Actinobacteriophage Infection and Absorbance Measurement

防曇液とアガロースを入れた前もって準備したマイクロプレートを取ります。75マイクロリットルの細菌をカラム3〜10にピペットで入れます。次に、75マイクロリットルの滅菌ファージバッファーを、ファージなしのポジティブコントロールとしてカラム3および4のウェルに追加します。

各添加後に上下にピペッティングして溶液を混合します。次に、75マイクロリットルのファージをさまざまな濃度でカラムに加え、各添加後に再び上下にピペッティングして各溶液を混合します。0.5インチのラベリングテープを使用してプレートの両側を貼り付けると、ガス交換が可能になりながらプレートが部分的に密閉されます。

マイクロプレートシェーカーでプレートをインキュベートし、マイクロプレートリーダーを使用して光学濃度を測定します。次に、光学密度測定を使用して、コントロールおよび感染成長曲線を生成します。成長曲線は、ファージを添加したウェルにおける経時的な細菌吸光度の減少によって示される生産的なファージ感染を示す。

細菌密度のこの減少は、細菌がファージの宿主範囲外にある場合は見られません。