」を生成し、ルシフェラーゼ発現のレベルを定量化することができます。ここではルシフェラーゼを用いてルシフェラーゼの生理活性を評価し、それに対して、スクランブル siRNA を受ける細胞と比較して、ルシフェラーゼ発現細胞における生物発光の減少を定量化しています。

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

プロトコル

1. si-NPs の準備と特性評価

  1. si-NP 準備
    1. 10 mM クエン酸緩衝液 (pH 4.0) で 3.33 mg/mL でポリマーを溶解させます。ポリマーは、まず溶解を確実にするためにエタノール中の10倍濃度で溶解することができる。
      注: ポリマーは、より低い濃度で溶解することができますが、3.33 mg/mL 以上の濃度で使用すると、均質な NP 形成を防ぐことができます。
    2. SiRNA (diH の50μ m) を加えて、N+:P-比が10になるようにします。ピペットでポリマーと siRNA 溶液を徹底的に混合し、30分間インキュベートします。N+:P 比は、siRNA 上の負電荷リン酸基の数に対する、ポリマー上の正電荷アミン基の数を表し、以下の式によって計算されます。
      figure-protocol-460
      ここで、モル数はポリマーのモル量であり、RU アミンはポリマー当たりの正電荷アミンの繰り返し単位の数であり、mol sirna は siRNA のモル量であり、bp siRNA は siRNA 分子あたりの塩基対の数である。
    3. 5倍の過剰リン酸緩衝液 (pH 8.0) を加え、ピペッティングまたはチューブを反転させることによって、軽く混ぜる。最終的な pH が中性 (~ 7.2-7.5) であることを確認するには、si-NP 溶液の10μ l を pH テストストリップにピペットで移します。
      注: クエン酸およびリン酸バッファーは、Millipore シグマバッファーリファレンスセンターチャートに従って作成されます。
  2. Si-NPs の物理化学的特性
  3. 動的光散乱 (DL) を使用して得られた si-NPs のサイズと表面電荷を記録します。1 mL の si-NPs (0.1-1.0 mg/mL) を0.45 μ m の細孔サイズシリンジフィルターを通して、正方形の石英またはポリスチレンキュベットに濾過することにより、DLS サンプルを準備します。製造元の仕様に従って、DLS インストゥルメントを使用してサイズとサーフェスの電荷の測定値を記録します。
    1. 透過型電子顕微鏡 (TEM) によるイメージング解析により、si-NPs のサイズと形態を確認します。
      1. TEM の格子に1つの mg/mL で si-NP 解決の5つのμ l を加え、60 s. ブロットのために3つの s のためにインキュベートしなさい。
      2. 3% ウラニル酢酸塩溶液5μ l を加え、20秒間インキュベートします。乾燥の下で一晩乾燥したグリッドで乾燥させます。
      3. 使用される特定の顕微鏡のために確立される議定書に従うイメージの格子。
    2. アガロースゲル遅延を用いて様々な N+:P 比で si-NPs における siRNA のローディングを特徴付けます。
      1. 2% のアガロースゲルを製造するには、pH 8.0 で 2 g の電気泳動グレードアガロース粉末を 100 mL (トリス-アセテート-EDTA) バッファーに追加します。アガロースを懸濁させる。すべてのアガロースが溶解するまで、マイクロ波で熱が漏れた (1-3 分)。
      2. 一度冷却し、5μ l の臭化エチジウム (H2o/mL) を加え、よく混ぜる。アガロースをゲルトレイに注ぎ、蓋をして井戸を生産し、30分間乾燥させます。慎重に負荷ウェルの後ろに残して櫛を取り外し、1x テコンドーバッファーで最大充填ラインにゲルトレーを充填します。
      3. (上記の手順に従って) 0、1、2、5、7、10、20、および 40 N+:P 比で Si- NPs を生成します。各 si-NP 製剤についてパラフィン皮膜上に2μ l のローディング染料 (SDS および還元剤なし) を配置する。ピペットによってパラフィンフィルムのローディングの染料との si-NP 解決の10μ l を混合しなさい。
      4. Si-NP/ローディング色素溶液をアガロースゲルウェルに添加します。35 min のための 100 V の電圧源を動かしなさい (またはサンプルがゲルの長さの 80% を横断するまで)。
      5. 製造元の仕様に従って、UV トランスイルミネータの siRNA バンドを可視化します。

