まず、以前に放出カクテルを脳室内に注射した麻酔ラットに鎮痛剤を皮下投与します。.ラットを脳定位固定装置フレームに取り付けます。イヤーバーを使用して頭を固定し、前後への回転運動が妨げられないようにします。
首の後ろを適切に伸ばすために、頭を40度の角度で下向きに安定させます。カミソリで首の毛を剃り、滅菌綿棒で10%ポビドンヨードとアルコールを交互に3回、毎回3〜5秒間、異なる方向にこすりながら皮膚を消毒します。指先で、後頭隆起とアトラスの脊椎の間の丸い形の陥没領域を特定します。
マーカーを使用してこのポイントをマークします。1ミリリットルのシリンジを脳定位固定装置フレームに固定します。マークで皮膚に接触するように針を配置します。
鉗子を使用して、シリンジを皮膚の層に挿入しながら皮膚を持ち上げます。プランジャーを静かに引き戻して、シリンジ内に負圧を発生させます。脳脊髄液がシリンジに見えるまで針を徐々に挿入します。
この位置で針を安定させ、脳脊髄液のゆっくりとした流れを待ちます。120マイクロリットルまでの脳脊髄液をゆっくりと除去します。シリンジを慎重に回収します。
1ミリリットルの正常血清を腹腔内に投与して、実験動物の体液補給をサポートします。リキッドバイオプシーを400マイクロリットルの神経幹細胞培地と組み合わせ、後で使用するためにマイクロ遠心チューブを摂氏4度で保管します。その後、動物を手術後の監視エリアに移します。
搾乳生検の結果、神経幹細胞培養は平均3.17継代となり、9継代にも達しました。収集した細胞は、ポリ-D-リジンでコーティングされたウェルに播種され、接着性単層として増殖し、まれにニューロスフェアとして増殖しました。GFAP陽性であった新たに単離された細胞は、静止マーカーID3に対しても免疫陽性であり、NSEバイポーラ形態の特徴を有していた。
生検由来細胞と死後由来細胞の免疫細胞化学的比較により、採取した細胞のプロファイルは内因性上衣下帯細胞と類似していることが示されました。成長因子は、両方のサンプルでSOX2細胞の同時かつ有意な増加とダブルコルチン陽性神経芽細胞の減少をもたらしました。
