解剖したマウスの膝関節を培養皿に入れることから始めます。培養液を吸引し、新鮮な培地を加える。洗濯を3〜4回繰り返します。
次に、実体顕微鏡下で、微細な点ピンセットを使用して培養液内のすべての関節を引っ張って脱臼させます。骨を折らないように注意しながら、脛骨とできるだけ多くの血管、腱、靭帯を取り除きます。サンプルごとに2つの15ミリリットルチューブを準備します。
ピンセットを使用して、軟部組織で脱臼した骨を最初のチューブに移します。両方の後足から得られた各サンプルについて、4ミリリットルの消化培地をチューブに加える。残留細胞および組織断片を収集するために、培養液を解剖皿から第2の15ミリリットルチューブに移す。
培地を500 Gで室温で5分間遠心分離します。上清を除去した後、ペレットを1ミリリットルの消化培地で再懸濁する。そして、この溶液を最初の15ミリリットルのチューブに移して、ほとんどすべての組織、合計5ミリリットルの消化培地が含まれるようにします。
次に、ハイブリダイゼーションオーブンで振とうしながら、摂氏37度で60〜120分間サンプルを消化します。インキュベーション後、ピペッティングでサンプルを混合し、40ミクロンのセルストレーナーを通して細胞溶液を50ミリリットルのチューブにろ過します。10ミリリットルの培養液をセルストレーナーを通してチューブに加えます。
室温で5分間、300 Gで遠心分離します。上清を除去し、細胞ペレットを10ミリリットルの培地で再懸濁する。遠心分離を繰り返し、上清を捨て、ペレットを2ミリリットルの培養液で再懸濁します。
