Preparation of Germ-Free Nasonia Rearing Medium (NRM)

はじめに、市販のルシリア・セリカータの蛹を一枚の紙の上に置きます。未発達の幼虫、暗い古い蛹、空の瞳孔の殻、おがくず、またはその他の不純物を捨てます。茶色がかった赤い色の若い蛹をビーカーに移し、蛹を脱イオン水に浸します。

ビーカーをティンフォイルまたはガーゼで包み、振って蛹の表面不純物を取り除きます。それから水を捨てなさい。きれいにした蛹をニンニクプレスのフィルタータンクに入れ、強く絞ります。

次に、蛹組織液を50ミリメートルの滅菌遠心管に集め、摂氏4度で10分間25, 000 x gで遠心分離します。22ゲージの滅菌針を使用して、タンパク質層を新しい50ミリメートルのポリプロピレン遠沈管に集め、市販の液体ショウジョウバエ培地をタンパク質抽出物に等しい比率で加えます。混合物から異なるサイズの粒子を除去するには、異なる孔径の濾紙を備えた真空ろ過システムを使用してそれを濾過する。

目詰まりを防ぐために、流れが遅くなったらろ紙を交換してください。ろ液を遠心分離したら、0.22マイクロメートルのシリンジフィルターで上清を滅菌し、調製したナソニア飼育培地(NRMアリコート)を摂氏20度でさらに使用するまで保管します。