Autofluorescence Blocking and Antigen Retrieval in Tissue Samples

まず、製造元の指示に従って、10倍濃縮クエン酸塩、ターゲット賦活化溶液、またはpH6のTRSを調製します。脱イオン水で1:10の比率に希釈します。次に、プラスチック製の染色ジャーで溶液を摂氏96度に加熱します。

スライドラックからスライドを取り出し、ウェットチャンバーに入れます。次に、自家蛍光低減剤を各組織サンプルに1〜2滴ピペットで移し、サンプルを5分間インキュベートします。スライドをスライドラックに戻し、60%エタノールで上下に1分間すすぎ、未使用の自家蛍光低減試薬を取り除きます。

スライドラックを脱イオン水に5分間浸します。スライドを抗原賦活化のために予熱したTRSバッファーを入れた染色ジャーに移します。スライドをウォーターバス中で摂氏96度で10分間インキュベートします。

染色ジャーを取り出し、室温まで約60〜90分間冷まします。次に、スライドを瓶に入れたままTRSを取り出します。0.05%Tweenを含むTRIS緩衝生理食塩水でスライドをpH 7.4でそれぞれ3分間、スライドを2回すすぎ、残っているTRS残留物を除去します。

スライドをウェットチャンバーに入れます。スライドの余分な水分を紙ティッシュで優しく拭き取り、疎水性バリアペンで各サンプルを囲み、抗体溶液が流出しないようにします。