Two-Photon Imaging of Zebrafish Forebrain

レーザーをオンにし、電源が安定するまで30分間待ちます。サンプルの波長を 920 ナノメートル、出力を約 50 ミリワットに設定します。頭部を拘束したゼブラフィッシュの入った記録チャンバーを実験台に置きます。

対物レンズを前脳表面の近くに配置します。行動を記録するには、タンクの両側にある810ナノメートルの赤外線ライトをオンにします。VR表示用の入力ソースを選択し、データの記録を開始します。

次に、レーザーシャッターを開き、フォトマルチプライヤチューブを有効にします。背側前脳が現れるまで、対物レンズを徐々に上げます。ピエゾアクチュエータを使用して複数の深度で画像を取得し、記録されるニューロンの数を増やします。

2光子カルシウムイメージングは、無傷の頭蓋骨を通して最大200ミクロンの深さの背側前脳の個々のニューロン活動を記録します。イメージング範囲には、古領域、Dm、cDc、rDc、およびゼブラフィッシュの成体の前脳の30%をカバーするDlの一部が含まれます。脳イメージング中に同時に行われる行動記録により、運動出力の神経相関を特定することができます。

イメージング中、尾の動きは目に見えるモーションアーチファクトを引き起こしてはなりません。