乳鉢と乳棒を使用して、10ミリグラムの凍結乾燥マイコバクテリウムパラ結核を微粉末に粉砕することから始めます。5ミリリットルの不完全フロイントアジュバントを添加して、1ミリリットル当たり10ミリグラムの原液を得る。在庫はマイナス4°Cで保管してください。
免疫する前に、原液を希釈してください。次に、MOG 35-55ペプチドを1ミリリットルあたり2ミリグラムに希釈し、マイナス20°Cで保存します。濃厚なエマルジョンが形成されるまで、等量のMOG 35-55をホモジナイザーを備えた5ミリリットルのチューブ内のアジュバントと混合します。
10秒間混合するごとに、溶液を氷上に20秒間置き、チューブを回転させてすべての溶液を回収します。エマルジョンを1ミリリットルのシリンジに移し、気泡がないことを確認します。次に、27ゲージの針を取り付けます。
皮下、麻酔をかけたマウスの腰部に200マイクロリットルのエマルジョンを注入する。次いで、免疫後0日目および2日目に百日咳毒素の用量を腹腔内注射する。すべてのマウスは、14〜17日で観察された障害の単一のピークを特徴とする急性単相性疾患を示し、その後10日間にわたって症状が部分的に回復しました。
パラ結核菌を免疫したマウスは、免疫後に発症が早く、急性期に重症度が高かった。両方のグループは同様の体重を示しました。EAEマウス脾臓細胞に対して実施した滴定チミジン取り込みによる増殖アッセイは、ペプチドMOG 35-55に対して強い増殖応答を示したが、オボアルブミンに対しては示さなかった。
細胞蛍光分析では、CFA免疫マウスと比較して、M.paratuberculosis免疫EAEマウスの脾臓におけるTリンパ球、樹状細胞、および単球の増加が示されました。ヘマトキシリンおよびおよびエオジン組織分析により、脳および脊髄における典型的な血管傍および髄膜単核炎症浸潤が明らかになりました。
