Formaldehyde Crosslinking of the F1 Generation of Caenorhabditis elegans for ChIP

まず、最終濃度1.8%のホルムアルデヒドをワームの入ったチューブに添加し、チューブを室温で6分間回転させます。その後、直ちにチューブを液体窒素で凍結し、サンプルを摂氏80度で保管します。ホルムアルデヒド架橋サンプルを室温の水浴で3分間解凍し、室温で16分間回転させます。

1.25モルのグリシンを125ミリモルの最終濃度まで、室温で5分間回転させます。このステップに続いて、サンプルを氷上または4度に保ち、磁気ビーズが溶出するまで氷冷バッファーを使用します。サンプルを1000gで3分間遠心分離した後、1ミリリットルのPBSTXで3回洗浄します。

その後、1ミリリットルの再懸濁緩衝液で2回洗浄します。最後の洗浄後、総容量がペレット容量の少なくとも3倍、最低100マイクロリットルになるように、十分なバッファーを残します。