Isolation of Synovial Fibroblasts

マウス膝関節の消化後に得られた細胞懸濁液を使用し、コラーゲンコートディッシュに懸濁液を播種します。5%二酸化炭素を含む加湿雰囲気中で摂氏37度で1時間皿をインキュベートします。インキュベーション後、ピペットを用いて非接着細胞を回収する。

コラーゲンコートディッシュを培養液で洗浄し、培地を回収する。その後、ディッシュに新鮮な培地を加え、線維芽細胞様形態を示す接着細胞を培養する。ハンク平衡塩溶液中の0.05%トリプシンで細胞を処理し、サブコンフルエント細胞を継代します。

高純度の線維芽細胞様細胞が必要な場合は、継代を繰り返し行います。継代が5回未満のセルを使用してください。炎症性関節炎組織から線維芽細胞様細胞を単離し、7〜8週齢の雌C57BL/6マウスにおいて誘導した。

単離された細胞の純度をRTQPCR mRNAによって評価した、単離された細胞におけるVcam1、Cdh11、Col6a1、およびCsf1などの滑膜線維芽細胞マーカーの発現は、線維芽細胞に富む画分が滑膜炎組織から単離されたことを示唆した。