アドベンチアル塩化カルシウムとエラスターゼ浸潤によるマウス腹部大動脈瘤モデル

要約

この原稿では、塩化カルシウムとエラスターゼを使用してマウス腹部大動脈瘤モデルを確立するためのプロトコルを提示し、以前のモデリング方法の利点を組み合わせています。このモデルは、腹部大動脈瘤の根底にある病態生理学的メカニズムを調査するために利用できます。

要約

腹部大動脈瘤(AAA)は、高い死亡率に関連する生命を脅かす疾患です。これは、動脈径が少なくとも50%増加する腹部大動脈の永久的な拡張を特徴としています。AAAの様々な動物モデルが導入され、病態生理学的変化を模倣し、AAAの根底にあるメカニズムを研究しています。これらのモデルの中で、塩化カルシウム(CaCl₂)およびエラスターゼ誘導AAAモデルは、マウスで一般的に使用されています。ただし、これらの方法には一定の制限があります。従来のブタ管腔内膵臓エラスターゼ (PPE) 灌流は、高い技術的困難と高い破裂率に関連していますが、PPE の傍静脈周囲投与では一貫性のない結果が得られます。さらに、CaCl₂誘導AAAモデルには、アテローム血栓症や動脈瘤破裂などのヒトAAAの特徴がありません。したがって、CaCl₂ とPPEの併用アプリケーションは、AAA動物モデルで成功率を高め、より大きな直径の増加を誘発するアプローチとして提案されています。この原稿は、腹部大動脈の腎下部分におけるPPEおよびCaCl₂ の大動脈周囲浸潤を通じてマウスAAAモデルを確立するための包括的なプロトコルを提示します。このプロトコルに従うことで、技術的なシンプルさと再現性で約90%のAAA形成率を達成することができます。さらなる超音波検査および組織学的実験により、このモデルがヒトAAAで観察された形態学的および病理学的変化を効果的に再現することが確認されています。

概要

腹部大動脈瘤 (AAA) は、腹部大動脈の直径が 50% を超えるか、最大大動脈直径が 3 cm を超えることと定義されます。この状態は生命に重大な脅威をもたらし、動脈瘤破裂時の死亡率は約90%です^1,2,3。現在、開腹手術による修復と血管内大動脈弁修復術 (EVAR) が、AAA 患者 ^4,5,6 に対して利用可能な唯一の介入です。しかし、外科的適応がない患者において、動脈瘤形成を阻害したり、腹部大動脈の成長速度を遅らせたりする治療の有効性を裏付けるエビデンスは不十分^{である7。}それにもかかわらず、動脈瘤の最大直径の持続的な監視、血圧制御、抗血小板療法、スタチンなどの非特異的治療は、突然の動脈瘤破裂や潜在的な心血管および神経学的イベントのリスクを可能な限り減らすために使用されます。それにもかかわらず、動脈瘤破裂の予防における抗血小板薬とスタチンの役割は依然として議論の余地があり、さらなる研究が必要です....

プロトコル

動物実験プロトコルは、National Institute of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals(NIH Pub No. 86/23, 1985)に準拠し、四川大学西中国病院の動物管理委員会によって承認されました(承認番号202311300012)。この研究では、8〜10週齢のC57/B6J雄マウスを使用しました。使用した試薬や機器の詳細は 、資料表に記載されています。

1. 術前準備

1. 動物を入手し、標準条件(温度24°C、湿度40%-50%、12時間の明暗サイクル)できれいな水で通常の食事を与えます。
2. 綿パッドを40 mm x 4 mmのストリップにカットし、はさみ、鉗子、その他の手術器具と一緒に滅菌します。
3. 動物を麻酔器の誘導室に入れ、3%〜3.5%のイソフルランを使用して迅速に麻酔を誘発します(施設で承認されたプロトコルに従います)。さらに、先制鎮痛薬としてブトルファノール(1 mg / kg、筋肉内注射)を処方します。.
   1. マウスが痛みの刺激に反応しなくなったら、マウスをチャンバーから取り出し、マウスにマスクを置き、1%〜1.5%のイソフルランで麻酔の深さを維持します。5〜1....

ディスカッション

AAAの分子メカニズムの研究には、安定した動物モデルが必要です。その結果、1960年代にEconomouらによって最初に開発されて以来、数多くのAAA動物モデルが確立されてきた²⁹。これらのモデルの中で、CaCl₂は、その費用対効果、技術的な単純さ、および信頼性の高い再現性のために、げっ歯類に頻繁に採用されています。しかし、血管周囲CaCl

資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Anesthesia Machine	RWD	R550
Butorphanol	Jiangsu Hengrui Pharmaceutical Co., Ltd	220608BP	1ml: 1mg
C57BL/6JGpt Male Mice	GemPharmatech	N000013
Calcium Chloride	Sigma Aldrich	C4901	100 g
Carprofen	MCE	HY-B1227	100 mg
Chow Diet	Dossy Experimental Animals Co.Ltd
Digital Caliper	Greener	IP54
Ethanol	Jinhe Pharmaceutical Co.Ltd	539682	75%/500 mL
EVG Staining Kit	Solarbio	G1597
GraphPad Prism	Graphpad		Ver 9.0.0
H&E Staining Kit	Servicebio	G1076
Insulin Syringe	BD	2143420
Isoflurane	RWD	R510-22-4	100 mL
Masson Staining Kit	Servicebio	G1006
Normal Saline	Servicebio	G4702	500 mL
Paraformaldehyde	Biosharp	BL539A	4%/500 mL
PBS, 1x	Servicebio	G4202	500 mL
Porcine Pancreatic Elastase	Sigma Aldrich	E1250	100 mg
Povidine Iodine	Yongan Pharmaceutical Co.Ltd		5%/100 mg
Prolene Polypropylene Suture	Ethicon LLC	8709H
Rodent Ultrasound System	Fujifilm	Vevo 3100LT
Stereo Microscope	Olympus	SZ61
Ultrasonic Couplant	Keppler	KL-250	250 g