まず、麻酔をかけた動物を脳定位固定装置フレームに移し、次に頭をノーズコーンとイヤーバーに固定します。動物の脈拍、脈拍、酸素飽和度、血圧、体温を測定するためのプローブを配置します。眼軟膏を塗ります。
脱毛クリームで髪を取り除き、ヨウ素とアルコールの3つの通路で頭皮を無菌的に洗浄します。終末期の研究では、外科用ハサミを使用して頭皮を取り除き、ランボイド縫合糸から尾側に約3ミリメートル、ブレグマの正面に3ミリメートルの頭蓋骨を露出させます。頭皮を頭頂部に切除して、側頭筋の内側を両側に露出させます。
次に、頭蓋骨が清潔で乾燥しているように、残っている皮下結合組織を取り除き、刺激電極を塗布します。次に、頭蓋骨に接触する電極の側面に導電性ゲルを塗布します。この側頭筋に電極を置き、断続的な場所の端の周りに外科用瞬間接着剤で固定します。
次に、電極を乱すことなく、側頭筋と両側の頭皮にリドカインペーストを塗布します。頭蓋外刺激電極のインピーダンスをテストします。次に、頭蓋内記録電極のないレーザースペックルイメージング装置の下にマウスを置きます。
2つの頭蓋骨tACS電極間に刺激を加えるには、定電流を供給する市販のヒト互換刺激デバイスを使用します。刺激の前に、明確なベースラインを取得します。頭蓋骨の両側にさまざまな振幅で短時間のオン/オフ刺激を加えます。
刺激後の明確なベースラインを確保してください。頭蓋外刺激電極を頭蓋骨の両側に横方向に4ミリメートル配置した後、バリ穴の位置を正中線の両側に2ミリメートル、互いに4ミリメートル離れ、矢状縫合糸に直交するようにマークします。次に、ガラス電極用に2つのバリ穴を開けます。
これらのバリ穴を滅菌鉱物油で満たして、頭蓋外電極から頭蓋骨への電流の侵入を防ぎます。次に、プールされたガラス微小電極に0.2モルの塩化ナトリウムを充填し、マイクロマニピュレーターを使用して矢状縫合糸に横方向に配置された2つのバリ穴に配置します。ガラスの微小電極をバリ穴に入れます。
次に、バリ穴留置後の頭蓋外刺激電極のインピーダンスをテストして、これらが脳への電流の流れを妨げないことを確認します。頭蓋外刺激による脳血流を測定するには、頭蓋内記録電極を備えたレーザースペックルイメージング装置の下にマウスを置きます。脳に挿入したら、さまざまな対称的な深さで深さプロファイルを実行し、これらのガラス微小電極が大脳皮質内で約1ミリメートルになるようにします。
デジタイジングシステムを使用して、ドップラープローブとマイクロ電極からの連続データを、十分に安定したベースライン期間にわたって記録します。次に、オン/オフ刺激を適用し、追加の頭蓋刺激をテストします。うつ病の広がりを誘発する実験では、頭蓋骨の右側に3番目のバリ穴を追加し、吻側から冠状縫合糸まで1.5ミリメートル、前頭後部縫合糸から外側に1ミリメートルを追加します。
後で適用するために、このバリ穴をKCLで埋めます。低強度tACSに応答して、脳血流の頭蓋内直接DC電気記録および両側レーザードップラー記録のデータが得られました。0.75ミリアンペアの刺激に反応して小さな反応が観察され、1ミリアンペアの刺激に反応してより大きな反応が見られました。
電気血流痕跡と脳血流痕跡の両方について、反応は頭蓋骨の右側と左側の間で非対称でした。発作時の脳血流のレーザースペックル頭蓋骨画像では、刺激に反応して血流が増加し、皮質全体に均一に拡散することが示されました。刺激後、血流はベースラインに戻りました。
