Generating DNA Probes to Label the Sex Chromosomes of Anopheles Mosquitoes and Preparing the Hybridization Solution

まず、市販の抽出キットを使用して、蛹または成虫のオスのハマダラカからゲノムDNAを抽出します。次に、PCR反応混合物を調製する。PCR反応を行い、18個のSR-DNAおよびサテライトAGY 53Bを標識します。

ハイブリダイゼーション溶液の調製のために、5マイクロリットルの標識DNAプローブを1.5ミリリットルのチューブに加える。次に、5マイクロリットルのサケの精子DNAを追加します。2容量の100%エタノールと0.1容量の3モル酢酸ナトリウムを添加してDNAプローブを沈殿させます。

マイナス20°Cで2.5時間以上保管してください。チューブを17, 000 Gで20分間、摂氏4度で遠心分離します。次に、エタノールを除去し、ペレットを室温で暗所で20分間風乾します。

次に、ハイブリダイゼーションバッファーを1.5ミリリットルのチューブに調製する。溶液を1分間ボルテックスし、デキストラン硫酸を摂氏37度で30分間溶解させます。ハイブリダイゼーション溶液を得るには、DNAパレットを20〜30マイクロリットルのハイブリダイゼーションバッファーに溶解する。

溶液を1分間ボルテックスします。すばやく回転し、チューブを暗闇で摂氏37度で保管します。