市販のコーヒーグラインダーの冷却を開始するには、約30〜50グラムのドライアイスを2回、毎回30秒間粉砕します。ドライアイスパウダーを捨て、予冷したコーヒーグラインダーで3グラムの冷凍酵母細胞スパゲッティと約30〜50グラムのドライアイスを混ぜます。キャップとグラインダーの接合部をパラフィルムで密閉します。
酵母細胞のドライアイスミックスを10回、それぞれ30秒間混合し、各ラウンドの間に30秒の間隔を空けます。得られた酵母細胞のドライアイス粉末を、清潔で乾燥したヘラを使用してプラスチックビーカーに移します。ドライアイス蒸発後、プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を含む2.25ミリリットルの磁気ビーズ(MBバッファー)を酵母細胞粉末に加えます。
細胞バッファー混合物を激しくピペッティングした後、細胞懸濁液を15ミリリットルのコニカルチューブに移します。次に、DNA用の粗細胞抽出物から0.1%のサンプル、タンパク質分析用の0.05%のサンプルをマイナス20°Cで保存します。残りの細胞懸濁液を低結合性の2ミリリットルの反応チューブに移し、チューブを遠心分離して細胞破片を分離します。
完了したら、すべての上清を1つの15ミリリットルのコニカルチューブに引き込みます。ここでも、DNAには上清の0.1%をマイナス20°Cで、タンパク質分析には上清の0.05%を保存します。次に、500マイクロリットルの免疫グロブリンGカップリング磁気ビーズスラリーを、プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を含む500マイクロリットルの低温MB緩衝液とともに、摂氏4度で20RPMで回転させながら、それぞれ5分間、2回洗浄します。
磁気ビーズを500マイクロリットルの低温MBバッファー中で摂氏4度で1時間、20RPMで回転させてインキュベートした後、磁気ラックを使用してビーズから上清を除去します。平衡化した磁気ビーズスラリーを先に得られた細胞溶解物と混合し、15ミリリットルのコニカルチューブに引き込みます。摂氏4度、20RPMで2時間インキュベートした後、完全な磁気ビーズ細胞ライセート懸濁液を低結合反応チューブに移します。
磁気ラックを使用して、目的のクロマチン環を運ぶ磁気ビーズを細胞ライセートから分離します。残りのフロースルーを各チューブから新しい15 mmリットルのコニカルチューブに移し、DNAおよびタンパク質分析のために一部のサンプルを摂氏マイナス20度で保存します。次に、各15 mmリットルのコニカルチューブから磁気ビーズを300マイクロリットルの低温MBバッファーに懸濁し、ビーズを1つの反応チューブに結合します。
プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を含む750マイクロリットルのコールドMBバッファーを使用して、摂氏4度で、20RPMで回転させながら、それぞれ10分間の洗浄を5回行います。次に、プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を含まない750マイクロリットルの低温MB緩衝液で最終洗浄を行います。調製したビーズを、プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を含まない40マイクロリットルの低温MB緩衝液に懸濁します。