2. si-NPs のインビトロ生理活性の測定

  1. モデル遺伝子ルシフェラーゼのノックダウン
    1. (上記の手順に従い)、スクランブル siRNA 配列をコントロールとして使用して、ルシフェラーゼ siRNA とスクランブルされた si-NPs を使用して、ルシフェラーゼ si-nps を生成します。Formualte は、同じ最終 N+:P 比で、およびアガロースゲル遅延研究によって同定された最適比率で両方の si NPs を検出します。SiRNA 配列の例は、材料の表に含まれています。
    2. 96の種子ルシフェラーゼ発現細胞「MDA-MB-231/ルシフェラーゼ (Bsd) 安定した細胞」は、ウェルあたり2000細胞の密度で、十分に黒い壁プレートを備えています。インキュベーター内でフルメディア (DMEM、10% FBS) に一晩付着させることができます (37 °c、5% co2、95% 湿度)。
    3. 1ウェルあたり100μ l、100 nM の siRNA 濃度の最終体積で、si-NPs を完全な血清培地に希釈します。Si-NPs と24時間のセルを扱います。
    4. 24時間後、処理を除去し、150μ g/mL ルシフェリンを含む完全な血清培地で培地を交換します。メーカーの仕様に従ってプレートリーダーまたはインビボ光学イメージングシステムで発光を測定する前に、細胞を5分間インキュベートします。
    5. ルシフェリンを含む培地を新鮮な完全血清培地に交換し、24時間以上インキュベートします。上記の手順を繰り返し、培地を除去し、150μ g/mL D-ルシフェリンを含む完全な血清培地に交換し、48 h timepoint で発光を測定する前に5分間インキュベートする。
    6. 長手方向の研究のために、発光を測定しながら無菌条件下で細胞を維持します。ルシフェリンを取り替えた後、測定の間で新鮮な、完全な媒体の文化に続けてください。
      注: 適切な siRNA 濃度は、異なる si-NPs および siRNA 分子によって変化します。Endosomolytic コア (例えば、中立的) と polyplexes を使用する場合、100 nM は、通常、細胞によって十分に許容され、> 75% のルシフェラーゼノックダウンを生成します。10 N+:P 比および 100 nM sirna 処理における PEG- DB と sirna の質量比 (26 bp siRNA を想定) は23.3、すなわち 1.0 ng の siRNA ごとに 23.3 NG の peg-db を加えます。例えば、166.5 ng の siRNA に 3.33 mg/mL ポリマーの1.16 μ l を加え、100 nM の96ウェルプレートで1ウェルを治療します (100 mL メディアボリュームウェルあたり)。

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

結果

インビボ siRNA 送達に対する有効な si-NPs のいくつかの本質的特徴は、適切なサイズ (〜20〜 200 nm の直径)、siRNA パッケージング、および生物活性の遺伝子サイレンシングである。これは完全なリストではありませんが (議論で説明されているように)、これらの基本的な特性は、製剤のさらなるテストを検討する前に確認する必要があります。

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

ディスカッション

ここで説明する si NPs は、アニオン性 siRNA とカチオン化ポリマーの静電的な関連によってポリイオン複合体 (polyplexes) に形成される。SiRNA の静電錯化、および PEG − DB ポリマーのカチオン DB ブロックは、低 pH (4.0) で混合することにより促進される。PH 4.0 では、DMAEMA は高度にプロトン化されており、その結果、DB ブロックが高充電されます。これにより、ポリマーが unimers として溶解し、ミ?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

開示事項

著者らは利益相反の可能性を明らかにしていない。

謝辞

著者たちは、クレイグ・デュヴァルとレベッカ・クックに感謝し、この研究を行うためのデータとラボ・リソースへのアクセスを担当している。著者たちは、ヴァンダービルト研究所 (VINSE) に DL および TEM (NSF EPS 1004083) 装置へのアクセスを感謝している。著者は、大学院研究フェローシッププログラム (NSF # 1445197) を支援するための全米科学財団に感謝しています。著者は、財政支援のための国立衛生研究所 (NIH R01 EB019409) に感謝しています。著者たちは、Congressionally の金融支援研究プログラム (DOD CDMRP OR130302) の国防総省に感謝しています。

