まず、約40匹のルシリア・セリカータの蛹を、1.5日間交尾した新興の成体のオスとメスのナソニアバチに寄生させます。寄生後12〜24時間以内に、滅菌解剖針を使用して蛹殻の一端を慎重に開きます。殻のもう一方の端を持って、スズメバチの胚を見つけます。
次に、胚をPBSで湿らせた滅菌セルストレーナーに移します。20〜30個の胚を移植したら、1, 000マイクロリットルの10%次亜塩素酸ナトリウム溶液とそれに続く滅菌PBSと70%エタノールで洗浄します。最後に、滅菌PBSで3回洗浄します。
次に、PBSで予め湿らせたポリプロピレンメッシュシートを24ウェルプレートに入れる。滅菌した小さなブラシを使用して、スズメバチの胚を細胞ストレーナーからポリプロピレンメッシュシートにそっと移します。スズメバチの飼育のために、50マイクロリットルの調製されたNRMをシートと共に各ウェルに加える。
次に、各ウェルの間に1ミリリットルの滅菌水を追加して、成長のための湿った環境を維持します。翌日、アルコール消毒ピンセットを使用して幼虫を含むポリプロピレンメッシュを1つのウェルから別のウェルに移し、50マイクロリットルの平衡NRMを追加します。9〜11日の給餌後、幼虫の80%以上が白または黄色の蛹に成長するはずです。
次に、メッシュをきれいなウェルプレートに移します。本研究では、幼虫から蛹までの無菌バチの生存率は、NRMバージョン3で無菌バチを飼育した場合と比較して有意に改善されました。また、無菌ハチと従来飼育バチでは発生期間に差はなかった。
