改善されたサンプリング技術と組織学的特性評価による前立腺腫瘍バイオバンキングの信頼性の向上

要約

このプロトコルは、根治的前立腺全摘除術標本からのサンプルの収集を容易にする方法を説明しています。目標は、バイオバンクに保存する前に、解剖病理学的基準に基づいて標本から組織サンプルをマッピング、特性評価、およびミクロマクロで解剖することです。

要約

新鮮で十分に特徴付けられた腫瘍組織サンプルを取得することは、高品質の「オミクス」研究を実施するために重要です。ただし、前立腺がん(PC)のコンテキストでは、この臓器のユニークな性質とこの腫瘍に関連する高い不均一性のために、特に困難になる可能性があります。一方、組織に大きな変化を起こさずに、保存前にサンプルを組織病理学的に特徴づけることも興味深い課題です。これに関連して、解剖病理学的基準に基づいて切除された前立腺組織を取得、マッピング、特性評価、およびマイクロ解剖するための新しい方法を提示します。

以前に発表されたプロトコルとは異なり、この方法は、外科的マージンの評価に重要な前立腺標本の構造を損なうことなく、前立腺標本の組織病理学的分析に必要な時間を短縮します。さらに、グリーソンスコア、前駆病変(高悪性度前立腺上皮内腫瘍-PIN)、炎症性病変(前立腺炎)などの病理学的基準によって定義される組織学的腫瘍領域に焦点を当てて、新鮮な前立腺組織サンプルの描写とミクロマクロ解剖を可能にします。これらのサンプルは、その後の研究分析のためにバイオバンクに保管されます。

概要

前立腺がん(PC)は、男性で^2番目に 頻度の高いがんであり、世界で5^番目に 多い死因です¹。患者の治療と予後は、腫瘍の病期分類と悪性度(グリーソンスコア)に左右されます。これは、限局性腫瘍および低悪性度腫瘍(グリソン悪性度6)(99%)の5年生存率が高い(99%)ことからも明らか^{です。これは}、グリソン悪性度の高い腫瘍および転移性腫瘍(31%)と比較して2です。

PC局所再発および治療の失敗は、この腫瘍³型の特徴的な高い遺伝的腫瘍内不均一性に関連している。さらに、PCは、異なる形態学的、組織学的、および^{分子的特徴}を示すいくつかの腫瘍病巣4を持つ多病巣であると考えられており、これらは独立して発生するか、または共通の腫瘍細胞の祖先⁵に由来する可能性がある。これまでの研究では、腫瘍の進化は、転移を促進したり、細胞系譜を^前立腺に閉じ込めたりする特定の遺伝的ドライバーに基づいて、患者間で異なることが示されています5。したがって、さまざまな腫瘍病巣の分子特性評価は、より正確な診断と予後を提供するだけでなく、患者に効果的で個別化された治療を調整するためにも重要です。....

プロトコル

この方法は、さまざまな臨床サービス(泌尿器科、病理学、およびLa Fe病院バイオバンク)が関与する共同作業を通じて開発されました。この研究は、人間の福祉に関する制度的、国内的、および国際的なガイドラインに準拠して実施され、スペイン、バレンシアのInstituto de Investigación Sanitaria Hospital Universitario y Politécnico La Feの生物医学研究倫理委員会から承認を受けました。すべてのサンプルは、La Fe Hospital Biobank(PT13/0010/0026)に保管されました。全体的な手順を 図 1 に示します。

図1:全体的な手順スキーム。 プロトコルの項で説明した段階的な手順の概略図。

ディスカッション

どのような調査研究においても、体系的なバイアスを減らし、信頼性の高い結果を得るためには、質の高いサンプルを取得することが不可欠である²²。したがって、サンプルが処理および保存される温度、サンプルの収集から保存までの経過時間、滅菌材料の使用、または防腐剤やその他の添加剤の添加がサンプルに及ぼす影響などの分析前変数の制御は、生物学的サンプ?.......

資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Cadiere forceps	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471049. 18 uses.
Conventional slides	Knittel Glass	2021	Ground/ Frosted end
Cryostat microtome	Thermo Fisher Scientific	---	Criostato CryoStar NX50
Cryotubes	Greiner Bio-One GmbH	Ref.: 122280.	CRYO S. PP, with screw cap, sterile.
Da Vinci surgical system	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	XI model
Dissection instruments	Bayer	---	Two tweezers and a surgical blade
DPX Eukitt	Medizin- und Labortechnik GmbH	6.00.01.0001.06.01.01
Eosin	Agilent	157252
Fenestrated bipolar forceps	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471205. 14 lives.
Force bipolar	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471405. 12 uses.
Freezers	Thermo Scientific		MODEL 907. -80 ºC
Hematoxylin	Agilent	157251
Inmunohistochemistry Slides	Agilent-Dako	K802021-2
Large needle driver	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471006. 15 uses.
Maryland bipolar forceps	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471172. 14 uses.
Microscope	Olympus	---	Olympus cx40
Microtome blades	PFM Medical	a35
Monopolar curved scissors	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 470179. 10 uses.
OCT compound	NEG-50	LOT.117340
PlusSpeed S Single-use Biopsy Device with beveled tip	Peter Pflugbeil GmbH	PSS-1825-S
ProGasp forceps	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471093. 18 uses.
Sample holder Disc	Davidson Cryo Chuck. BradleyProducts		30 mm
Tissue ink	Pelikan	2021	Ink 4001 brilliant black (301168)
Xylol	Quimipur	Ref. 169