ガラス製のパスツールピペットを使用して、溶かした1%アガロースをビニールレコードに一滴垂らして、アガロースパッドの準備を開始します。レコード上の線が水平または垂直になるようにスライドガラスを向け、スライドをアガロース滴にすばやく30秒間置きます。レコードからスライドガラスを取り除き、ステレオスコープの下に新たに調製した約5マイクロリットルの5ミリモルレバミゾールを追加します。
ワームの入ったチューブをそっとはじき、5〜10マイクロリットルをアガロースパッドに移してワームを取り付けます。反復ごとに約 40 匹の線虫が存在するように、追加される線虫の数を見積もります。まつげピックを使用してワームを一列に並べ、ガラスのカバーガラスをスライドに置きます。
漂白プロトコルを使用して残りの線虫から胚を単離し、OP50-1細菌を播種した35ミリメートルNGMプレートに250個の胚を播種します。蛍光ステレオスコープの下で、GFPフィルターセットを使用し、タリーカウンターを使用して、各繰り返しのスライド上のGFP陽性線虫とGFP陰性線虫の数をカウントして記録します。各世代の生殖細胞系における核GFPシグナルの手動スコアリングは、GFP RNAiで処理されたスコアリングされたP0およびF1線虫において導入遺伝子のサイレンシングが完全に浸透していることを示しました。
F2世代では、GFPサイレンシングの遺伝を示す人口の割合は約50%であったが、F5世代では、人口の過半数がサイレンシングの遺伝を示さなかった。F10世代までに、すべての線虫がGFPを発現し、遺伝は検出されませんでした。
