適切に配置された手術室内で処置を開始するには、麻酔をかけられた豚を胸骨横臥位に置き、接続されたすべてのラインとチューブが固定されていることを確認します。傷つけた部分に残った毛を、脱毛クリームで取り除きます。創傷部位を滅菌した後、滅菌火傷テンプレートと外科用皮膚マーカーを使用してその領域に印を付けます。
コントロールユニットの設定値を摂氏150度に調整して、バーナーを設定します。最低設定値は摂氏145度、最高設定値は摂氏155度です。加熱されたステンレス鋼ブロックを火傷装置に接続して使用し、ブロックを皮膚に60秒間置いて、全層の火傷創を作成します。
ブタの識別時刻と日付が記載されたプラカードを含め、ブタの背中全体のデジタル写真を撮ります。次に、ブタID、創傷ID、および時点を表示する定規とプラカードとともに、各傷の画像を個別に撮影します。レーザースペックルイメージングまたはLSIを使用して創傷微小血管灌流をリアルタイムで評価するには、LASCA血液灌流イメージャーを使用して1回の記録ですべての創傷を画像化します。
経表皮水分損失またはTEWLを測定するには、創傷組織と接触するTEWLプローブチップに清潔なプローブカバーを置きます。各傷口を5回、最初に中央で、次に各角で測定します。次に、すべての測定値をスプレッドシートにエクスポートします。
正中線または脊柱から超音波プローブで創傷をスキャンし、正常な皮膚から開始し、正常な皮膚に再び到達するまで創傷の上のブタの外側に向かって移動することにより、高調波超音波またはHUSDマッピングを実行します。Bモードと組織エラストグラフィモードの両方で、各創傷のスキャンパターンに従います。各創傷がBモードとエラストモードの両方で画像化され、創傷ごとに2つの記録が行われた後に注釈を変更します。
すべてのイメージングが完了したら、火傷の傷口を透明なフィルムドレッシングまたはテストドレッシングで個別に覆います。次に、大きな透明フィルムドレッシングを創傷領域全体に置きます。豚の胴体全体にロールガーゼの2層目をゆるく塗り、傷口から滲み出る液体を吸収します。
ガーゼを柔軟な弾性包帯の層でゆるく覆います。弾性包帯を4インチの弾性テープの最終層で覆います。包帯の完了時に麻酔ガスを中止した後、豚を少なくとも5分間酸素にとどめます。
火傷後3日目に火傷を接種するには、ピペットを使用して露出した創傷の表面に接種物を分散させ、使い捨てのスプレッダーを使用して均等に広げます。イメージング後の分析のために組織生検を収集するには、創傷の周囲に0.5%ブピバカインを浸潤させます。サイズ10の刃の使い捨てメスを使用して、傷口の一方の端からもう一方の端まで3〜4ミリメートル幅のストリップを切断し、両側に正常な皮膚の小さなマージンを残します。
創傷床または創傷縁のいずれかから創傷から6ミリメートルのパンチ生検を切り取ります。検体が採取された後、滅菌ガーゼで創傷をそっと押して止血します。傷口を非接着性包帯で覆い、前述のように包帯を巻きます。
ヘマトキシリン染色およびエオシン染色による生検サンプルの分析では、すべての組織学的皮膚層の歪みと壊死が示されました。確立されたバイオフィルムは、接種後7日目にコロニー形成ユニットによってさらに検証されました。電子顕微鏡イメージングと免疫蛍光染色をスキャンします。
火傷創は、接種後7日目までに創傷表面に厚い生体膜を示し、感染とバイオフィルムの形成を確認しました。創傷面積は14日目までに縮小し始めたが、56日目には元の創傷サイズの約25%まで治癒が不完全であり、創傷の慢性化が認められた。創傷の慢性化と創傷治癒の障害は、TEWLによってさらに確認され、測定されたすべての時点で高い経表皮水分損失を示しました。
このことは、タイトジャンクションタンパク質であるZO-1およびZO-2の抑制、および皮膚バリア機能の回復障害によっても確認されました。
