Collection of Drosophila Embryos and Preparing Them for Optogenetic Stimulation

ショウジョウバエの胚の収集を開始するには、カップからリンゴジュースプレートを交換し、プレートにラベルを付けます。プレートの表面をハロカーボンオイル27の薄層で覆います。次の位置、直立したステレオスコープのステージ上のオレンジ色の赤いプラスチックシールド。

リンゴジュースプレートをオレンジ色の赤い盾の上に置きます。実体顕微鏡の透過光をONにして試料を照らします。ピンセットを使用してリンゴジュースプレートから5〜15個の胚を収集します。

約1.5 x 1.5センチメートルの大きさのペーパータオルで胚をそっと拭きます。次に、プラスチックトランスファーピペットを使用して新しいペーパータオルに、準備したての40%漂白剤を数滴加え、ペーパータオルを漂白剤の薄層で覆います。胚を乾いたペーパータオルから漂白剤に浸したペーパータオルに移し、胚が漂白剤に浸されていることを確認します。

胚が脱絨毛するまで2分間待ちます。デコリオン後、ピンセットを使用して、ペーパータオルを大きなティッシュペーパーで拭き取り、余分な漂白剤を取り除きます。胚を脱イオン水で8回すすぎ、残留漂白剤を取り除きます。

まつげツールを使用して、胚をペーパータオルから35ミリメートルのガラス底皿に移します。次に、胚を完全に覆うために皿に脱イオン水を加えます。最後に、まつげツールを使用して胚の位置と向きを微調整します。

胚の入った皿を遮光ブラックボックスに入れて、転写プロセス中の光への暴露からサンプルを保護します。