まず、YPDプレートから5ミリリットルのYPR培地にコントロールおよび組換え可能な酵母株を接種し、摂氏30度、200RPMで一晩培養します。次に、100ミリリットルの新鮮なYPR培地に2ミリリットルを接種し、摂氏30度、200RPMで一晩培養することにより、培養をスケールアップします。各菌株について、1, 800ミリリットルのオートクレーブ酵母ペプトン培地と200ミリリットルのオートクレーブ20%ラフィノース溶液を2つの5リットル三角フラスコに分注します。
各酵母株にそれぞれの培地で600ナノメートルで0.2の光学密度を接種し、200RPMで約6時間、または細胞が所望の光学密度1.0に達するまでインキュベートします。200ミリリットルの2%ガラクトースと110マイクロリットルの酵母交配因子アルファまたはYMFAを同時に添加して、G1期の細胞を停止させ、2時間インキュベートします。細胞懸濁液を 1 リットルの遠心分離バケツに移し、バケツを 6 、 000 G および 4 °Cで 10 分間遠心分離します。
上清を捨て、細胞ペレットを10〜15ミリリットルの蒸留水に再懸濁します。次に、25ミリリットルのシリンジをルアープラグで密封し、水で満たされた50ミリリットルの円錐形のチューブの中に入れます。細胞懸濁液をシリンジアセンブリに移します。
遠心分離バケツを5ミリリットルの蒸留水で洗浄し、残りの細胞を回収します。次に、アセンブリを室温で2, 397 gで10分間遠心分離し、上清を廃棄します。次に、シリンジからルアープラグを取り外し、細胞を液体窒素に押し出して細胞スパゲッティを形成します。
最後に、冷凍セルスパゲッティを50ミリリットルの円錐形のチューブに移し、さらに使用するまで摂氏マイナス80度で保管します。
