インドシアニングリーン血管造影による新生血管加齢黄斑変性症の血管形態の特性評価

要約

現在、フルオレセイン血管造影(FA)は、脈絡膜新生血管(CNV)の動物モデルにおける漏出パターンを特定するための好ましい方法です。ただし、FAは血管の形態に関する情報を提供しません。このプロトコルはマウス モデルでレーザー誘導されたCNVの異なった損害のタイプを特徴付けるのにインドシアニンの緑色の血管造影(ICGA)の使用を概説する。

要約

加齢黄斑変性症(AMD)は、高齢者の失明の主な原因であり、人口の高齢化により有病率が急速に増加しています。脈絡膜新生血管(CNV)または滲出型AMDは、すべてのAMD症例の10%〜20%を占め、AMD関連の失明の驚くべき80%〜90%の原因となっています。現在の抗VEGF療法は、患者の約50%で最適でない反応を示しています。CNV患者における抗VEGF治療に対する耐性は、しばしば細動脈CNVと関連しているが、レスポンダーは毛細血管CNVを有する傾向がある。フルオレセイン血管造影(FA)は、滲出型AMD患者および動物モデルの漏出パターンを評価するために一般的に使用されますが、CNV血管形態(細動脈CNV と毛細血管CNV)に関する情報は提供しません。このプロトコルはレーザー誘導されたCNVマウス モデルの病変のタイプを特徴付けるのにindocyanineの緑色の血管造影(ICGA)の使用をもたらす。この方法は、滲出型AMDにおける抗VEGF耐性のメカニズムと治療戦略を調査するために重要です。機構的および治療的研究におけるCNVの漏出と血管の特徴の両方を包括的に評価するために、FAと一緒にICGAを組み込むことが推奨されます。

概要

加齢黄斑変性症(AMD)は、高齢者の重度の視力低下につながる一般的な状態です¹。米国だけでも、AMD患者数は現在の1,100万人から2050年には2,200万人近くに達すると予測されています。世界全体では、AMDの推定症例数は2040年までに2億8,800万人に達すると予想され^{ています2。}

脈絡膜新生血管(CNV)は、「滲出型」または血管新生AMDとも呼ばれ、網膜中心の下に異常な血管が形成されるため、視力に壊滅的な影響を与える可能性があります。これは、出血、網膜の滲出、および重大な視力喪失につながります。細胞外VEGFを標的とする抗血管内皮増殖因子(VEGF)療法の導入は、CNV治療に革命をもたらしました。しかし、これらの進歩にもかかわらず、患者の最大50%がこれらの治療法に対して最適ではない反応を示し、体液の蓄積や未解決の出血または新しい出血などの進行中の疾患活動性を示します^{3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14}

プロトコル

この研究で実施された動物実験は、ベイラー医科大学の動物実験委員会(IACUC)から承認されました。すべての手順は、Association for Research in Vision and Ophthalmology(ARVO)の眼科および視力研究における動物の使用に関する声明に概説されているガイドラインに準拠して実施されました。本研究では、若齢(7〜9週間)および老齢(12〜16か月)のC57BL / 6J雄および雌マウスを使用しました。動物は市販の供給源から入手した( 資料表参照)。

1. イメージングシステムの準備

1. イメージングプラットフォーム( 材料表を参照)に加熱パッドを配置して、イメージング中にマウスの体温が維持されるようにします。加熱パッドを作動させ、温度を35°Cに調整します。
2. ダストカバーを取り外し、レーザー走査型検眼鏡の電源を入れます。マシンに55°レンズを置きます。
3. イメージングソフトウェア( 材料表を参照)をセットアップし、遺伝子型、性別、年齢などの重要な情報を入力します。イメージングセッションが開始されたら、ICGA画像をキャプチャするための IR (赤外線チャネル)を選択します。

ディスカッション

この研究では、インドシアニングリーン血管造影(ICGA)を使用して、レーザー誘導CNVを使用したマウスモデルにおける細動脈および毛細血管脈絡膜新生血管(CNV)の血管形態を特定することが実証されました。インドシアニングリーン(ICG)色素のヘモグロビン結合および赤外光特性により、研究コミュニティで現在採用されているフルオレセイン血管造影(FA)では困難なCNV形態の検出が可能になり?.......

資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
32-G Insulin Syringe	MHC Medical Products	NDC 08496-3015-01
Alexa Fluor 488 goat anti-rabbit secondary antibody	Invitrogen	A11008
Anti-α smooth muscle Actin antibody	Abcam	ab5694
Bovine Serum Albumin	Santa Cruz Biotechnology, Inc.	sc-2323
C57BL/6J mice (7-9 weeks)	The Jackson Laboratory	Strain #:000664
Fluorescein Sodium Salt	Sigma-Aldrich	MFCD00167039
Gaymar T Pump Heat Therapy System	Gaymar	TP-500	Water circulation heat pump for mouse recovery after imaging
GenTeal Gel	Genteal	NDC 58768-791-15	Clear lubricant eye gel
GS-IB4 Alexa-Flour 568 conjugate	Invitrogen	I21412
Heidelberg Eye Explorerer	Heidelberg Engineering, Germany	HEYEX2
Indocyanine Green	Pfaultz & Bauer	I01250
Ketamine	Vedco Inc.	NDC 50989-996-06
Paraformaldehyde	Acros Organics	416785000
Proparacaine Hydrochloride Ophthalmic Solution (0.5%)	Sandoz	NDC 61314-016-01
Spectralis Multi-Modality Imaging System Heidelberg Engineering, Germany SPECTRALIS HRA+OCT Tropicamide ophthalmic solution (1%) Bausch & Lomb NDC 24208-585-64 for dilation of pupils GenTeal Gel Genteal NDC 58768-791-15 clear lubricant eye gel Ketamine Vedco Inc NDC 50989-996-06 Xylazine Lloyd Laboratories NADA 139-236 Acepromazine Vedco Inc NDC 50989-160-11 32-G Needle Steriject PRE-32013 1-ml syringe BD 309659 Indocyanine Green Pfaltz & Bauer I01250	Heidelberg Engineering, Germany	SPECTRALIS HRA+OCT
Triton X-100	Sigma-Aldrich	X100-1L
Tropicamide ophthalmic solution (1%)	Bausch & Lomb	NDC 24208-585-64	For dilation of pupils
Xylazine	Lloyd Laboratories	NADA 139-236