ゼブラフィッシュのヘッドレスト用のオメガシェイプヘッドバーを準備するには、油性モデリングクレイを3軸マイクロマニピュレーターに取り付けます。次に、ヘッドバーのアームを粘土に挿入し、ヘッドバーを水平に向けます。手術中に魚の体を所定の位置に保持するための大砲を準備します。
頭蓋骨の付着部位から余分な皮膚と水分を取り除くには、ペーパータオルを3センチ四方に切って4本の組織綿棒を用意します。次に、紙の正方形を対角線に沿って折り、チューブのような構造を作り、チューブの端を細かくねじります。0.03%TMSで魚を麻酔した後、0.01%TMSでシリンジ灌流を行い、処置全体を通して鎮静を維持します。
尾の先端から鰓までの尾側約1ミリメートルまで、湿らせた紙のティッシュで魚を包みます。次に、尾の端から鰓までの尾側約2ミリメートルまで魚を覆う紙のティッシュの周りに縦方向のスリットが入った柔らかいプラスチックチューブを巻き付けます。ペーパータオルをチューブに巻き付けます。
次に、プラスチック製のトランスファーピペットのバルブから切り取った柔らかいプラスチックチューブをペーパータオルに巻き付けます。包んだ魚を大砲に装填します。次に、メスを使用して、付着部位、小脳の吻側および鰓の上の頭蓋骨の2つの三角形の領域を覆っている皮膚を取り除きます。
次に、組織綿棒を使用して付着部位を乾かし、残っている皮膚を取り除きます。10マイクロリットルのピペットチップを使用して、各取り付け部位の中央にティッシュグルーを一滴塗布します。魚体を直立させ、ヘッドバーを取り付け部位に対して少し上、尾側に置きます。
次に、小さじ1杯のポリマーと4滴のクイックモノマーと1滴の触媒5を混合して歯科用セメントを調製します。混合物を15秒間均一に攪拌します。混合後すぐに、マイクロピペットと10マイクロリットルのピペットチップを使用して、セメントを付着部位と部位間の領域に塗布します。
次に、マイクロマニピュレーターを使用して、ヘッドバーをセメントにそっと押し付けます。ヘッドバーを残りのセメントで覆い、セメントが硬化するまで12分間待ちます。次に、カルシウムイメージングのための前脳への光アクセスを改善するために、メスを使用して終脳の上の皮膚を取り除きます。
硬化後、ヘッドバーから粘土を取り除きます。次に、マイクロマニピュレーター用の魚の投入モジュールを準備します。次に、カプセル全体を大砲から魚の積み込みモジュールのピッチアジャスターに移します。
マイクロマニピュレーターを使用して、ヘッドバーをヘッドステージの金属製の支柱の上に置いて魚を配置します。魚のピッチ角を少し大きくします。紫外線硬化型接着剤を塗布して、ヘッドバーを金属製の支柱に固定します。
次に、カプセルから魚を引き出し、ヘッドステージを半六角形の水槽内のベースプレートにロックします。手術後、動物を水槽の水に浸して麻酔から回復させます。
