まず、約400マイクロリットルの解剖およびイメージング媒体を3ウェル解剖皿の各ウェルにピペッティングします。解剖顕微鏡下で作業し、実験用幼虫を解剖およびイメージング媒体で洗浄して、食物残渣を除去する。解剖顕微鏡下で作業を続けながら、1組のピンセットを使用してマウスフックで幼虫を保持します。
別のピンセットで、幼虫の約1/3を後側から慎重に切り取ります。次に、1組のピンセットでマウスフックで幼虫を持ちながら、もう1組のピンセットを使ってキューティクルをマウスフックに向かって優しくブラッシングします。同時に、幼虫全体が裏返しになるまで、マウスフックを保持しているピンセットで内側に押します。
幼虫を反転させて、キューティクルへの接続を維持しながら中枢神経系や他の組織を露出させます。誤って除去しないように、中枢神経系(CNS)を見つけます。ピンセットを使用してCNS以外の組織をそっと取り除き、CNSと脳のみをキューティクルに付着させます。
軸索接続を切断してキューティクルから脳を解放するには、マイクロダイセクションハサミを使用して、脳葉の下をそっと切ります。次に、腹側神経索の下の接続を切断します。幼虫をバッチで解剖して、解剖時間を20分未満に保ちます。
解剖した脳を解剖および画像化媒体を含むウェルに移します。3時間以上続くイメージングの場合は、培地に脂肪体を補給します。