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

資料

NameCompanyCatalog NumberComments
0.45 μm pore-size syringe filtersThermo Fisher ScientificF2513317 mm diameter, PTFE membrane
0-14 pH test stripsMillipore SigmaP4786
10x TAE bufferThermo Fisher Scientific/InvitrogenAM9869
6-7.7 pH test stripsMillipore SigmaP3536
96-well black walled platesCorning3603Tissue-culture treated
Agarose PowderThermo Fisher Scientific/Invitrogen16500
Citric acid monohydrateMillipore SigmaC1909
dibasic sodium phosphate dihydrateMillipore Sigma71643
D-luciferinThermo Fisher Scientific88294Monopotassium Salt
DMEMGibco11995065High glucose and pyruvate
EthanolMillipore Sigma459836
ethidium bromideThermo Fisher Scientific/Invitrogen15585011
FBSGibco26140079
loading dyeThermo Fisher Scientific/InvitrogenR0611
Luciferase siRNAIDTN/AAntisense Strand Sequense: GAGGAGUUCAUUAUCAGUGC
AAUUGUU
Sense Strand Sequense: CAAUUGCACU
GAUAAUGAACUCCT*C* *DNA bases
MDA-MB-231 / Luciferase (Bsd) stable cellsGenTarget IncSC059-BsdLuciferase-expressing cells sued to assess si-NP bioactivity
monobasic sodium phosphate monohydrateMillipore SigmaS9638
Scarmbled siRNAIDTN/AAntisense Strand Sequense: AUACGCGUAUU
AUACGCGAUUAACGAC
Sense Strand Sequense: CGUUAAUCGCGUAUAAUAC
GCGUA*T* *DNA bases
square polystyrene cuvettesFisher Scientific14-955-1294.5 mL capacity
TEM gridsTed Pella, Inc.1GC50PELCO Center-Marked Grids, 50 mesh, 3.0mm O.D., Copper
Trisodium citrate dihydrateMillipore SigmaS1804
uranyl acetatePolysciences, Inc.21447-25

