Preparation of Stria Vascularis Single-Nucleus Suspension

マウスの耳から解剖した脈理血管組織を2ミリリットルのDounceホモジナイザーでホモジナイズし、氷上で10〜20ストロークします。組織を氷上で25分間溶解します。次に、組織を30ミクロンのフィルターでろ過し、ろ液を500Gで摂氏4度で5分間回転させます。

上清を除去し、細胞ペレットを1ミリリットルの核洗浄および再懸濁バッファーに再懸濁する。次に、細胞を10ミクロンのフィルターでろ過し、500Gで摂氏4度で5分間遠心分離します。上清を除去し、50マイクロリットルの核洗浄および再懸濁バッファーに再懸濁します。

トリパンブルー染色後、5マイクロリットルの細胞懸濁液を50マイクロリットルの1X PBSに希釈し、細胞をカウントします。単一核捕捉を準備するには、目的の核密度のサンプルをチップにロードします。