Affinity Chromatography Mediated Fibrinolytic Enzymes Purification from Crude Protein Extracts

シプンクルスヌーダス腸から抽出した粗タンパク質を0.22マイクロメートルのフィルター膜でろ過します。後で使用するために、このサンプルを摂氏4度で保管してください。アルギニンアガロースマトリックス培地を5ミリリットルの空のクロマトグラフィーカラムにロードして、アルギニンアガロースマトリックスアフィニティークロマトグラフィーカラムを充填します。

同様に、リジンアガロースマトリックス培地を空のクロマトグラフィーカラムにロードすることによって、リジンアガロースマトリックスアフィニティークロマトグラフィーカラムをロードします。アフィニティークロマトグラフィーカラムを二重蒸留水、それに続く塩酸トリスバッファーで平衡化します。ろ過したタンパク質サンプルを事前に平衡化したカラムにロードします。

カラムを5倍量の0.02モル塩酸トリスバッファーで洗浄してから、0.15-0.25-0.35-0.45-0.55-および0.65モルの塩化ナトリウム溶液で連続して溶出します。0.15モルの塩化ナトリウム溶出に溶出ピークが現れたら、画分を5ミリリットルのチューブに回収します。3キロダルトンの超遠心フィルターを使用して溶出サンプルを濃縮し、後で使用するためにこのサンプルを摂氏マイナス80度で保存します。

タンパク質溶液をアルギニンアガロースマトリックスアフィニティーカラムにロードすると、フロースルーピークは約40〜66分に現れました。グラジエント溶出段階では、0.15モルの塩化ナトリウムによる溶出は約94〜110分でピークに達しました。タンパク質溶液をリジンアガロースマトリックスアフィニティーカラムにロードすると、フロースルーピークは約38〜60分に現れました。

グラジエント溶出段階では、0.15モル塩化ナトリウムによる溶出は80〜86分でピークに達しました。