参考文献

  1. Fire, A., et al. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature. 391 (6669), 806-811 (1998).
  2. Elbashir, S. M., et al. Duplexes of 21-nucleotide RNAs mediate RNA interference in cultured mammalian cells. Nature. 411 (6836), 494-498 (2001).
  3. Soutschek, J., et al. Therapeutic silencing of an endogenous gene by systemic administration of modified siRNAs. Nature. 432 (7014), 173-178 (2004).
  4. Hannon, G. J. RNA interference. Nature. 418, 244(2002).
  5. Dykxhoorn, D. M., Palliser, D., Lieberman, J. The silent treatment: siRNAs as small molecule drugs. Gene Therapy. 13 (6), 541-552 (2006).
  6. Wittrup, A., Lieberman, J. Knocking down disease: a progress report on siRNA therapeutics. Nature Reviews Genetics. 16 (9), 543(2015).
  7. Li, H. E., Nelson, C. C., Evans, B., Duvall, C. Delivery of Intracellular-Acting Biologics in Pro-Apoptotic Therapies. Current Pharmaceutical Design. 17 (3), 293-319 (2011).
  8. Bartlett, D. W., Davis, M. E. Effect of siRNA nuclease stability on the in vitro and in vivo kinetics of siRNA-mediated gene silencing. Biotechnology and Bioengineering. 97 (4), 909-921 (2007).
  9. Zuckerman, J. E., Choi, C. H., Han, H., Davis, M. E. Polycation-siRNA nanoparticles can disassemble at the kidney glomerular basement membrane. Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 109 (8), 3137-3142 (2012).
  10. Dominska, M., Dykxhoorn, D. M. Breaking down the barriers: siRNA delivery and endosome escape. Journal of Cell Science. 123 (Pt 8), 1183-1189 (2010).
  11. Gilleron, J., et al. Image-based analysis of lipid nanoparticle–mediated siRNA delivery, intracellular trafficking and endosomal escape. Nature Biotechnology. 31 (7), 638(2013).
  12. Sahay, G., et al. Efficiency of siRNA delivery by lipid nanoparticles is limited by endocytic recycling. Nature Biotechnology. 31 (7), 653-658 (2013).
  13. Wittrup, A., et al. Visualizing lipid-formulated siRNA release from endosomes and target gene knockdown. Nature Biotechnology. 33 (8), 870-876 (2015).
  14. Kanasty, R., Dorkin, J. R., Vegas, A., Anderson, D. Delivery materials for siRNA therapeutics. Nature Materials. 12 (11), 967-977 (2013).
  15. Adams, D., et al. Patisiran, an RNAi Therapeutic, for Hereditary Transthyretin Amyloidosis. New England Journal of Medicine. 379 (1), 11-21 (2018).
  16. Dang, C. V., Reddy, E. P., Shokat, K. M., Soucek, L. Drugging the 'undruggable' cancer targets. Nature Reviews Cancer. 17 (8), 502(2017).
  17. Alexis, F., Pridgen, E., Molnar, L. K., Farokhzad, O. C. Factors affecting the clearance and biodistribution of polymeric nanoparticles. Molecular Pharmaceutics. 5 (4), 505-515 (2008).
  18. Verbaan, F. J., et al. The fate of poly(2-dimethyl amino ethyl)methacrylate-based polyplexes after intravenous administration. International Journal of Pharmaceutics. 214 (1-2), 99-101 (2001).
  19. Lv, H., Zhang, S., Wang, B., Cui, S., Yan, J. Toxicity of cationic lipids and cationic polymers in gene delivery. Journal of Controlled Release. 114 (1), 100-109 (2006).
  20. Shi, J., Kantoff, P. W., Wooster, R., Farokhzad, O. C. Cancer nanomedicine: progress, challenges and opportunities. Nature Reviews Cancer. 17 (1), 20(2016).
  21. Torchilin, V. Tumor delivery of macromolecular drugs based on the EPR effect. Advanced Drug Delivery Reviews. 63 (3), 131-135 (2011).
  22. Duncan, R. The dawning era of polymer therapeutics. Nature Reviews Drug Discovery. 2 (5), 347(2003).
  23. Tang, L., et al. Investigating the optimal size of anticancer nanomedicine. Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 111 (43), 15344-15349 (2014).
  24. Nelson, C. E., et al. Balancing Cationic and Hydrophobic Content of PEGylated siRNA Polyplexes Enhances Endosome Escape, Stability, Blood Circulation Time, and Bioactivity in vivo. ACS Nano. 7 (10), 8870-8880 (2013).
  25. Jackson, M. A., et al. Zwitterionic Nanocarrier Surface Chemistry Improves siRNA Tumor Delivery and Silencing Activity Relative to Polyethylene Glycol. ACS Nano. , (2017).
  26. Akinc, A., Thomas, M., Klibanov, A. M., Langer, R. Exploring polyethylenimine-mediated DNA transfection and the proton sponge hypothesis. The Journal of Gene Medicine. 7 (5), 657-663 (2005).
  27. de Wet, J. R., Wood, K. V., DeLuca, M., Helinski, D. R., Subramani, S. Firefly luciferase gene: structure and expression in mammalian cells. Molecular and Cellular Biology. 7 (2), 725-737 (1987).
  28. Aggarwal, P., Hall, J. B., McLeland, C. B., Dobrovolskaia, M. A., McNeil, S. E. Nanoparticle interaction with plasma proteins as it relates to particle biodistribution, biocompatibility and therapeutic efficacy. Advanced Drug Delivery Reviews. 61 (6), 428-437 (2009).
  29. Geng, Y., et al. Shape effects of filaments versus spherical particles in flow and drug delivery. Nature Nanotechnology. 2 (4), 249(2007).
  30. Chauhan, V. P., et al. Fluorescent nanorods and nanospheres for real-time in vivo probing of nanoparticle shape-dependent tumor penetration. Angewandte Chemie International Edition. 50 (48), 11417-11420 (2011).
  31. Chu, K. S., et al. Plasma, tumor and tissue pharmacokinetics of Docetaxel delivered via nanoparticles of different sizes and shapes in mice bearing SKOV-3 human ovarian carcinoma xenograft. Nanomedicine. 9 (5), 686-693 (2013).
  32. Werfel, T. A., et al. Selective mTORC2 Inhibitor Therapeutically Blocks Breast Cancer Cell Growth and Survival. Cancer Research. 78 (7), 1845-1858 (2018).
  33. Sarett, S. M., et al. Lipophilic siRNA targets albumin in situ and promotes bioavailability, tumor penetration, and carrier-free gene silencing. Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 114 (32), E6490-E6497 (2017).
  34. Williams, M. M., et al. Intrinsic apoptotic pathway activation increases response to anti-estrogens in luminal breast cancers. Cell Death and Disease. 9 (2), 21(2018).
  35. Evans, B. C., et al. Ex Vivo Red Blood Cell Hemolysis Assay for the Evaluation of pH-responsive Endosomolytic Agents for Cytosolic Delivery of Biomacromolecular Drugs. Journal of Visualized Experiments. (73), e50166(2013).
  36. Werfel, T., et al. Combinatorial Optimization of PEG Architecture and Hydrophobic Content Improves siRNA Polyplex Stability, Pharmacokinetics, and Potency In vivo. Journal of Controlled Release. , (2017).
  37. Kilchrist, K. V., Evans, B. C., Brophy, C. M., Duvall, C. L. Mechanism of Enhanced Cellular Uptake and Cytosolic Retention of MK2 Inhibitory Peptide Nano-polyplexes. Cellular and Molecular Bioengineering. 9 (3), 368-381 (2016).
  38. Kilchrist, K. V., et al. Gal8 Visualization of Endosome Disruption Predicts Carrier-Mediated Biologic Drug Intracellular Bioavailability. ACS Nano. , (2019).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

転載および許可

このJoVE論文のテキスト又は図を再利用するための許可を申請します

許可を申請

さらに記事を探す

147 RNA Endosomolysis pH

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

個人情報保護方針

利用規約

一般データ保護規則

お問い合わせ

図書館への推薦

JoVE ニュースレター

研究

教育

著者

図書館員

JoVEについて

Copyright © 2023 MyJoVE Corporation. All rights reserved