Gynura bicolor DCの化学成分を研究するための高分解能タンデム質量分析

要約

高分解能質量分析分析と分子ドッキングを伝統的な漢方薬研究に統合する一般的なプロトコールについて説明します。

要約

目的の化学成分の分離と分析は、伝統的な中国医学(TCM)の基礎研究にとって重要な課題です。超高速液体クロマトグラフィー四重極飛行時間型タンデム質量分析(UPLC-Q-TOF-MS/MS)は、TCM成分の同定のための主要な技術として徐々に普及しています。 GynuraバイカラーDC。 中国で薬や食品に使われる多年草の茎のないハーブ(BFH)は、熱をすっきりさせる、肺を潤す、咳を緩和する、うっ血を分散させる、むくみを和らげるなどの薬効があります。ポリフェノールやフラボノイドには多数の異性体が含まれており、BFH中の錯体化合物の同定を妨げています。この論文では、UPLC-Q-TOF-MSによる溶媒抽出と統合データに基づいて、BFHの化学成分を研究するための体系的なプロトコルを提示します。

ここで説明する方法には、サンプルの前処理、MSキャリブレーション、MS取得、データ処理、および結果の分析のための体系的なプロトコルが含まれています。サンプルの前処理には、収集、洗浄、乾燥、破砕、抽出が含まれます。MSキャリブレーションは、マルチポイント補正とシングルポイント補正で構成されています。データ処理には、データのインポート、メソッドの確立、分析処理、および結果の表示が含まれます。この論文では、 Gynura bicolor DC. (BFH)におけるフェノール酸、エステル、および配糖体の典型的なフラグメンテーションパターンの代表的な結果を示します。さらに、有機溶媒の選択、抽出、データ統合、衝突エネルギーの選択、およびメソッドの改善について詳しく説明します。この汎用プロトコールは、TCM中の複雑な化合物を同定するために広く使用できます。

概要

中国では何千年にもわたって中国で臨床が行われており、中国人の健康維持に重要な役割を果たしています¹。TCMの組成は多様で複雑であり、TCMは化学組成に焦点を当てた多くの定性的研究で広く報告されています²。TCMの化学成分は、アルカロイド、有機酸、フェニルプロパノイド、クマリン、リグナン、キノン、フラボノイド、テルペノイド、トリテルペノイドサポニン、ステロイドサポニン、強心配糖体、タンニン^{3などのカテゴリ}に大別できます。TCMには未知の成分や見分けがつかない異性体が多数存在することを考えると、目的の化学成分の分離と分析は^TCM4の基礎研究にとって重要な課題です。

超高速液体クロマトグラフィー四重極飛行時間型質量分析(UPLC-Q-TOF-MS)は、超高速液体^{クロマトグラフィー5,6}で分離できる漢方薬(TCM)の物質を分析するために適用されています。MSの高分解能は、広範なイオン情報を提供することができ、誤差が5ppm未満のデータベース分析に使用されます⁷。コリ....

プロトコル

1.サンプル前処理

1. 目に見える堆積物や不純物がなくなるまで、BFHのハーブ全体を純水で洗います。きれいなBFHを皿に入れてからオーブンに入れます(図1B)。オーブンを50°Cに24時間設定します。
   注:BFHの全工場は中国の四川省で収集されました。
2. 高速多機能破砕機でBFHを粉砕乾燥。粗い粉末を50メッシュのふるいに移します(図1C)。微粉末を密閉袋に集め、乾燥塔に保管します。
3. それぞれ0.25 gのBFHサンプル6個を正確に秤量し、6つの円錐形フラスコに入れます。30 mLの有機溶媒(50%エタノール水、70%エタノール水、クロロホルム、石油エーテル、酢酸エチル、およびn-ブチルアルコール)を各コニカルボトル(図1D)に加えます。
4. 混合物を超音波浴超音波装置に移し、25°Cで30分間抽出します。 サンプルを14,000 x g で5分間遠心分離します。注射用シリンジと0.22μmの有機微多孔質メンブレンフィルターを調製します。すべての上清を2mLのサンプルボトルにろ過します。

ディスカッション

水煎じ薬¹²の他に、有機溶媒抽出は、TCM前処理¹³の別の一般的な方法である。同様の相溶解の原理によれば、種々の有機溶媒¹⁴の組み合わせにより多数の成分が抽出されている。超音波支援抽出は、TCM¹⁵の成分を得るために使用される主要な方法の1つです。超臨界二酸化炭素抽出は、リグナンなど.......

資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
chloroform	Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd	CAS 67-66-3
ethanol	ChuandongChemical	CAS 64-17-5
ethyl acetate	ChuandongChemical	CAS 141-78-6
liquid chromatograph	Waters	ACQUITY Class 1 plus
MassLynx	Waters	V4.2	MS control software
n-butyl alcohol	ChuandongChemical	CAS 71-36-3
petroleum ether	ChuandongChemical	CAS 8032-32-4
Quadrupole time-of-flight mass spectrometry	Waters	SYNAPT XS
UNIFI	Waters		Data analysis software