Cell Culture and Drug Treatment in the Human Embryonic Kidney 293 (HEK293) Cell Line

細胞培養を開始するには、細胞培養に必要なDMEM培地と溶液を調製します。1 x 10から6番目のHEK293細胞を、処理条件とコントロールごとに60ミリメートルプレートまたは6ウェルプレートに播種します。翌日、選択した誘導物質であるDNA-タンパク質架橋(DPC)で細胞を処理します。

DPC、そのユビキチン化およびSUMO化を誘導するには、20分、60分、および180分、または非酵素的DPCの場合は2時間で細胞を収集します。TOP1-DPCのPAR化を誘導するには、細胞を10マイクロモルのポリ-ADP-リボースグリコハイダーゼまたはPARG阻害剤PDD00017273で1時間前処理してから、20マイクロモルのカンプトテシンで20、60、および180分間同時処理します。