野生の大豆、S.Americanum、および地元の種類のカボチャの種子を集めることから始めます。1センチメートルの深さでバーミキュライトに種をまき、徹底的にそれらに水をまきます。相対湿度約70%の成長チャンバーで栽培します。
A.rhizogenes K599株を摂氏80度の冷凍庫から取り出し、摂氏28度の固体LB培地で48時間活性化します。次に、K599株の単一クローンを選択し、LB培地を含む1ミリリットルの液体抗生物質で12時間培養します。500マイクロリットルの細菌懸濁液をLB培地を含む固体抗生物質に均等に広げ、摂氏28度で24時間インキュベートします。
7日後、苗の子葉が広げられたら、滅菌した鋭いメスを使って胚軸の約0.5〜1センチメートルを切ります。一次根と胚軸の一部を捨てます。胚軸切開部をK599細菌でコーティングします。
湿ったバーミキュライトに苗を植え、A.rhizogenesを介した毛状根の形質転換を使用して、各種の30の植物に感染します。次に、4分の1強度のガンボーB5基本培地に5ミリリットルの再懸濁したK599細菌懸濁液で植物に水をやります。鉢を透明なビニール袋で覆い、成長室に入れます。
接種後約12日間植物を育てます。この時点で、新しい毛状の根が切開部位に生成され、通常は2〜5センチメートルの長さに達するはずです。540ナノメートルの緑色励起光と600ナノメートルの発光を備えたCAMI発光イメージングシステムを使用して、レポーター遺伝子DsRed2の発現を検出します。
野生ダイズ、S.americanum、カボチャの複合植物の根を自然励起光と緑色励起光の下で可視化します。
